浙江省自然科学基金(Y2100819)
- 作品数：4 被引量：16H指数：2
- 相关作者：李力群潘盛盛倪彬婷高建华鲁峰更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院南方医科大学南方医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人血管基质片段细胞标记、分化及与胶原支架的相容性被引量：1
- 2013年
- 种子细胞是构建组织工程的关键因素，寻找合适的种子细胞一直是学术界努力的方向。血管基质片段（SVF）细胞是从新鲜人体脂肪提取的混合细胞群，内含丰富的新鲜脂肪干细胞等多种细胞，与以往学术界研究较多的脂肪干细胞相比，不需经过2—3周的体外培养、操作中间环节少、安全性高、不存在伦理问题、临床可应用性强。
- 李力群潘盛盛倪彬婷谢甬淋
- 关键词：细胞标记人血管胶原支架相容性分化构建组织工程
- 人高活性血管基质层细胞快速分离及荧光标记的实验研究
- 2012年
- 目的探讨一种人高活性血管基质层细胞(stromal vascular fraction cells,SVFs)快速分离及荧光标记的有效方法,为SVFs用于临床奠定理论基础。方法取植皮手术患者自愿捐赠的腹部皮下脂肪组织,分别用0.065%、0.125%、0.185%3种浓度的Ⅰ型胶原酶消化,提取SVFs。收集细胞悬液进行细胞计数,锥虫蓝染色计算细胞成活率。用1’双十八烷-3,3,3’,3’-四甲基吲哚羧化青-高氯酸盐(1,1’-dioctadecyl-3,3,3’,3’-2-tetramethy-lindocyanine perchlorate,DiI)荧光标记0.125%浓度组SVFs,倒置荧光显微镜下观察标记情况;将DiI标记的SVFs接种培养,倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测DiI标记前后细胞增殖能力。结果 0.065%、0.125%及0.185%浓度组SVFs细胞总数分别为(138.68±11.64)×104、(183.80±10.16)×104、(293.07±8.31)×104个,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01);细胞成活率分别为91%±2%、90%±2%、81%±2%,0.065%浓度组和0.125%浓度组均显著高于0.185%浓度组(P<0.01),0.065%浓度组和0.125%浓度组比较差异无统计学意义(P=0.881)。倒置荧光显微镜观察示,0.125%浓度组细胞均可被DiI荧光标记,标记后的细胞膜完整,细胞质丰富,细胞形态正常,细胞核未染荧光;DiI标记的SVFs细胞悬液接种培养后,细胞能顺利贴壁及传代。MTT法检测示DiI标记前后SVFs细胞生长曲线相似,生长趋势吻合。结论 0.125%浓度的Ⅰ型胶原酶可有效消化脂肪中的胶原组织,获取大量SVFs,同时对细胞损伤较小,是理想的工作浓度;DiI可有效标记SVFs。
- 李力群高建华潘盛盛倪彬婷
- 关键词：脂肪来源干细胞荧光标记
- 人脂肪来源干细胞与Ⅰ型胶原支架体外复合培养的研究被引量：9
- 2012年
- 目的观察体外人脂肪来源干细胞（ADSCs）与Ⅰ型胶原支架的生物相容性。方法0．125％Ⅰ型胶原酶体外分离人ADSCs，按每只培养瓶1×10。个细胞／ml接种，80％融合时进行传代，培养至第3代，将其与Ⅰ型胶原支架体外复合培养（5×10^5个／cm2胶原支架），细胞计数法检测黏附率，倒置显微镜及扫描电镜观察细胞在支架上黏附生长及增殖。将ADSCs用DII荧光标记并与胶原支架黏附，检测黏附率并与转染前进行比较，检测DII标记后对ADSCs的黏附能力是否有影响。结果体外成功分离得到ADSCs，与Ⅰ型胶原支架能够很好地黏附，在支架上增殖生长状态良好，DII标记前后黏附率分别为（91．9±2．3）％和（90．5±2．0）％，两样本t检验比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论ADSCs与Ⅰ型胶原支架具有良好的生物相容性，I型胶原支架可作为脂肪组织工程较理想的生物支架材料。
- 李力群高建华鲁峰察鹏飞鲁华倪彬婷潘盛盛
- 关键词：脂肪干细胞胶原
- 血管基质片段细胞携血管内皮生长因子对移植颗粒脂肪血管化的影响被引量：7
- 2012年
- 目的探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）复合血管基质片段细胞（stromal vascular fraction cells，SVFs）细胞疗法对移植颗粒脂肪组织血管化的影响，寻找一种安全、有效、简单的细胞辅助脂肪移植术式。方法取患者植皮术后废弃的皮下脂肪，提取SVFs。用DiI染色观察SVFs染色标记情况，锥虫蓝染色观察SVFs活性。将0．3ml待移植的脂肪颗粒分别与0．2ml下列细胞混合：①复合有VEGF的SVFs（A组）；②SVFs（B组）；③DMEM完全培养基（c组）。按照随机化原则将3组脂肪组织混合物分别注射移植于裸鼠背部皮下，每只裸鼠背上注射3个点（共12只）。观察移植物外形、成活情况、湿重、直径，HE染色及CD31染色镜下观察并计数毛细血管密度。使用SPSS16．0进行方差分析检验。结果新鲜提取的SVFs可被Dil标记染色，加用VEGF仍能保持较好的细胞活性，移植术后2个月3组移植脂肪的湿重为：A组（191．90±9．81）mg、B组（177：01±10．50）mg、C组（92．05±8．30）mg，A组〉B组〉C组（P〈0．01）。移植物直径为：A组（0．49±0．24）cm、B组（0．40±0．26）cm、C组（0．32±-0．28）cm，A组〉B组〉C组（P〈0．01）。CD31染色镜下，每高倍镜视野微血管密度：A组（14．58±2．06）个、B组（11．55±2．18）个、C组（7．87±1．55）个，与B组和C组比较，A组较少见纤维结缔组织增生及坏死凋亡细胞。结论结合VEGF因子的SVFs辅助脂肪移植是一种临床可操作性强、简便可行的较理想的细胞疗法，比单纯SVFs更能有效地促进移植脂肪血管化。
- 李力群高建华鲁峰郑君达何秋香倪彬婷潘盛盛
- 关键词：脂肪来源干细胞脂肪移植血管形成
