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国家自然科学基金(30972666): 作品数：14 被引量：30H指数：3; 相关作者：杨慧兰樊建勇薛礼长龙朝钦张发洲更多>>; 相关机构：广州军区广州总医院华南理工大学南方医科大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

宫颈糜烂患者单纯疱疹病毒Ⅱ型感染情况分析被引量：13: 2012年; 目的探讨宫颈糜烂患者单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)感染情况。方法用实时荧光定量PCR法对212例受试者宫颈棉拭子中HSV-Ⅱ进行检测。结果 162例宫颈糜烂患者中,HSV-Ⅱ阳性率为29.01%(47/162),50例正常对照组中,HSV-Ⅱ阳性率为10.00%(5/50),两组差异有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ,Ⅱ和Ⅲ度宫颈糜烂患者HSV-Ⅱ阳性率分别为19.64%(11/56),27.78%(15/54)和40.38%(21/52),提示宫颈糜烂程度与HSV-Ⅱ的阳性率呈正相关(r=0.186,P<0.05)。结论 HSV-Ⅱ感染与宫颈糜烂密切相关,且随宫颈糜烂程度的增加,HSV-Ⅱ感染率增加。应加强对宫颈糜烂患者HSV-Ⅱ的检测。; 张丽杨慧兰刘仲荣樊建勇毕建军; 关键词：实时荧光定量PCR 单纯疱疹病毒宫颈糜烂

HSV-2型2.2kb潜伏相关转录子对Hela细胞生长特性的影响: 2012年; 【目的】研究人单纯疱疹病毒2型(Herpes simple virus type 2,HSV-2)2.2 kb潜伏相关转录体(Latency associated transcript,LAT)对体外培养Hela细胞生长特性的影响。【方法】将真核表达质粒pcDNA3.1-2.2 kb LAT或pcDNA3.1转染Hela细胞后,观察细胞的生长情况。在4°C和43.5°C应激下,MTT法检测细胞活性,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡。【结果】pcDNA3.1-2.2 kb LAT质粒转导入Hela细胞后,检测到2.2 kb LAT转录;细胞培养2 d转染pcDNA3.1-2.2 kb LAT细胞明显多于转染pcDNA3.1细胞数,两者细胞数分别为1.7±0.09×105/mL和1.45±0.14×105/mL,P<0.05。4°C下pcDNA3.1-2.2 kb LAT组和pcDNA3.1组细胞凋亡率分别为27.6%±5.7%和7.8%±1.5%,P<0.01;43.5°C下pcDNA3.1-2.2 kb LAT组和pcDNA3.1组细胞凋亡率分别为30.5%±4.6%和5.3%±2.0%,P<0.01。【结论】2.2 kb LAT具有促进细胞增殖,提高细胞活力和抗凋亡作用,提示它可能在HSV-2感染中发挥重要作用。; 毕建军杨慧兰樊建勇王颖李翠华梁洁; 关键词：单纯疱疹病毒2型生殖器疱疹凋亡

单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体真核表达载体的构建及表达被引量：1: 2012年; 背景:单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体的构建可以为研究单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1在病毒潜伏复发中的功能奠定基础。目的:构建含存单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1的真核表达载体,并通过转染非洲绿猴肾细胞(Vero),验证载体的体外表达情况。方法:根据单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1基因序列设计一对引物,以单纯疱疹病毒Ⅱ型333标准株基因组为模板PCR法扩增出开放读码框1基因,克隆至真核表达载体上,并进行酶切鉴定以及测序;利用X-fect转染试剂盒将重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达,并用荧光倒置显微镜观察融合蛋白的表达。结果与结论:开放读码框1基因的体外扩增目的片段为741bp,所构建的真核表达载体pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1经双酶切鉴定,与预期大小一致,测序结果与NCBI收录的开放读码框1基因序列一致;重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞后,RT-PCR验证有目的基因的转录,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达。表明成功构建pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体,并且实现其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。; 吕芳彪杨慧兰; 关键词：真核表达载体转染体外表达

HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达被引量：2: 2011年; 目的构建单纯疱疹病毒2型(HSV-2)多功能蛋白感染细胞多肽27(ICP27)真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并检测其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。方法提取病毒株HSV-2333 DNA,用高保真DNA聚合酶对多功能蛋白ICP27基因进行高保真扩增,用双酶切连接至真核表达载体pCDNA3.0中。pCDNA3.0-ICP27经双酶切、测序验证,并通过脂质体介导质粒瞬时转染Vero细胞,经RT-PCR和Western blot检测ICP27蛋白的表达。结果 pCDNA3.0-ICP27经双酶切可切出目的片段,测序结果经比对,与基因库中的序列完全一致。转染后经RT-PCR和Western blot检测,证实转染重组质粒组有ICP27蛋白表达,而转染空质粒组及未转染组没有检测到ICP27的表达。结论成功构建了HSV-2多功能蛋白ICP27真核表达载体pCDNA3.0-ICP27,并能在Vero细胞中表达。; 龙朝钦杨慧兰张发洲薛礼长; 关键词：单纯疱疹病毒2型真核表达载体质粒

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立: 2011年; 目的:建立常见凋亡诱导剂顺铂(Cisplatin)诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法:分别以不同浓度的顺铂处理Vero细胞48h,用噻唑蓝(MTT)比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果:以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为(79.02±6.10)%、(68.84±4.42)%、(56.66±4.07)%、(46.83±3.76)%、(29.04±5.93)%(P<0.01);经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1.66%±0.19%、16.65%±1.26%、24.82%±1.03%、36.22%±1.04%、48.49%±1.24%、43.34%±1.17%(P<0.01)。结论:本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。; 浦洋薛礼长吕芳彪樊建勇张发洲龙朝钦; 关键词：非洲绿猴肾细胞细胞凋亡顺铂

HSV-2 LAT ORF2在Vero细胞中的表达及对细胞的作用被引量：2: 2010年; 旨在研究人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框2(ORF2)对体外培养的非洲绿猴肾细胞(Vero)形态和活性的作用。将构建好的带绿色荧光蛋白(EGFP)标签的HSV-2LAT ORF2真核表达载体pEGFP-ORF2,转染vero细胞,荧光显微镜观测细胞形态的改变和MTT法进行活性分析。结果:显示,HSV-2LATORF2诱导细胞形态发生明显变化,绿色荧光蛋白在细胞的定位也发生了改变,细胞活性降低。由此证实,HSV-2LAT ORF2对细胞有损伤作用,为阐明HSV-2LATORF2的功能提供了资料。; 白利利杨慧兰; 关键词：HSV-2 LAT VERO细胞

pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达: 2010年; 克隆单纯疱疹病毒Ⅱ型(herpes simplex virusⅡ,HSV-2)潜伏相关转录体(latency associated transcript,LAT)第3个开放阅读框(open reading frame3,ORF3)的DNA序列,构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,并观察其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达,为进一步研究LAT基因及ORF3的生物学功能奠定基础。用HSV-2333株感染Vero细胞,从Vero细胞培养液中收集HSV-2并提取HSV-2基因组。以HSV-2基因组为模板,PCR扩增得到HSV-2LAT ORF3DAN片段。将ORF3片段连接到pEGFP-C2质粒上,用卡那霉毒筛选阳性克隆,经菌落PCR,双酶切及测序验证pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体构建成功。用Xfect转染试剂将重组载体转染入Vero细胞,倒置荧光显微镜观察其在Vero细胞中的表达。双酶切及测序结果验证ORF3片段正确插入pEGFP-C2质粒,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中的表达。成功构建pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体,该重组质粒能在Vero细胞中成功表达。; 薛礼长杨慧兰; 关键词：LAT ORF3 真核表达载体 VERO细胞

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录体开放读码框3对Vero细胞凋亡的影响被引量：4: 2012年; 目的研究单纯疱疹病毒2型（HSV-2）潜伏相关转录体（LAT）开放读码框3（ORF3）对顺铂诱导的非洲绿猴肾细胞（Vero细胞）凋亡的影响。方法构建重组质粒pEGPF—ORF3，并转染Vero细胞，逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）验证目的基因的表达。顺铂诱导Vero细胞凋亡，通过荧光显微镜观察凋亡小体，Giemsa染色检测细胞核形态，噻唑蓝法（MTr法）检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞凋亡情况。实验结果采用SPSSl3．0进行分析，各组间两两比较采用单因素方差分析和t检验。结果成功克隆HSV-2333株ORF3基因，构建pEGFP—ORF3真核表达载体，RT—PCR验证该真核表达载体能在Vero细胞中高效表达。转染pEGFP—ORF3的Vero细胞经顺铂诱导凋亡后Giemsa染色，显示胞核蓝染，胞质淡浅，细胞形态正常。M．rr法分析显示，细胞增殖在转染pEGFP—ORF3组（2．56±0．21）与未经任何处理的正常对照组（2．66±0．13）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但高于顺铂诱导凋亡的正常对照组（1．65±0．11）和pEGFP—C2组（1．56±0．18），差异均有统计学意义（P〈0．05）；流式细胞仪分析细胞凋亡率，转染pEGFP—ORF3组（4．03％±1．04％）与正常对照组（2．13％±0．09％）比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但低于空质粒pEGFP—C2组（19．45％±2．05％），且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HSV-2LATORF3在Vero细胞中具有抗顺铂诱导的凋亡作用。; 杨慧兰薛礼长樊建勇张发洲龙朝钦张玲; 关键词：开放读码框架细胞凋亡

HSV-2LATORF1在Vero细胞中的表达特性及其对细胞活性的影响: 2013年; 目的:研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框1(ORF1)的表达特点及其对Vero细胞活性的影响。方法:双酶切和测序验证本实验室构建的HSV-2 LAT ORF1真核表达载体pEGFP-ORF1,并以转染试剂盒Xfect介导其转染至Vero细胞,通过RT-PCR和绿色荧光蛋白检验其在细胞中的表达,用MTT法进行细胞活性分析。结果:重组质粒表达的融合蛋白主要集中细胞核,而空质粒表达的绿色荧光蛋白在细胞核和细胞质中分布均匀;重组质粒对Vero细胞没有损伤作用。结论:HSV-2 LAT ORF1影响了绿色荧光蛋白的分布,可降低空质粒对细胞的损伤作用;其作用位点可能主要定位在细胞核中,为阐明HSV-2 LAT ORF1在潜伏复发中的功能奠定了实验基础。; 吕芳彪杨慧兰樊建勇刘艳华张丽王颖; 关键词：LAT 转染绿色荧光蛋白

pEGFP-C2/LAT-ORF3真核表达载体在Vero细胞中的表达特性及其对细胞活性的影响被引量：1: 2010年; 目的:研究单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录体(LAT)开放读码框3(ORF3)的表达特点及其对细胞活性的影响。方法:双酶切和测序验证本实验室构建的HSV-2 LAT ORF3真核表达载体pEGFP-C2/LAT-ORF3的可用性,并将其转染入vero细胞,通过荧光和RT-PCR检验其在细胞中的表达,用MTT法进行细胞活性分析。结果:融合蛋白在细胞核中大量集中,且影响了绿色荧光蛋白在细胞中的分布;重组质粒对Vero细胞没有损伤作用。结论:HSV-2 LAT ORF3可抵消空质粒对细胞的损伤作用;其作用靶点可能主要存在于细胞核中,为阐明HSV-2 LAT ORF3在潜伏复发中的功能提供了实验基础。; 薛礼长杨慧兰张发洲龙朝钦; 关键词：绿色荧光蛋白 VERO细胞

国家自然科学基金(30972666)

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