博士科研启动基金(2007JCX06)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：尹辉龚非力龚权熊平杨衡更多>>
- 相关机构：华中科技大学广东药学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家重点基础研究发展计划广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠sST2基因真核表达及其对LPS活化RAW264.7巨噬细胞的调节作用被引量：3
- 2009年
- 目的:克隆并构建含小鼠sST2和人IgGFc融合基因的真核表达质粒,初步探讨其表达产物sST2-Fc融合蛋白对LPS刺激小鼠巨噬细胞生物学活性的影响。方法:借助RT-PCR技术,从小鼠脾脏总RNA中扩增全长sST2cDNA,构建sST2与hIgGFc段融合基因的真核表达载体(psST2-Fc)。应用脂质体将重组质粒psST2-Fc转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达sST2-Fc融合蛋白的CHO细胞株。细胞培养上清经蛋白A亲和层析纯化后,采用Western blot进行鉴定,应用FACS检测sST2-Fc与RAW264.7巨噬细胞表面相应受体结合情况;ELISA法检测sST2-Fc对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞分泌TNF-α和IL-6的影响。结果:测序证实克隆和构建的小鼠sST2-FccDNA阅读框序列正确,Western blot证实sST2-Fc融合蛋白的表达,sST2-Fc抑制LPS诱导巨噬细胞分泌的炎性细胞因子TNF-α和IL-6。结论:成功构建sST2-Fc融合基因并获得稳定表达,sST2-Fc通过与其特异性受体结合可抑制巨噬细胞介导的炎性反应。
- 尹辉龚权杨衡熊平郑芳龚非力
- 关键词：真核表达RAW264.7IL-6
