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徐州市科技计划项目(XZZD1138)
作品数:
1
被引量:4
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相关作者:
潘彬
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慢病毒载体介导CXCR4基因过表达对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
被引量:4
2013年
目的探讨慢病毒表达载体介导的小鼠CXC型趋化因子受体4(CXCR4)基因体外对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)生物学特性的影响。方法克隆小鼠CXCR4基因,构建携带CXCR4基因与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)双顺反子结构的重组慢病毒表达载体LV.CXCR4-IRES—EGFP,同时构建对照载体LV—IRES—EGFP。脂质体法包装病毒,并测定滴度。通过优化慢病毒感染MSC条件,建立高表达CXCR4的MSC,荧光显微镜观察EGFP表达,流式细胞术检测细胞表面CXCR4表达,CCK-8法检测MSC对单向混合淋巴细胞培养体系中淋巴细胞增殖的影响,划痕实验和Transwell实验检测MSC体外迁移能力。结果成功克隆小鼠CXCR4基因,并构建重组慢病毒载体LV.CXCR4-IRES—EGFP和对照载体LV—IRES—EGFP。制备共表达CXCR4和报告基因EGFP的高滴度慢病毒颗粒。优化感染条件后,LV—CXCR4-IRES—EGFP感染组MSC表面CXCR4的表达明显高于LV-IRES—EGFP对照组(P〈0.05),分别为(90.3±3.37)%和(1.534-0.34)%。过表达CXCR4基因不影响MSC对T淋巴细胞增殖的抑制作用(P〉0.05)。划痕实验和Transwell实验结果表明,过表达CXCR4可明显提高MSC对划痕损伤修复能力和向高浓度基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的迁移能力,并且具有剂量依赖性。结论成功构建重组慢病毒载体LV—CXCR4-IRES—EGFP,慢病毒载体系统可高效介导CXCR4基因在小鼠MSC表达,并具有生物学活性。
陈伟
李森
闰志凌
程海
潘彬
曾令宇
李振宇
徐开林
关键词:
慢病毒载体
间充质干细胞
CXCR
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