国家自然科学基金(81000862)
- 作品数：8 被引量：16H指数：4
- 相关作者：苟巧王春燕佟鹏魏志权张伟更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家社会公益研究专项计划卫生行业科研专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- GPX1过表达对肺癌BERP35T1细胞DNA氧化损伤和恶性表型的影响被引量：5
- 2016年
- 目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶1(GPX1)过表达对α粒子辐射致肺癌BERP35T1细胞DNA氧化损伤和恶性表型的影响。方法:构建pEGFP-GPX1真核表达载体,经PCR、双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将重组质粒及其对照空载体分别转染至BERP35T1细胞中,筛选出具有G418抗性的细胞株,经Western blot法测定GPX1蛋白在细胞株中的表达情况;通过免疫细胞化学法、四甲基噻唑蓝(MTT)法、划痕愈合试验和锚着独立生长试验分别检测GPX1过表达对BERP35T1细胞内DNA氧化损伤产物8-羟化脱氧鸟苷(8-OHdG)水平,细胞增殖、迁移以及锚着独立生长能力的影响。结果:pEGFP-GPX1经PCR、双酶切鉴定和DNA测序证实,GPX1片段的序列完全正确;并获得GPX1稳定表达BERP35T1细胞株BERP35T1-GPX1-6,其GPX1蛋白水平是对照空载体转染细胞的4.01倍(P<0.05);与BERP35T1细胞和对照空载体转染细胞相比,BERP35T1-GPX1-6细胞内8-OHdG水平降低,细胞的增殖、迁移和锚着独立生长能力均减弱(P<0.05)。结论:过表达GPX1可能通过清除细胞内活性氧降低DNA氧化损伤水平,从而抑制BERP35T1细胞增殖、迁移和锚着独立生长能力等恶性表型。
- 邵帅魏志权张伟佟鹏王春燕齐雪松苟巧
- 关键词：Α粒子肺癌
- α粒子诱发BEP2D细胞恶性转化中脂质和DNA氧化损伤的研究被引量：3
- 2012年
- 目的 探讨α粒子诱发永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化的机制。 方法 运用DCFH-DA荧光探针标记活性氧（ROS）,观察分析BEP2D细胞、α粒子作用BEP2D后第22代细胞RH22,以及α粒子作用BEP2D后恶性转化细胞株BERP35T-1内基础活性氧水平。丙二醛（MDA）测定试剂盒检测BEP2D、RH22和BERP35T-1细胞内脂质过氧化产物丙二醛的含量。采用免疫细胞化学法和免疫荧光染色法,检测BEP2D、α粒子作用BEP2D后第23代细胞RH23及BERP35T-1细胞内DNA氧化损伤产物8-OH-dG和DNA双链断裂产物γ-H2AX的表达水平。 结果 与BEP2D细胞相比,RH22和BERP35T-1细胞中基础活性氧水平显著升高（t=4.30和3.94,P〈0.05）,丙二醛的含量显著升高（t=4.89和15.10,P〈0.05）;RH23和BERP35T-1细胞中8-OH-dG表达上调（t= 3.80和2.92,P〈0.05）,γ-H2AX表达上调（t=7.61和12.67,P〈0.05）。结论 氧化还原环境紊乱形成氧化压力,导致细胞内脂质和DNA氧化损伤增强,由此促进基因组不稳定性,可能是α粒子诱发BEP2D细胞恶性转化的机制之一。
- 苟巧王春燕张翠兰佟鹏苏旭
- 关键词：人支气管上皮细胞Α粒子活性氧癌变
- 过氧化氢酶与肿瘤的关系被引量：4
- 2013年
- 哺乳动物体内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)是一类含有氧元素的自由基,与肿瘤的发生、发展关系密切。过氧化氢酶(catalase,CAT)是体内重要的抗氧化酶,在清除ROS、维持氧化还原状态的平衡方面发挥着重要作用。本文对CAT的结构、作用机制及其在肿瘤发生、发展和治疗中的作用进行综述,为肿瘤的预防和治疗提供新思路。
- 魏志权苟巧张伟
- 关键词：过氧化氢酶活性氧肿瘤致癌机制
- N-乙酰半胱氨酸对支气管上皮细胞辐射致癌模型DNA氧化损伤和存活率的影响被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)对人支气管上皮细胞辐射致癌模型BERP35T-1细胞DNA氧化损伤和存活率的影响。方法:运用Western blot法检测人支气管上皮细胞BEP2D,RH22和BERP35T-1,以及用不同浓度NAC(0～2mmol/L)作用BERP35T-1 48 h后,细胞内DNA双链断裂产物γH2AX的表达水平变化;免疫细胞化学法检测1 mmol/L NAC作用BERP35T-1不同时间(0～48 h)后细胞内DNA氧化损伤产物8-OH-dG的表达水平;DCFH-DA荧光探针标记结合流式细胞仪检测1mmol/L NAC作用BERP35T-1 48 h后细胞内活性氧(active oxygen radicals,ROS)水平变化;二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测空白对照组、药物组(1 mmol/L NAC作用48 h)、照射组(2 Gyγ射线照射)和联合作用组(1 mmol/L NAC预处理48 h后+2 Gyγ射线照射)BERP35T-1细胞的存活率差异。结果:与BEP2D细胞相比,RH22和BERP35T-1细胞中γH2AX表达增强(P<0.01);BERP35T-1较RH22中γH2AX表达增强(P<0.01);1～2 mmol/LNAC作用BERP35T-1细胞48 h后,细胞中γH2AX的表达受到显著抑制(P<0.01);1 mmol/L NAC作用BERP35T-1细胞24～48 h可显著下调细胞内8-OH-dG的表达(P<0.05或P<0.01);1 mmo1/L NAC作用BERP35T-1细胞48 h后,细胞内ROS水平显著降低(P<0.05);药物组与空白对照组相比,BERP35T-1细胞存活率降低(P<0.01);联合作用组与单纯照射组相比,BERP35T-1细胞存活率增高(P<0.05)。结论:抗氧化剂NAC可能通过提高恶性转化细胞BERP35T-1的抗氧化能力,降低细胞内ROS和DNA氧化损伤水平,促进基因组稳定性,部分逆转BERP35T-1细胞的恶性表型,并降低其辐射敏感性。
- 苟巧王春燕佟鹏吕慧敏齐雪松郝述霞魏志权
- 关键词：N-乙酰半胱氨酸Α粒子细胞存活率
- α粒子诱发BEP2D细胞恶性转化中抗氧化能力和辐射敏感性研究被引量：6
- 2011年
- 目的研究α粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中细胞的抗氧化能力和辐射敏感性变化。方法运用谷胱甘肽过氧化物酶（GPX）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽（GSH）试剂盒分别检测永生化人支气管上皮细胞BEP2D、α粒子作用BEP2D后第21代细胞RH21和α粒子作用BEP2D细胞后形成的恶性转化细胞BERP35T-1内抗氧化酶GPX和CAT的活性以及抗氧化剂GSH的含量；四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测0、30、60、90、120和150μmol／L H2O2作用BEP2D、RH21和BERP35T-1细胞96h后，细胞增殖率的差异；0、2、4和8Gy1射线照射BEP2D、RH21和BERP35T．1细胞7～9d后，用细胞克隆计数和MTT法检测细胞增殖率和存活分数的变化。结果RH21和BERP35T-1细胞中GPX酶活力均低于BEP2D细胞（t=5．75和7．65，P〈0．05）。BEP2D细胞中CAT酶活力是RH21细胞的2．64倍，是BERP35T-1细胞的5．76倍。RH21细胞中GSH含量与BEP2D细胞比较，差异无统计学意义；恶性转化细胞BERP35T-1内GSH含量则明显低于BEP2D细胞（t=7．76，P〈0．05）。与BEP2D细胞相比，60、90、120和150μmol／LH202作用后RH21细胞的增殖率降低（t=29．90—84．68，P〈0．01），30、60、90、120和150μmol／LH202作用后BERP35T-1细胞的增殖率降低（t=10．37～58．36，P〈0．01）。4和8Gy γ射线照射后，RH21细胞的增殖率和存活分数均显著低于BEP2D细胞（t=6．33—45．00，P〈0．05）；2、4和8Gy^y射线照射后，BERP35T-1细胞的增殖率和存活分数较BEP2D细胞明显降低（t=5．87—34．17，P〈0．05）。结论 α粒子诱发人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化过程中，细胞的抗氧化能力降低、辐射敏感性增强。抗氧化系统功能减弱可能是α粒子诱发BEP2D细胞恶性转化和辐射敏感性增强的机制之一。
- 苟巧张伟王春燕苏旭
- 关键词：人支气管上皮细胞Α粒子抗氧化能力癌变
- 乙酰半胱氨酸对^(238)Pu α粒子致肺癌模型活性氧和表型影响被引量：1
- 2012年
- 目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对钚-238(238Pu)α粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35T-1细胞内活性氧自由基(ROS)水平以及细胞增殖和迁移的影响。方法用不同浓度NAC(0～10 mmol/L)作用BERP35T-1细胞72 h后,以及BERP35T-1细胞经1 mmol/L NAC作用不同时间(0～72 h)后,二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况;DCFH-DA荧光探针标记结合荧光显微镜观察实验和细胞划痕愈合实验分别检测人支气管上皮细胞BEP2D、BERP35T-1细胞以及1 mmol/L NAC作用BERP35T-1 48 h后细胞内ROS水平和细胞的迁移能力。结果 1～10 mmol/LNAC作用BERP35T-1 72 h后,以及1 mmol/L NAC作用BERP35T-1 24～72 h后,细胞增殖受到显著抑制(P<0.01)。与BEP2D细胞比较,BERP35T-1细胞内ROS水平明显升高(P<0.01),细胞的迁移能力明显增强(P<0.01);1 mmol/LNAC作用BERP35T-1 48 h后,细胞内ROS水平显著降低(P<0.01),细胞的迁移能力显著减弱(P<0.01)。结论抗氧化剂NAC可显著抑制人支气管上皮细胞α粒子辐射致癌模型BERP35T-1的恶性增殖和迁移,作用机制可能与其降低细胞内基础ROS水平有关。
- 佟鹏王春燕魏志权齐雪松郝述霞苟巧
- 关键词：N-乙酰半胱氨酸Α粒子肺癌
- α粒子诱发BEP2D细胞恶性转化中细胞内抗氧化蛋白和活性氧水平研究被引量：4
- 2011年
- 目的:研究α粒子诱发永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化过程中细胞内主要抗氧化蛋白的表达和活性氧(ROS)水平以及DNA双链断裂水平的变化。方法:选择BEP2D细胞、RH22细胞和BERP35T-1细胞,采用Western blot检测细胞内抗氧化蛋白过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPXs)以及铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)和锰-SOD(Mn-SOD)的表达;采用SOD测定试剂盒检测细胞内总SOD(T-SOD)、Cu/Zn-SOD和Mn-SOD酶活力;荧光探针标记结合流式细胞仪检测细胞内基础H_2O_2和O_2^(?)水平;中性彗星电泳法检测细胞内DNA双链断裂水平。结果:与BEP2D细胞相比,RH22和BERP35T-1细胞内抗氧化蛋白CAT和GPX1表达下调(P<0.05或P<0.01),GPX3、Cu/Zn-SOD和Mn-SOD表达增强(P<0.05或P<0.01);且T-SOD、Cu/Zn-SOD和Mn-SOD活力均显著升高(P<0.05或P<0.01)。RH22和BERP35T-1细胞内基础O_2^(?)水平低于BEP2D细胞,基础H_2O_2和DNA双链断裂水平则高于BEP2D细胞(P<0.05)。结论:细胞内氧化/抗氧化失衡形成氧化压力,促进DNA氧化损伤和基因组不稳定性,可能是α粒子诱发BEP2D细胞恶性转化的机制之一。
- 苟巧佟鹏王春燕张翠兰苏旭
- 关键词：人支气管上皮细胞Α粒子活性氧癌变
- 过氧化氢酶过表达对α粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响被引量：1
- 2015年
- 目的探讨过氧化氢酶(catalase,CAT)过表达对α粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35T1内DNA氧化损伤水平和恶性表型的影响。方法构建p EGFP-CAT真核表达质粒,经PCR、双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组表达质粒及空载体转染至BERP35T1细胞中,经G418筛选出具有抗性的细胞株。Real-time PCR和Western blot法检测BERP35T1细胞中CAT基因m RNA转录和CAT蛋白表达水平;免疫细胞化学法、MTT法、细胞划痕愈合试验和锚着独立生长试验分别检测CAT过表达对BERP35T1细胞DNA氧化损伤水平(8-OHd G水平)、增殖(细胞存活率)、迁移能力(细胞迁移距离)和锚着独立性(软琼脂克隆形成率)的影响。结果重组表达质粒p EGFP-CAT经PCR、酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,获得了CAT稳定表达的BERP35T1细胞株BERP35T1-CAT-7。空白对照BERP35T1、BERP35T1-p EGFP和BERP35T1-CAT-7细胞中CAT基因m RNA转录水平分别为0.90±0.23、1.00±0.12和2.91±0.41,CAT蛋白相对表达水平分别为0.97±0.11、1.00±0.00和5.72±1.28,8-OHd G表达水平分别为1.65×10-2、1.60×10-2和8.95×10-3,细胞存活率分别为(95.33±4.26)%、(100.00±8.29)%和(61.63±3.08)%,细胞迁移距离分别为(150.68±9.98)μm、(115.02±30.73)μm和(44.25±10.53)μm,细胞软琼脂克隆形成率分别为(2.50±0.02)‰、(2.10±0.02)‰和(0.70±0.02)‰。结论 CAT过表达可能通过降低DNA氧化损伤水平,抑制BERP35T1细胞的增殖、转移和锚着独立生长能力等恶性表型。
- 佟鹏魏志权张伟邵帅王春燕齐雪松苟巧
- 关键词：过氧化氢酶过表达Α粒子肺癌DNA氧化损伤
