国家自然科学基金(81172225)
- 作品数：9 被引量：72H指数：6
- 相关作者：张为民陈蓓程东海张曦郑积华更多>>
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- 循环肿瘤细胞在非小细胞肺癌临床中的应用被引量：4
- 2017年
- 研究显示非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血中的循环肿瘤细胞(CTC)携带有肺癌组织特异性抗原或基因特征。检测CTC变化可以评估肺癌的治疗疗效,预测肿瘤的复发、转移及预后。实时动态监测CTC基因分型变化,还可为药物敏感性和耐药机制的研究及NSCLC的个体化治疗提供可靠的依据。
- 程东海张为民
- 关键词：循环肿瘤细胞非小细胞肺癌
- RNAi介导IGF-1R基因沉默对非小细胞肺癌PC-9/ZD细胞株EMT的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨RNA干扰(RNAi)介导胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因沉默对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞PC-9/ZD发生上皮—间质转化(EMT)的影响。方法构建靶向IGF-1R基因的RNAi重组慢病毒,感染NSCLC表皮生长因子受体—酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)获得性耐药细胞PC-9/ZD;实时荧光定量PCR法检测IGF-1R表达抑制效应及IGF-1R基因沉默后EMT相关分子的mRNA表达变化,Transwell实验检测细胞侵袭转移能力变化。结果成功构建靶向IGF-1R基因的RNAi重组慢病毒,滴度为1×106TU/μL,对PC-9/ZD细胞IGF-1R基因的mRNA抑制效率为71.4%。IGF-1R基因沉默后,PC-9/ZD细胞形态呈现间质向上皮化转变,上皮标志物E-cadherin的mRNA表达量升高(P<0.05),间质标志物Vimentin的mRNA表达量降低(P<0.05),且侵袭转移能力减弱(P<0.05)。结论靶向IGF-1R基因沉默可逆转PC-9/ZD细胞EMT。
- 张曦张为民陈蓓
- 关键词：基因沉默上皮-间质转化非小细胞肺癌获得性耐药
- 上皮-间质转化和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药中的作用被引量：16
- 2013年
- 目的:探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(insulin-like growth factorⅠreceptor,IGF-1R)在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)获得性耐药中的作用。方法:选用EGFR基因突变型和野生型的人肺腺癌细胞PC-9和H460,分别用吉非替尼和厄洛替尼将其诱导成耐药的PC-9/ZD和H460/ER细胞。MTT法检测各组细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法和RT-PCR法分别检测IGF-1R及EGFR信号通路分子及EMT相关分子的蛋白和mRNA表达。结果:PC-9/ZD和H460/ER为EGFR-TKI获得性耐药细胞,分别对吉非替尼和厄洛替尼的敏感性显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与PC-9和H460细胞相比,耐药的PC-9/ZD和H460/ER细胞形态呈现间质细胞表型,细胞侵袭和迁移能力增加(P<0.05)。PC-9/ZD和H460/ER细胞中间质标志分子vimentin的mRNA和蛋白表达量均显著增加(P<0.05),PC-9/ZD细胞的E-cadherin表达量显著减少(P<0.05)。与PC-9和H460细胞相比,PC-9/ZD与H460/ER细胞的IGF-1R及其磷酸化蛋白表达量显著增加(P<0.05),AKT和ERK磷酸化水平明显上调(P<0.05)。PC-9/ZD细胞的EGFR磷酸化水平与PC-9细胞相比未见明显差异(P>0.05),而H460/ER细胞的EGFR磷酸化水平较H460细胞显著降低(P<0.05)。结论:EGFR突变型PC-9细胞和野生型H460细胞的获得性耐药细胞中均发生了EMT,并且IGF-1R信号蛋白表达增多,提示EMT及IGF-1R信号转导通路均可能在NSCLC的EGFR-TKIs获得性耐药中起重要作用。
- 王津京张为民陈蓓林建光
- 关键词：蛋白激酶抑制剂上皮-间质转化
- IGF-1R信号通路及上皮-间质转化对非小细胞肺癌A549细胞EGFR-TKIs获得性耐药的作用被引量：6
- 2014年
- 目的探讨胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-1R)信号通路及上皮-间质转化(EMT)对EGFR野生型、K-ras突变型非小细胞肺癌A549细胞表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)获得性耐药的作用。方法选用EGFR野生型、K-ras突变型的非小细胞肺癌A549细胞,用吉非替尼将其诱导成耐药细胞A549/GR。MTT法检测细胞增殖,划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力,qRT-PCR和Western blot法分别检测EMT标志分子及IGF-1R信号通路相关分子的mRNA和蛋白表达。结果 A549/GR对吉非替尼的敏感性显著下降(P<0.05)。与A549细胞比较,A549/GR细胞形态呈现间质化改变,侵袭和转移能力均显著增加(P<0.05)。A549/GR细胞中间质标志Vimentin的mRNA和蛋白表达量均显著增多(P<0.05),上皮标志E-Cadherin表达量显著减少(P<0.05)。与A549细胞相比,A549/GR细胞IGF-1R的mRNA和蛋白及其磷酸化表达量均未见明显改变(P>0.05),而AKT磷酸化水平及其mRNA水平明显上调(P<0.05),ERK蛋白及其磷酸化和mRNA表达量均明显增加(P<0.05)。A549/GR细胞的EGFR及其磷酸化蛋白表达量较A549细胞明显下降(P<0.05)。结论 EMT及AKT和ERK信号通路的激活均可能在EGFR野生型、K-ras突变型A549细胞的EGFRTKIs获得性耐药中起重要作用,但获得性耐药与IGF-1R表达无关。
- 张曦张为民陈蓓曾云云
- 关键词：非小细胞肺癌获得性耐药上皮-间质转化
- 多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用被引量：4
- 2012年
- 目的探讨多西他赛与吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞A549和PC-9的生长影响及其细胞学机制。方法 qPCR-HRM法检测人肺腺癌细胞EGFR和K-Ras基因突变,MTT法检测细胞增殖,Western blotting检测细胞信号蛋白及磷酸化表达,FCM法检测细胞周期变化。结果人肺腺癌A549细胞为EGFR基因野生型,PC-9细胞为EGFR第19外显子突变型。多西他赛和吉非替尼单药或联合用药均能抑制A549和PC-9细胞生长,呈浓度依赖性。多西他赛对A549和PC-9细胞生长的半数抑制浓度(IC50)分别为5.24×10-7和2.13×10-8mol/L,吉非替尼分别为1.28×10-5和4.58×10-8mol/L。在IC50浓度时,多西他赛序贯吉非替尼对A549和PC-9细胞的生长抑制率分别为60.00%和57.45%,均较单药组明显增高(P<0.05);而同时用药只对PC-9细胞有增效作用,抑制率为53.46%,较单药组明显增高(P<0.05)。多西他赛表现为增强A549、PC-9细胞EGFR和ERK磷酸化,吉非替尼表现为抑制,两药均抑制PC-9细胞IGF-1R磷酸化。多西他赛序贯应用吉非替尼显著抑制EGFR和ERK磷酸化,两药同时应用对抑制PC-9细胞的IGF-1R磷酸化具有增强作用。多西他赛将A549及PC-9细胞阻滞在G2期,吉非替尼将PC-9细胞明显阻滞在G1期。结论多西他赛序贯吉非替尼能够抑制EGFR野生型和突变型的A549及PC-9细胞生长,且呈增效作用,可能与影响细胞EGFR和ERK磷酸化有关;两药同时应用仅对PC-9细胞具有增效作用,可能与IGF-1R磷酸化抑制有关;不同时序应用的效果均可能与细胞周期相关。
- 郑静娴张为民谢波王京津刘端陈蓓
- 关键词：肺腺癌细胞多西他赛吉非替尼信号蛋白磷酸化细胞周期
- 上皮间质转化在非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药中的作用研究被引量：7
- 2015年
- 目的探讨上皮间质转化(EMT)在非小细胞肺癌(NSCLC)对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFRTKIs)获得性耐药中的作用及可能机制。方法选用EGFR基因19号外显子突变型吉非替尼耐药细胞PC9/AB和EGFR野生型厄洛替尼耐药细胞H460/ER,通过基因转染获得E-cadherin稳定过表达细胞PC9/AB-CDH1和H460ER-CDH1。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(qRTPCR)和蛋白印迹法检测EMT相关分子、EGFR信号通路分子的mRNA和蛋白表达水平。结果 PC9/AB和H460/ER细胞未发生T790M突变和c-Met基因扩增,但发生了EMT,表现为E-cadherin表达降低和Vimentin表达增加。通过基因转染提高Ecadherin表达水平能逆转PC9/AB和H460/ER耐药细胞的EMT,使其对EGFR-TKIs的敏感性增加,PC9/AB-CDH1细胞较PC9/AB对吉非替尼的敏感性增加约11.4倍,其半数抑制浓度(IC50)分别为(0.70±0.22)μmol/L和(8.68±0.44)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05);H460/ER-CDH1较H460/ER对厄洛替尼的敏感性增加约6.1倍,其IC50分别为(7.51±1.12)μmol/L和(53.72±12.95)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,逆转EMT后,细胞的EGFR、p-EGFR的mRNA和蛋白表达量均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阻断耐药细胞的EMT可逆转NSCLC对EGFR-TKIs的获得性耐药,EMT在NSCLC对EGFR-TKIs的获得性耐药中起重要作用,其机制可能与EGFR磷酸化水平降低有关。
- 曾云云张为民张曦
- 关键词：非小细胞肺癌上皮间质转化获得性耐药
- 非小细胞肺癌EGFR突变状况与脑转移研究进展被引量：12
- 2014年
- 目的:总结非小细胞肺癌EGFR突变状态与脑转移的研究进展,探讨EGFR突变非小细胞肺癌脑转移治疗策略。方法:应用PubMed和CNKI期刊全文检索系统,以"非小细胞肺癌脑转移、靶向治疗和全脑放疗"为关键词,共检索到2004-2013年相关文献270篇,其中英文文献160篇,中文文献110篇。纳入标准:1)非小细胞肺癌脑转移与EGFR突变状态关系;2)表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)在非小细胞肺癌脑转移中的作用;3)非小细胞肺癌脑转移全脑放疗。根据纳入标准分析文献30篇。结果:EGFR突变NSCLC脑转移患者TKIs治疗敏感,同时中枢转移灶放疗亦敏感,而EGFR野生型及TKIs获得性耐药患者中枢转移灶放疗抵抗;EGFR突变状态与NSCLC脑转移患者TKIs治疗疗效、放疗疗效、生存及预后明显相关。结论:EGFR基因突变状态在指导NSCLC脑转移患者治疗、预测预后方面具有重要的作用。
- 孙红奎郑积华张为民
- 关键词：非小细胞肺癌脑转移表皮生长因子受体
- 甲氧氯普胺与阿瑞匹坦在预防高致吐性化疗致延迟性恶心呕吐的疗效及安全性比较被引量：12
- 2017年
- 目的比较甲氧氯普胺(MPD)与阿瑞匹坦(APD)在联合地塞米松基础上预防高致吐性化疗(HEC)引起的延迟性恶心呕吐的有效性和安全性。方法将接受HEC的实体瘤患者随机分为MPD组(30例)和APD组(31例),MPD组的止吐方案为MPD 20 mg,2次/d(d2~4);帕洛诺司琼0.25 mg(d1);地塞米松20 mg(d1),8 mg,2次/d(d2~4)。APD组的止吐方案为APD 125 mg(d1),80 mg(d2~3);帕洛诺司琼0.25 mg(d1);地塞米松12 mg(d1),8 mg(d2~4)。主要研究终点是延迟期(化疗后24~120 h)内获得完全缓解(定义为无呕吐及未使用解救性止吐药物)的患者百分比(CRR),次要研究终点是不良反应发生率。结果 MPD组与APD组在延迟期恶心呕吐的CRR分别为83.3%(25/30)和80.6%(25/31),差异无统计学意义(P>0.05)。两组主要不良反应为便秘、乏力及呃逆,不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05),患者均可以耐受。结论 MPD联合帕洛诺司琼、地塞米松的止吐方案与标准的三联止吐方案(APD、帕洛诺司琼及地塞米松)相比,在HEC中具有相似的疗效及安全性。
- 王辉郑积华谢波徐志勇罗文标黄雪琴王仙赐程东海文英娟王舞君张为民
- 关键词：甲氧氯普胺延迟性呕吐
- 肿瘤干细胞在NSCLC细胞EMT介导的EGFR-TKI获得性耐药中的作用被引量：10
- 2016年
- 目的:探讨肿瘤干细胞在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞上皮间质转化(EMT)介导的EGFR-TKIs获得性耐药中的作用。方法:选用EGFR基因19号外显子突变型人NSCLC细胞株PC-9;经吉非替尼诱导成获得性耐药细胞株PC-9/AB。免疫印记检测EMT相关蛋白;CCK8法检测细胞对吉非替尼敏感性;流式细胞术检测细胞株CSC比例。结果:PC-9/AB出现EMT,PC-9/AB较PC-9对吉非替尼敏感性显著下降(P<0.01);PC-9/AB的CSC比例较PC-9显著增加(P<0.05)。结论:EMT是NSCLC EGFR-TKIs获得性耐药的机制之一,该机制与CSC生成增加有关。
- 胡翘廷周娟程东海张为民
- 关键词：上皮间质转化获得性耐药肿瘤干细胞
