武汉市科技攻关计划项目(20022002062)
- 作品数：7 被引量：69H指数：6
- 相关作者：毕丁仁熊宁王喜亮石德时刘百红更多>>
- 相关机构：华中农业大学湖北省兽药监察所连云港出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：武汉市科技攻关计划项目江苏检验检疫局科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学理学医药卫生更多>>
- 牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：6
- 2009年
- 从持续感染牛白血病病毒(BLV)的羊胎肾细胞(FLK-BLV)中提取前病毒DNA,用PCR方法扩增编码牛白血病病毒gp51蛋白的env(gp51)基因,序列测定结果表明扩增片段全长828 bp。将扩增基因插入原核表达载体pET-32a构建pET-32a-gp51重组质粒,转化BL21(DE3)进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明重组融合蛋白大小约为43 000,Western-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白gp51作为抗原,建立检测BLV抗体的间接ELISA诊断方法。结果表明,抗原gp51的最佳包被浓度为2.19μg.mL-1,血清的最佳稀释倍数为1∶80,阳性判定标准确定为样品OD450 nm大于0.451。用该方法对12份参考血清进行检测,准确率为91.67%。
- 周毅吴玉石段宏安张睿周祖涛毕丁仁石德时
- 关键词：牛白血病病毒原核表达间接ELISA
- 免疫层析法快速测定鸡肉和鸡蛋中磺胺类药物残留被引量：7
- 2008年
- 目的:用免疫层析试纸条法快速测定鸡蛋及鸡肉中磺胺类药物残留。方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记抗磺胺类药物母核结构单克隆抗体,磺胺类药物竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。结果:该方法可以在15分钟内完成对磺胺类药物的半定量残留检测,检测磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)的灵敏度为10ng/ml,肉眼判定检测限为20ng/ml,样品中回收率在85%～95.6%之间;检测磺胺嘧啶(SDZ)的灵敏度为10ng/ml,肉眼判定检测限为40ng/ml,样品中的回收率在44.8%～60.9%之间。用本方法与高效液相色谱法(HPLC)对来自动物试验的鸡肉和鸡蛋样品进行对比检测,具有较高的符合率。结论:该方法灵敏度高,检测快速、准确,无需特殊仪器设备,可作为磺胺类药物残留的快速筛选方法。
- 李奎王喜亮金秀娥石德时熊宁郝卫芳郭延成刘群毕丁仁
- 关键词：免疫层析磺胺类药物鸡肉鸡蛋
- 胶体金免疫层析法半定量检测鸡肉中磺胺嘧啶残留被引量：17
- 2007年
- 本研究采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体,磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条。该试纸条可以在15min内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测,灵敏度为5ng/ml,与其它磺胺类药物无交叉反应,在鸡肉中的回收率为71%～95%;用试纸条与高效液相法对来自动物试验的56份鸡肉样品进行对比检测。以我国磺胺嘧啶残留限量标准(100ng/g)为标准,二者符合率为100%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。
- 王喜亮易俊东金秀娥李奎卢芳熊宁刘群刘百红毕丁仁
- 关键词：胶体金免疫层析鸡肉磺胺嘧啶
- 免疫层析法测定动物源性食品中磺胺嘧啶残留被引量：9
- 2008年
- 建立了动物源性食品中磺胺嘧啶残留的免疫层析快速测定方法。用胶体金标记磺胺嘧啶单克隆抗体作为显色剂，磺胺嘧啶竞争物包被于硝酸纤维素层析膜上作为捕获试剂，采用竞争反应模式制成胶体金免疫层析试纸。该免疫层析试纸可以在15min内完成对磺胺嘧啶残留的半定量检测。读条系统判定灵敏度为5ng／ml，肉眼判定检测限灵敏度为10ng／ml，与其它磺胺类药物无交叉反应。该方法在不同动物源性食品（鸡肉、鸡蛋、鸡肝、猪肉、猪肝、牛奶、蜂蜜）中添加磺胺嘧啶的回收率在68．1％-118．8％范围内。动物试验样品检测结果表明，该方法与ELISA及HPLC具有好的符合率。该方法灵敏度高，检测准确、简便、快速，有良好的开发应用前景。
- 王喜亮金秀娥李奎熊宁石德时毕丁仁
- 关键词：胶体金免疫层析磺胺嘧啶
- 胶体金试纸条半定量检测鸡蛋中磺胺嘧啶残留被引量：8
- 2008年
- 采用竞争反应模式建立了鸡蛋中磺胺嘧啶(SD)残留的胶体金试纸条半定量检测方法。该试纸条由吸样材料、玻璃纤维、硝酸纤维素膜、吸水材料组成。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金标记SD单克隆抗体;SD竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成胶体金试纸条。该试纸条在15min内可完成对SD残留的半定量检测,读条系统判定灵敏度为5μg/L,肉眼判定检测限为10μg/L,与其他磺胺类药物无交叉反应,在鸡蛋中的回收率为71%~96.7%;用试纸条与ELISA对来自动物试验的52份鸡蛋样品进行对比检测,以10、100ng/g为cutoff值,两者阳性(大于100ng/g)符合率为100%,弱阳性(10~100ng/g)符合率为72.7%,阴性(小于10ng/g)符合率为84.2%,两者总符合率为94.2%。该方法灵敏度高,简便快速,无需特殊仪器设备,有良好的开发应用前景。
- 王喜亮金秀娥李奎熊宁易俊东刘百红卢芳刘群毕丁仁
- 关键词：胶体金试纸条鸡蛋磺胺嘧啶
- 直接竞争ELISA检测氯霉素残留的方法建立及初步应用被引量：12
- 2007年
- 用混合酸酐法合成氯霉素的CAP抗原,用过碘酸钠氧化法合成CAP酶标记抗原,用ELISA方法对合成的CAP抗原、CAP酶标记抗原进行鉴定表明其与抗CAP单克隆抗体具有特异性反应。在此基础上建立了包被二抗的直接竞争ELISA方法。特异性试验结果表明,CAP琥珀酸酯、CAP琥珀酸钠盐的交叉反应率分别为107%、106.4%;甲砜霉素、氟甲砜霉素与CAP的交叉反应率小于0.016%;与其他结构类似物间未见交叉反应。该方法对CAP的检测限可达到0.1μg/L,IC50为11.6μg/L,线性范围0.1～100μg/L,批内变异系数小于11.5%,批间变异系数小于19.6%。对猪肉、鸡肉、蜂蜜分别添加1.0、3.0、10.0、30.0μg/L CAP标准品,回收率61.0%～102.0%,变异系数为6.6%～15.8%;对猪肉、鸡肉、蜂蜜中CAP的最低检测限分别为0.48、0.42、1.20μg/kg。
- 李晓云石德时王喜亮熊宁刘百红张道宏毕丁仁
- 关键词：氯霉素药物残留
- 直接竞争ELISA法快速检测动物源性食品中磺胺嘧啶残留被引量：14
- 2008年
- 采用重氮化-偶联法将磺胺嘧啶（SD）与人血清白蛋白（HSA）相连制备了免疫抗原SD—HSA，与卵清白蛋白（OVA）相连制备了包被抗原SD—OVA，用过碘酸钠法将SD—OVA与辣根过氧化物酶（HRP）连接制备了酶标抗原（SD—OVA—HRP）。用SD—HSA免疫BALB／c小鼠，经融合、筛选和克隆化制备了单克隆抗体，利用单抗建立了直接竞争ELISA方法。该方法具有好的特异性，在1—729ng／mL浓度范围标准曲线方程Y=12．05x＋2．2538，R^2=0．995，IC50为41．7ng／mL，在猪肉、鸡肉、鸡肝、鸡蛋、牛奶中的检测限分别为20、20、20、5、5μg/kg。在20μg／kg和100μg／kg水平猪肉、鸡肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋样品中添加，回收率为82．78％-104．6％。与高效液相色谱方法比较，二者的阳性符合率为81．3％，阴性符合率为83．3％，总符合率为88．9％；与同类英国RANDOX试剂盒比较，二者符合率为100％。
- 刘百红熊宁王喜亮石德时李晓云彭大鹏毕丁仁
- 关键词：磺胺嘧啶单克隆抗体ELISA
