国家自然科学基金(30872153)
- 作品数：15 被引量：123H指数：6
- 相关作者：钱渊孙宇赵林清朱汝南邓洁更多>>
- 相关机构：首都儿科研究所首都儿科研究所附属儿童医院西藏自治区人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技计划项目北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- Virus profile in children with acute respiratory infections with various severities in Beijing, China被引量：10
- 2014年
- Zhu Runan Song Qinwei Qian Yuan Zhao Linqing Deng Jie Wang Fang Sun Yu
- 关键词：急性呼吸道感染病毒分布呼吸道合胞病毒疾病检测
- 来自肺炎患儿的A1基因亚型人偏肺病毒全基因组序列分析
- 2016年
- 人偏肺病毒（human metapneumovirus,HMPV）是婴幼儿呼吸道感染的重要病原之一。本研究目的在于分析在HMPV监测中发现的少见型别A1基因亚型BJ-1610的全基因组序列,为HMPV的进一步研究提供数据支持。BJ-1610来源于一名患有肺炎的3月龄女婴的鼻咽洗液标本。对该毒株进行全基因组RNA分段扩增、测序、序列拼接并分析其基因组特征、变异程度及是否存在重组等现象。BJ-1610株基因组全长为13 406nt（KU821121）。BJ-1610与HMPV参考株进行全基因和各蛋白核苷酸和氨基酸序列比较,显示全基因组的核苷酸相似性范围为81.2%-98.4%,其中相似性最高的为澳大利亚株（KC562226）,而SH和G基因则与其他澳大利亚株相似性更高。系统进化分析发现BJ-1610与HMPV A1基因亚型参考株位于同一分支,显示了与相似性分析相同的特征。对BJ-1610的膜表面蛋白F、SH和G蛋白序列进行分析结果显示,F蛋白最为保守,SH基因编码区的终止密码发生了突变,导致终止密码后移15位,长度由552bp变为567bp;G蛋白氨基酸序列突变较多,并导致N-糖基化位点的减少。HMPV作为儿童呼吸道疾病的重要病原之一,对其流行株基因组的分析将对其流行特征、遗传进化、致病机理、疫苗研制和抗病毒药物研发等方面的研究产生积极的推动作用。
- 郭春颖朱汝南孙宇赵林清邓洁王芳宋秦伟田润钱渊
- 关键词：儿童肺炎人偏肺病毒
- 人Boca病毒外壳蛋白VP2在杆状病毒中的表达及病毒样颗粒的构建被引量：2
- 2009年
- 为了得到结构与功能更接近于天然病毒的人Boca病毒（HBoV）主要外壳蛋白VP2,将来源于北京急性呼吸道感染患儿标本（BJ3722）的HBoV VP2基因编码区克隆至杆状病毒表达转移载体（pFastBac1）,通过转座反应获得重组Bacmid DNA,以这种DNA转染昆虫细胞Sf9。收获重组病毒及其昆虫细胞培养物,经SDS-PAGE并应用兔抗HBoV VP2高价免疫血清进行Western blot,以检测所表达的VP2蛋白。昆虫细胞经重组病毒感染后7~10d细胞完全裂解时,收获培养上清（VLPs-A）,或在感染后4~5d细胞裂解前收获细胞并将其裂解（VLPs-B）,经两次40%的蔗糖垫超速离心,所得的样品经Western blot和间接免疫荧光方法（IFA）检测,以确定VLPs的组分,然后应用免疫电镜观察病毒样颗粒的形态结构。通过考马斯亮蓝染色和Western blot检测,均可检测到分子量约61kD的目的蛋白;通过IFA在重组杆状病毒感染的Sf9细胞中检测到特异性荧光,表明HBoV VP2蛋白得到了表达并具有抗原特异性。纯化后的样品在电镜下可见类似于天然细小病毒B19的直径20nm左右的具有空壳结构的球形颗粒。本研究成功构建了HBoV VP2重组杆状病毒,得到了具有抗原特异性的HBoV VP2蛋白表达并形成了HBoV的VLPs。
- 赵林清钱渊丁雅馨朱汝南邓洁王芳孙宇LiYan
- 关键词：重组杆状病毒
- Human bocavirus infections are common in Beijing population indicated by sero-antibody prevalence analysis被引量：3
- 2009年
- 背景人的 bocavirus (HBoV ) 是原来与呼吸感染在孩子的呼吸分泌物被检测的最新识别的人的 parvovirus。试图由在浆液标本的二批在不同时期收集了的北京 population.Methods 对 HBoV 揭示浆液抗体的流行了解 HBoV 感染的重要性的这研究被从在1996年4月期间收集的 677 个浆液标本的作为 antigen.Results 的用 recombinant VP2 的对 HBoV 的为特定的 IgG 的西方的弄污测试到1997年3月，(59.1%) 400 是积极的并且为 141 个浆液标本的另一批的积极的率在8月收集了的抗体， 200 为在 1996-1997 期间收集到那些的浆液标本的sero流行侧面的比较在 2005 收集了显示为标本的积极的率在 2005 收集了的抗体比在 1996-1997 .Conclusions 期间收集的相应年龄组的高数据建议那 HBoV 在北京人口一直在传播为至少超过 10 孩子的年，和大多数到 7 年的年龄暴露于 HBoV 。在浆液标本显示出的积极的率在 2005 收集了的更高的 HBoV 抗体建议由 HBoV 的感染在最近的年里在北京人口被增加了。
- ZHAO Lin-qingQIAN YuanZHU Ru-nanDENG JieWANG FengDONG Hui-jinSUN YuLI Yan
- 关键词：儿童呼吸道感染抗体阳性率标本收集
- 北京季节性甲型流感与2009甲型H1N1流感住院患儿的临床比较被引量：6
- 2011年
- 目的比较因甲型流感病毒（季节性和2009甲型H1N1）感染而住院儿童的流行病学及临床特征。方法总结回顾分析首都儿科研究所附属儿童医院2003年1月至2010年1月有明确病原学证据的季节性甲型流感组（季节甲流组）和2009甲型ⅢN1流感组（新型甲流组）感染患儿331例的临床表现、实验室检查等资料。结果（1）2003年至2008年每年季节甲流组患儿住院的高峰时间在冬季，新型甲流组住院患儿集中在2009年11月至2010年1月。（2）季节甲流组患儿发病年龄中位数为35（22—63）个月，新型甲流组年龄为48（36—67）个月，两组患儿发病年龄有显著差异（Z=-6．702，P〈0．01）。（3）季节甲流组和新型甲流组患儿均以发热、咳嗽等流感样症状为主要表现，季节甲流组发热天数5（3～7）d，新型甲流组发热天数6（4～7）d，有显著差异（秩和检验，Z=-7．173，P〈0．01）。（4）新型甲流组出现血小板减少，CRP、AIJT、CK—MB的升高，以及心电图异常的人数高于季节甲流组。（5）新型甲流组有基础病变患儿60例，其比例高于季节甲流组的25例（）（2=12．553，P〈0．01）。（6）季节甲流组患肺炎者75例（49．3％），新型甲流组患肺炎者117例（65．4％），后者肺炎患儿人数高于前者（X^2=8．661，P〈0．01），重症病例人数明显高于季节甲流组（X^2=10．595，P〈0．01），有更高的ICU住院比例（X^2=12．873，P〈0．01）和住院天数（Z=-2．764，P〈0．01）。结论2009甲型H1N1流感病毒作为一种新型变异病毒，致病力更强，有基础疾病的患儿更容易被感染，出现肺部、神经及心脏系统的并发症，住院时间长，病死率高。
- 沙莉朱汝南曹玲袁艺李颖曲东王芳孙宇邓洁赵林清钱渊任晓旭杜军保
- 关键词：流感流感病毒A型住院
- 西藏地区儿童急性呼吸道感染中呼吸道合胞病毒的初步研究被引量：2
- 2012年
- 本研究为了解西藏地区儿童急性呼吸道感染中呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)及基因型别。首先采用直接免疫荧光法检测2011年4～7月西藏自治区人民医院儿科病房因急性呼吸道感染住院患儿的鼻咽分泌物标本中7种常见的呼吸道病毒及人类偏肺病毒(Human metapneumovirus,hMPV)的抗原。然后对RSV抗原阳性的标本分别提取RNA,用逆转录-巢式聚合酶链反应法(Nest-PCR)确定RSV型别,同时用实时荧光PCR(Real-Time PCR)方法进行验证。再通过对G蛋白基因PCR扩增产物序列测定确定RSV的基因型。通过与GenBank中不同地区RSV分离株的G蛋白基因序列比对,了解西藏地区RSV G蛋白的结构特点及变异情况。结果表明,从167例标本中检测出呼吸道病毒抗原阳性的为65例,总阳性率为38.9%(65/167),其中RSV 45例,占阳性标本的69.2%(45/65),对其中42例RSV阳性标本进行了PCR分型,其中40例为A亚型,2例为B亚型。对7株A亚型RSV G蛋白基因PCR产物测序结果显示,全部为GA2基因型。西藏RSV与RSV原型株A2株核苷酸的同源性为90.7%～91.8%,氨基酸的同源性只有86.5%～87.2%。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守序列的两端。7株西藏A亚型RSV G蛋白的核苷酸序列与GenBank中不同的RSV分离株相比同源性为90.7%～91.8%。西藏地区2011年春季小儿急性呼吸道感染的病毒病原主要为呼吸道合胞病毒,A亚型是2011年西藏地区的流行优势型别,其G蛋白胞外区基因具有较高的变异性。
- 邓洁朱汝南钱渊孙宇赵林清王芳吴红扇敏娜德吉美朵
- 关键词：儿童急性呼吸道感染呼吸道合胞病毒基因型
- 近年北京儿科急性呼吸道感染患儿中腺病毒的型别监测被引量：34
- 2010年
- 目的 了解近年北京地区儿科急性呼吸道感染患儿中人腺病毒（ADV）感染状况及ADV的型别.方法 2003年至2008年,连续6年通过病毒分离和（或）间接免疫荧光法,对收集的首都儿科研究所就诊的急性呼吸道感染患儿的17 941份标本进行ADV检测,对其中285份毒株或阳性标本提取DNA,通过3、7、11和21型4对分型引物的多重聚合酶链反应,确定3、7、11和21型ADV,对少数扩增阴性的标本或毒株,再使用2对可扩增所有ADV的通用引物对其DNA进行扩增,将PCR产物直接测序,结果与GenBank上的序列比较,确定其型别.结果 在17 941份呼吸道标本中,经病毒分离和（或）间接免疫荧光法确定为ADV阳性的标本304份,总阳性率为1.69%.对其中285份毒株或阳性标本的PCR分型结果：272例用3、7、11、21型分型引物扩增确定了型别：3型ADV 174例,占61.1%（174/285）,7型ADV 92例,占32.3%,11型ADV 6例,占2.1%;有13例经分型引物扩增为阴性,经过通用引物扩增后的PCR产物测序确定为2型ADV 9例,占3.2%（9/285）;6型ADV2例,占0.7%,1型和5型ADV各1例,各占0.4%.结论 本组ADV阳性检出率为1.69%.近年来北京地区ADV感染以3、7型为主,其次为2型和11型,1、5和6型较为少见,尚未发现其他型别.
- 邓洁钱渊赵林清朱汝南王芳孙宇廖斌黄荣妍袁艺曲东任晓旭
- 关键词：呼吸道感染
- 从急性腹泻儿童中检出的人博卡病毒2型的研究被引量：2
- 2012年
- 为了调查北京地区急性腹泻患儿中人博卡病毒2型(HBoV2)的流行情况并了解这一病毒的基因组特征,本研究收集2010年11月至2011年10月到首都儿科研究所附属儿童医院门诊就诊的急性腹泻患儿的粪便标本553例,采用荧光实时PCR进行HBoV2DNA的检测。选择2例病毒载量较高的阳性标本进行HBoV2各基因片段的扩增并测序。将所测到的序列进行拼接后得到完整的基因组序列并与GenBank中的相关序列进行比较分析。结果显示,553例粪便标本中共检出HBoV2阳性标本15例,阳性率为2.7%;各年龄组中,3～6月龄患儿中的HBoV2DNA阳性检出率最高(4.1%);所检年度中,7月份阳性检出率最高(7.0%);15例HBoV2检测阳性的患儿年龄均在2岁以下,其中4例患儿同时检出了诺如病毒,3例患儿同时检出了轮状病毒,1例检出了腺病毒。经测序得到两株接近完整的HBoV2基因组序列BJQ19和BJQ390;序列分析表明,这两株序列的同源性为99.2%,与GenBank中的FJ375129同源性最高,分别为99.1%和99.2%,为典型的HBoV2。上述结果表明,北京地区部分儿童的急性腹泻可能与HBoV2感染相关,且HBoV2感染在低年龄组儿童中更为常见。
- 赵慧赵林清孙宇钱渊刘立颖贾立平张又董慧瑾
- 关键词：急性腹泻儿童基因序列
- 血清特异性抗体检测在儿童呼吸道病毒感染病原诊断中应用的探讨被引量：38
- 2012年
- 目的探讨常见呼吸道病毒特异性IgM抗体检测在儿童急性下呼吸道感染（ALRI）病原快速诊断中的实际应用价值。方法2009年3月至2010年9月在首都儿科研究所附属儿童医院就诊患儿207例，符合ALRI诊断标准，采集鼻咽分泌物用直接免疫荧光法（DFA）检测呼吸道合胞病毒（RSV）、腺病毒（ADV）、甲型流感病毒（IFVA）、乙型流感病毒（IFVB）和副流感病毒1、2、3型（PIV1、PIV2、PIV3）7种常见呼吸道病毒抗原，同时收集患儿急性期血清，采用ELISA和间接免疫荧光方法（IFA）分别检测血清中常见呼吸道病毒的特异性IgM。结果DFA、ELISA和IFA检测结果的阳性率分别为67．6％、57．5％和39．6％。ELISA和IFA与DFA检测结果符合率分别为21．7％和31．4％。ELISA和IFA与DFA检出病毒相符的患儿采血时发病天数平均值从高到低依次分别为ADV（12．0d）、PIV2（9．6d）、IFV（9．5d）、RSV（5．3d）和PIV3（15．0d）、ADV（9．2d）、RSV（7．4d）。3岁以下年龄组患儿血清IgM阳性和抗原检测的符合率较高。结论尽管血清IgM抗体检测的结果与抗原检测的结果有差异，但对儿科ALRI的早期快速诊断有一定的应用价值，尤其对于低年龄儿童；另外可以提供呼吸道病毒感染的血清学证据，如与病毒抗原诊断方法联合应用可提高病原确诊率。
- 宋秦伟朱汝南邓洁王芳赵林清孙宇丁雅馨钱渊
- 关键词：儿童呼吸道感染免疫球蛋白M抗体
- 急性呼吸道感染儿童中WU多瘤病毒基因组序列特征分析被引量：8
- 2010年
- 为了解从北京地区急性呼吸道感染儿童中发现的WU多瘤病毒的基因组编码特征,并对其进行基因序列多样性分析,应用针对基因组5'端非编码区、衣壳蛋白VP1、VP2编码基因以及LTAg编码基因的引物对,从已确证为WU病毒阳性的来自北京地区急性呼吸道感染儿童的编号为BJF5276的临床标本中经聚合酶链反应扩增得到预期的基因片段,直接测序后将序列拼接得到全基因组序列,进而推导其基因组编码特征;随后从其它21例已确证为WU多瘤病毒阳性的急性呼吸道感染儿童标本中扩增得到衣壳蛋白VP2编码区基因,进行基因序列测定以及基因序列多样性分析。得到了WU病毒BJF5276全基因组序列。序列分析结果显示WU病毒BJF5276基因组序列全长为5229bp,共有5个主要的CDS(Coding domain sequences),分别编码衣壳蛋白VP2、VP3、VP1,并以其互补序列为模板,编码STAg和LTAg;所得到的22例VP2蛋白编码区基因序列同源性比较结果显示病毒VP2基因编码区序列与GenBank中已有的64个序列之间同源性很高;Mega4.0NJ进化树(Neighbor-joiningtree)分析显示这22个VP2基因序列分属于不同的基因进化簇,其中20个序列属于进化簇I中的Ia,另外2个序列属于进化簇III,其中的一个序列在IIIb基因进化簇中,另外一个序列独立成簇,不属于现有的IIIa或IIIb,暂时将其命名为IIIc。本研究结果提示北京地区的WU病毒具有多瘤病毒科的基因组编码特性;序列非常保守,有分属于不同基因进化簇的WU病毒在北京地区流行,与文献报道的以Ib流行为主所不同的是北京地区的WU病毒以Ia为主,且有新的基因进化簇出现。
- 赵林清钱渊朱汝南邓洁王芳孙宇丁雅馨张尼娜
- 关键词：基因序列分析急性呼吸道感染儿童
