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3种壳色花纹文蛤常规营养成分分析与评价被引量：10: 2014年; 本试验对红壳、黑斑、白壳3种壳色花纹文蛤的常规营养成分进行了检测,旨在分析和评价不同壳色花纹文蛤在营养价值上的差异。解剖取软体部,采用国家标准方法测定组织中水分、粗蛋白质、粗脂肪含量以及氨基酸、脂肪酸组成。结果表明：文蛤软体部鲜样中水分含量为81.15%-81.89%,粗蛋白质含量为9.23%-9.71%,粗脂肪含量为1.31%-1.91%,其上述常规营养成分的含量在3种文蛤中均不存在显著差异（ P〉0.10）。采用酸水解法,在3种文蛤软体部干样中均检测到17种氨基酸,其中总氨基酸（ TAA）含量为42.95%-48.45%,鲜味氨基酸（ DAA）含量为17.44%-20.88%,且DAA含量红壳文蛤有高于白壳文蛤的趋势（ P〈0.10）；3种文蛤软体部中第一限制性氨基酸均为缬氨酸。在3种文蛤软体部干样中检测到22-23种脂肪酸,其中多不饱和脂肪酸（ PUFA）含量为36.07%-39.55%,C20∶5（ n-3）（ EPA）含量为11.37%-12.87%, C22∶6（n-3）（DHA）含量为9.82%-12.44%,其中 EPA 含量红壳文蛤有高于白壳文蛤的趋势（P〈0.10）,DHA含量红壳文蛤有高于白壳文蛤和黑斑文蛤的趋势（P〈0.10）。由此可见,本试验检测的3种文蛤营养价值均较高,其中以红壳文蛤最高,且其鲜味度最优。; 顾向飞林志华董迎辉姚韩韩; 关键词：文蛤软体部脂肪酸氨基酸营养评价

基于COI基因序列的泥蚶遗传多样性和种群结构分析: 2017年; 为了研究泥蚶不同地理群体的遗传多样性和它们的系统进化关系,以采自来自7个地理群体的150个泥蚶个体为材料,对其线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)的部分序列进行PCR扩增和序列比对,分析泥蚶群体的遗传多样性;计算泥蚶不同地理群体间的遗传距离及遗传分化系数,基于泥蚶群体平均遗传距离构建UPGMA聚类树;以毛蚶Anadara sativa为外群,用MEGA6.0软件中的ML法构建了泥蚶单倍型之间的系统进化树以及用Network4.6软件分析了所有单倍型的中介网络图。结果表明,泥蚶线粒体COI的基因片段的PCR产物大小约为509 bp。在目的序列片段中检测到了14个多态性位点,包括6个简约信息位点和8个单变异多态性位点,组成16个单倍型。群体中的核苷酸多态性和单倍型多态性均处于较低的水平,日本、海南、韩国三个群体的遗传变异程度相对较高。7个群体间的遗传距离在0.0002~0.0022之间,种群遗传分化系数(FST)值在-0.01646~0.34422之间。通过构建UPGMA聚类树,发现广西、江苏、山东三个群体聚成一个小支,之后依次和浙江、海南、韩国、日本聚在一起,但总体而言泥蚶的不同地理群体之间并没有形成明显的遗传分化。ML系统进化树和中介网络图表明在16个单倍型中,各单倍型之间未形成与其地理群体空间分布相对应的聚类单元,也不存在明显的进化关系。; 程雪艳柴雪良肖国强滕爽爽; 关键词：泥蚶 COI基因种群结构

泥蚶Smad1/5基因cDNA全长克隆及时空表达特征分析被引量：5: 2015年; 为了研究Smad1/5基因在泥蚶生长、发育过程中的调控作用,本研究利用SMART RACE方法克隆得到泥蚶Smad1/5基因(Tg-Smad1/5)的c DNA全长序列,该序列全长2 424bp,开放阅读框1 386 bp,编码462个氨基酸。Tg-Smad1/5蛋白与合浦珠母贝Smad5、太平洋牡蛎Smad5和大西洋舟螺Smad1的同源性分别达到了92.3%、91.2%和80.4%,与脊椎动物的同源性都在70%以上;该蛋白包含MH1和MH2区2个较为保守的结构域,此结构与高等动物Smad1和Smad5蛋白极为相似,表明该基因在物种进化过程中比较保守。利用qRTPCR技术,研究了Smad1/5基因在泥蚶6个组织和9个发育时期中的表达情况,结果显示,TgSmad1/5基因在泥蚶成贝6个组织中均有表达,在斧足中的表达量最高,极显著地高于其他组织;在各发育时期中,Tg-Smad1/5表达量随发育进程呈逐渐升高的趋势,在眼点幼虫期达到最高,极显著高于其他时期,而在变态至稚贝时,表达量又极显著地下降。研究结果表明,TgSmad1/5具有类似于高等动物的分子结构,并在泥蚶不同组织、不同发育时期表达有所差异,这为进一步研究该基因在贝类中的功能和作用机制奠定了重要基础。; 钱雪骏董迎辉姚韩韩林志华; 关键词：泥蚶基因克隆

文蛤生长因子受体结合蛋白2(GRB2)基因克隆、时空表达及SNP位点筛查被引量：5: 2015年; 为探索贝类GRB2基因的结构、功能特征,以及在贝类生长发育过程中的作用,实验通过已构建的文蛤转录组文库,利用SMART RACE技术扩增得到了文蛤GRB2基因的c DNA全长序列,对其生物信息学、组织及发育阶段表达特征进行了分析,并利用直接测序方法在外显子中筛选SNP位点。结果显示,GRB2基因c DNA全长1 791 bp,开放阅读框669 bp,编码223个氨基酸,蛋白由SH-SH2-SH3 3个结构域组成;氨基酸序列比对发现,文蛤G RB2与泥蚶的同源性最高,达到65.6%,与脊椎动物的同源性都在60%以上,说明GRB2基因在进化过程中比较保守。荧光实时定量PCR(qRT-PCR)结果表明,GRB2在文蛤6个组织和10个发育时期中均有表达,但不同组织间的表达量并没有显著差异;发育时期中的表达量呈现逐渐升高的趋势,在壳顶幼虫时期达到最高,之后表达量又有所降低。SNP位点的筛选结果表明,在G RB2基因的外显子区域共发现16个SNP位点。; 高晓艳董迎辉施沈佳姚韩韩阮文斌赵家熙林志华; 关键词：文蛤克隆 SNP

泥蚶HDAC1基因cDNA全长、内含子克隆及时空表达特征分析被引量：1: 2016年; HDAC1作为HDACs家族中重要成员,可使组蛋白去乙酰化进而调节基因表达,在细胞分化和胚胎早期发育中起重要作用。本文利用SMART RACE技术克隆得到泥蚶HDAC1(Tg-HDAC1)基因的cDNA全长序列,并对其内含子进行扩增及不同组织、不同发育时期的定量表达。结果发现:TgHDAC1基因的cDNA序列全长为2 275bp,开放阅读框(ORF)1 587bp,编码528个氨基酸;TgHDAC1蛋白序列与斑马鱼、鸡、小鼠等的相似性都在80%以上,表明该蛋白氨基酸序列在物种进化过程中具有保守性;在Tg-HDAC1基因中扩增出13个内含子,均存在于开放阅读框中,且都遵循GT-AG原则;荧光定量PCR(qRT-PCR)分析结果显示,Tg-HDAC1基因在成体血液、内脏团、外套膜、鳃、斧足和闭壳肌6个组织中均有表达,而在足中的表达量最高,且与其余5组织中的表达量有极显著差异(P<0.01),说明它对该组织生长具有重要作用。不同发育时期的表达差异结果表明,TgHDAC1基因在担轮幼虫期表达量最高,显著高于其他发育时期(P<0.05)。; 任付真姚韩韩董迎辉周小龙林志华; 关键词：泥蚶基因克隆内含子

4个缢蛏群体遗传多样性和系统发生关系的微卫星分析被引量：13: 2013年; 摘要：采用12个微卫星分子标记，对4个不同缢蛏（ Sinonovacula Constricta）群体：福建云霄群体、广东湛江群体、天津塘沽群体以及浙江乐清湾群体进行了遗传多样性和系统发生关系的分析。研究结果显示，12个微卫星共有46个等位基因，4个缢蛏群体的平均观测等位基因数似。）、平均观测杂合度（亿）、平均期望杂合度（鼠，）和平均多态信息含量（PIC）分别为3．25～3．50、0．59～0．74、0．55～O．58和0．46～0．50。说明4个缢蛏群体遗传多样性处于中等多态。UPGMA聚类分析表明：乐清湾群体、天津塘沽群体间的遗传距离最小，亲缘关系最近，首先聚为一支，福建云霄群体和广东湛江群体聚为另一支。群体的F-统计量（Fst）为0．07，表明缢蛏群体分化很微弱。; 刘博邵艳卿王侃滕爽爽柴雪良方军张炯明肖国强; 关键词：微卫星

文蛤HDAC1基因克隆、时空表达及生长相关SNP位点筛查被引量：4: 2016年; 为探索HDAC1基因在文蛤生长发育中的作用,研究通过已构建的文蛤转录组文库,利用SMART RACE技术扩增得到文蛤HDAC1(Mm-HDAC1)基因的c DNA全长序列,分析了其生物信息学、组织及发育阶段表达特征,并用直接测序法在外显子中筛查生长相关的SNP位点。结果显示,Mm-HDAC1基因的c DNA全长3065 bp,开放阅读框1599 bp,编码532个氨基酸;氨基酸序列比对发现,文蛤与其他物种同源性为74.3%—78.7%。荧光定量PCR(q RT-PCR)结果表明,Mm-HDAC1基因在文蛤6个组织中均有表达,其中外套膜中的表达量相对最高,并与其他组织间有极显著差异(P<0.01);不同发育时期的表达差异结果表明,MmHDAC1基因在壳顶幼虫期表达量最高,显著高于其他发育时期(P<0.05)。SNP位点筛查结果表明,在MmHDAC1基因的外显子区域发现了19个SNP位点,其中有3个SNP位点(627A>T、924T>C和1266T>C)与文蛤生长相关。; 高晓艳董迎辉姚韩韩林志华; 关键词：文蛤组蛋白去乙酰化酶1 CDNA 荧光定量

基于微卫星的泥蚶5个地理群体遗传多样性分析被引量：7: 2015年; 为了研究泥蚶不同地理群体的系统发育关系和遗传多样性,运用微卫星DNA标记,对浙江温州（ZJ）、山东日照（SD）、韩国釜山（KR）、广西企沙（GX）、海南海口（HN）等5个泥蚶地理群体进行了17个基因位点的遗传多样性分析。结果显示,从17对引物中共检测出115个等位基因,每个位点等位基因数（Na）2~12个。有效等位基因数（Ne）为1.192~7.849,平均观测杂合度（Ho）为0.430~0.516,平均期望杂合度（He）为0.573~0.656,5个群体的平均多态信息含量（PIC）为0.525~0.608。Hardy-Weinberg平衡检验表明,51.2%的微卫星位点偏离平衡状态（P〈0.05）。5个群体间的种群遗传分化系数（FST）为0.012~0.062,呈现出较低的遗传分化。UPMGA聚类分析表明,浙江群体和韩国群体首先聚在一起,亲缘关系最近,然后与海南群体聚合;广西群体和山东群体亲缘关系较近,聚为一支,然后与上面三个群体聚合。; 程雪艳滕爽爽肖国强邵艳卿张炯明方军柴雪良; 关键词：泥蚶微卫星地理群体

泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶基因的全长克隆与表达分析被引量：5: 2016年; 为了探讨谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPx)基因在泥蚶应激反应中的作用,研究采用RACE技术克隆了泥蚶GPx基因(TgGPx)c DNA全长,其c DNA全长1195 bp,包含45 bp 5′-UTR,639 bp开放阅读框(ORF)和511 bp 3′-UTR。ORF编码212个氨基酸残基,预测蛋白分子量为24.3 k D,理论等电点为8.33,其中,第53个氨基酸U是由密码子202UGA204编码的硒代半胱氨酸(Se-Cys)。在3′-UTR上存在一段序列,形成一种独特的茎环结构,即SECIS元件。SECIS元件在密码子UGA翻译为Se-Cys的过程中起决定性作用。通过序列比对与系统进化分析,发现软体动物中也存在不同种类的GPx基因,TgGPx与GPx1和GPx2的亲缘关系较近。利用qRT-PCR技术对TgGPx在泥蚶的不同组织以及重金属刺激后的表达量进行分析,结果表明,TgGPx在泥蚶的5个组织中都有表达,但存在组织特异性,在外套膜中的表达量最高,在血细胞中的表达量最低。用重金属铅、铜、镉刺激后,TgGPx在肝胰脏中的表达量显著升高,表明TgGPx在维护机体正常功能方面及泥蚶抵御外界刺激的应激反应中发挥作用。; 程雪艳蒋国萍柴雪良滕爽爽; 关键词：泥蚶谷胱甘肽过氧化物酶全长克隆基因表达

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浙江省重大科技专项基金(2012C12907-4)

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