国家自然科学基金(30570358)
- 作品数：9 被引量：34H指数：4
- 相关作者：庞天翔李庆华芦颖李彬袁文肃更多>>
- 相关机构：中国医学科学院中国医学科学院中国协和医科大学中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 儿童急性淋巴细胞白血病中期因子表达的临床研究
- 2009年
- 目的:检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中期因子(MK)的表达,探讨MK在儿童ALL发病中的意义。方法:应用实时定量PCR(real-timePCR),对124例进展期和缓解期ALL患者、15例正常儿童骨髓标本进行MKmRNA的检测。根据患者初治时外周血白细胞数、年龄、免疫分型及皮质激素预治疗反应等因素把进展期患者分为标危组、中危组和高危组。结果:进展期、缓解期及正常对照组之间MK水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。MKmRNA在B-ALL亚型中表达显著高于T-ALL亚型及正常对照(均P<0.01),而T-ALL与正常对照之间MKmRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。在ALL危险度各分层中,标危组和中危组的MK表达水平明显高于高危组(P<0.01或P<0.05),标危组与中危组之间差异无统计学意义(P=0.32)。MK表达水平与患儿年龄、性别、血浆乳酸脱氢酶等未显示出相关性(均P>0.05)。高白细胞组(WBC≥25×109/L)MK的表达较白细胞不增高组(WBC<25×109/L)明显降低(P<0.05)。结论:MK表达增高在儿童ALL中可能为预后良好的指标。
- 胡蓉华芦颖王建祥竺晓凡李庆华马丽李彬庞天翔
- 关键词：细胞因子类聚合酶链反应儿童
- 肿瘤细胞内pH值改变与肿瘤多药耐药的关系被引量：16
- 2007年
- 细胞内pH值(pHi)增高是许多耐药肿瘤的共同特点,其结果引起肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降,降低药物疗效。通过对pHi的调节,可纠正细胞内碱化,逆转肿瘤耐药。Na+-H+交换蛋白(Na+/H+exchanger,NHE)抑制剂可通过抑制NHE的活性调节pHi,为肿瘤的治疗提供了新的思路和手段。
- 芦颖李庆华庞天翔
- 关键词：细胞内PH值多药耐药P-糖蛋白
- 细胞酸化对K562／A02耐药细胞株中P-糖蛋白的影响被引量：8
- 2009年
- 本研究探讨细胞酸化对K562/A02细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multidrug resistance,MDR)提供新方法。利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定K562及K562/A02细胞内pH值(intracellularp H,pHi);采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/A02细胞中P-gp功能的影响;分别采用Western blot及实时定量RT-PCR技术检测P-gp的蛋白表达水平和mRNA表达水平的变化。结果表明:细胞酸化3小时对K562及K562/A02细胞的活力影响较小。在K562/A02细胞中,P-gp的功能随pHi的降低而减弱,细胞酸化明显增加了细胞对罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)的累积,并抑制了P-gp介导的Rh123外排。细胞酸化还分别在蛋白水平和mRNA水平抑制了K562/A02细胞中P-gp的表达,并且这种抑制具有pHi及时间的依赖性。结论:细胞酸化能够抑制K562/A02耐药细胞株中P-gp的表达和功能。
- 芦颖李庆华马丽李彬袁文肃茹永新王建祥庞天翔
- 关键词：细胞内PH值多药耐药
- Cariporide对肿瘤细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨特异性抑制剂Cariporide通过抑制钠氢离子交换蛋白1(NHE1)功能而阻止肿瘤细胞增殖的机制。方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测Cariporide对细胞增殖的抑制率,共聚焦荧光显微镜测算双羧乙基碳氧荧光素四乙酰氧甲酯(BCECF-AM)的荧光强度,检验其下调细胞内pH值,ELISA试剂盒测定其对体外培养细胞表达和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响,观测其对动物体内肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果:随着Cariporide的剂量增加或作用时间延长,HeLa细胞内pH值逐渐降低,肿瘤细胞表达VEGF减少。伴随着细胞内pH值降低,VEGF分泌水平逐渐下降,两者之间呈显著相关性(P<0.05)。另外,Cariporide能抑制动物体内的肿瘤增殖。结论:Cariporide能够减少肿瘤细胞表达和分泌VEGF,抑制动物体内肿瘤增殖。
- 李庆华庞天翔马丽李彬芦颖李洪强茹永新袁文肃
- 关键词：血管内皮生长因子类氢离子浓度肿瘤细胞增殖
- 急性髓系白血病亚型5′-核苷酸酶超微结构分析被引量：3
- 2008年
- 5′-核苷酸酶(5′NT)为嘌呤代谢酶,能水解核苷酸为核苷与磷酸,兼有磷酸转移酶活性,对维持核苷酸代谢平衡有重要作用。本研究主要探讨急性髓系白血病不同亚型患者及正常人粒细胞5′NT膜表达特点。用白细胞分离液分离33例急性粒细胞白血病患者和5例正常人骨髓有核细胞,以胞苷-5′-单磷酸(CMP)为底物进行电子显微镜和细胞组织化学染色,在观察细胞结构基础上分析粒细胞阳性率和阳性指数。结果表明,阳性反应产物主要分布于粒细胞膜,正常人大部分粒细胞呈阴性反应,或反应很弱;急性髓系白血病M0、M1、M2和t(8;21)各型粒细胞阳性率和阳性指数升高,但M0、M1+M2和t(8;21)三组之间差别不明显。t(15;17)细胞阳性率和阳性指数低于其它亚型;与正常人相比无统计学差别。结论:5′NT表达强弱可能与急性白血病粒细胞分化程度有关,t(15;17)白血病可能属于高分化性髓系白血病。
- 茹永新赵轼轩刘津华秘营昌竺晓凡庞天翔
- 关键词：急性髓系白血病超微结构
- Cariporide降低K562/DOX细胞株表达P-糖蛋白而逆转耐药的影响
- 2010年
- 目的探讨cariporide对耐药细胞株K562/DOX中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响,为抗白血病多药耐药(multi-drugresistance,MDR)提供新方法。方法应用cariporide对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定野生型细胞系K562及耐药细胞株K562/DOX细胞内pH值及细胞酸化对K562和K562/DOX细胞内阿霉素累积的影响。采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响。应用流式细胞术检测细胞酸化对K562/DOX细胞中P-gp功能的影响。采用实时定量RT-PCR技术检测MDR1基因在mRNA表达水平的变化。结果 Cariporide处理3h对K562及K562/DOX细胞的活力影响较小。在K562/DOX细胞中,P-gp的外排药物能力随细胞内pH值的降低而减弱,cariporide明显增加了细胞对罗丹明123(rhodaminel123,Rh123)和阿霉素的累积。细胞酸化还在mRNA水平抑制了K562/DOX细胞中P-gp的表达。结论 Cariporide能够抑制K562/DOX耐药细胞株中MDR1基因表达和P-gp的功能。
- 李庆华芦颖马丽李彬袁文肃茹永新王建祥庞天翔
- 关键词：卡立泊来德细胞内PH值P-糖蛋白多药耐药
- 肿瘤相关基因chp2在白血病细胞中表达的研究被引量：11
- 2008年
- 为了探讨人类肿瘤相关基因chp2在白血病原代细胞和白血病细胞系中表达的特点,选择24例白血病患者、4种白血病细胞系及10名正常人外周血单个核细胞(PBMNC),用实时定量PCR(RQ-PCR)方法检测chp2基因的表达水平。结果显示,10例正常对照细胞chp2mRNA的表达检出率为80%,阳性的表达量为(0.744±0.682)×105cpsμ/。l白血病原代细胞和白血病细胞系chp2mRNA的表达量较正常对照组明显增高(p<0.05),原代细胞中的7例急性髓细胞白血病(AML)、6例慢性髓细胞白血病(CML)、7例急性淋巴细胞白血病(ALL)和4例慢性淋巴细胞白血病(CLL)的表达量分别是(11.637±5.588)、(6.122±3.785)、(4.262±2.561)和(3.434±1.974)×105cpsμ/l;白血病细胞系中K562细胞、Jurkat细胞、HL-60细胞和M07e细胞的表达量为(5.243±1.852)、(4.463±1.621)、(4.137±1.837)和(2.578±1.137)×106cpsμ/l,白血病细胞系的表达量高于原代细胞。结论:人类肿瘤相关基因chp2在白血病原代细胞和白血病细胞系中表达水平明显增高,提示其在白血病细胞生长过程中发挥着重要的作用。
- 李彬李洪强马丽芦颖李庆华茹永新庞天翔
- 关键词：肿瘤相关基因白血病细胞实时定量PCR
- 细胞酸化对P糖蛋白高表达耐药白血病细胞的影响
- 2009年
- 目的探讨细胞酸化对患者原代白血病细胞P糖蛋白（P—glycoprotein，P—gp）和mdrl表达的影响，为逆转白血病多药耐药（MDR）提供新方法。方法采用实时定量RT—PCR技术检测mdrl mRNA表达水平的变化，筛选出P—gp高表达的患者白血病细胞。应用钠氢离子交换蛋白1特异性抑制剂Cariporide和高钾缓冲液对细胞进行酸化，采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响。应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值（Intracellular pH，pHi）及细胞酸化对细胞内阿霉素累积的影响，应用流式细胞术检测细胞酸化对细胞中P—gp功能的影响，采用Western blot检测细胞酸化对细胞P—gp表达水平的影响。结果患者细胞pHi降低到7．0，酸化1h后mdrl mRNA表达量分别降至对照组的0．532±0．110，酸化3h后降至对照组的0．166±0．070；酸化3h后P—gp的蛋白水平降至对照组的0．560±0．090；细胞pHi 7．01h后细胞内罗丹明123（Rhodaminel 123，Rh123）累积由对照组的20．07±0．39明显增加至71．03±0．47，激光共聚焦显微镜观察结果也证实酸化增加细胞内阿霉素累积。结论细胞内酸化能够抑制患者细胞P—gp表达和功能。
- 李庆华芦颖金薇娜蔺亚妮胡蓉华竺晓凡王建祥庞天翔
- 关键词：P糖蛋白
- HAPO蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定
- 2009年
- 目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白,构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段,并克隆至表达载体pET22b(+)中,利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达,产物利用Ni2+-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化。采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响。结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段,成功构建重组质粒pET22b(+)-HA-PO,其表达的融合蛋白以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的10%,经分离纯化融合蛋白的纯度可达80%。活性测定结果表明HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总黏附性。结论:可溶性表达了HAPO蛋白,并用体外实验证实HAPO对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用。
- 李彬王晓静刘拥军韩忠朝庞天翔
- 关键词：可溶性表达分离纯化人脐静脉内皮细胞
