广东省科技计划工业攻关项目(2007A060305003)
- 作品数：3 被引量：31H指数：2
- 相关作者：张钰黄韧袁文刘忠华王静更多>>
- 相关机构：广东省实验动物监测所更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查被引量：23
- 2010年
- 目的了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况。方法随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况。结果共检测小鼠盲肠内容物206份,阳性样本为77份,阳性率为37.38%。3个设施的小鼠感染MNV,各品系小鼠易感性差异无显著。结论证实广东省小鼠存在MNV感染,部分设施小鼠MNV感染率很高,需加强动物的饲养管理。RT-PCR方法可以应用于MNV感染检测。
- 袁文张钰刘忠华潘金春王静罗琴芳黄韧
- 关键词：自然感染
- 小鼠肝炎病毒逆转录环介导等温扩增检测技术的建立被引量：8
- 2009年
- 目的建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并进行初步应用。方法针对MHV核衣壳蛋白基因序列设计6条特异性引物,以MHV基因组RNA为模板,进行RT-LAMP反应。扩增产物通过浊度、SYBR green I荧光染料显色及电泳三种方法观察结果。同时,用限制性内切酶AluI对扩增产物进行酶切鉴定。进行RT-LAMP特异性和敏感性试验。最后用建立的RT-LAMP方法检测55份小鼠临床样本。结果RT-LAMP技术简单快速,等温条件下(65℃)一个小时内即可完成反应。酶切结果证明RT-LAMP产物正确。该技术具有很高的特异性和敏感性,可检测到的MHV RNA最低浓度为0.1 pg/μL,比逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)灵敏10倍。临床样本检测结果显示,与RT-PCR比较RT-LAMP方法的敏感性和特异性分别为100%和83.3%。结论RT-LAMP技术是一种快速、简便诊断方法,该方法检测特异性强、敏感性高,可以成为快速准确检测MHV的有效手段。
- 袁文刘忠华张钰刘香梅黄韧
- 关键词：小鼠肝炎病毒逆转录聚合酶链式反应
- 小鼠脑脊髓炎病毒非编码蛋白片段实时荧光定量PCR标准品的构建被引量：2
- 2012年
- 目的构建小鼠脑脊髓炎病毒（TMEV）非编码蛋白（UTR）片段标准品，用于实时荧光定量PCR检测小鼠脑脊髓炎病毒。方法RT-PCR扩增TMEVuTR片段上80-1094nt之间长度为1014bp的片段，将目的片段连接至pMD18-T载体，转化至DH5α感受态细胞。分别经PCR鉴定和序列测定验证重组质粒。分光光度计测量重组质粒的吸光值，换算成拷贝数浓度后作10倍梯度稀释制得质粒标准品。然后进行实时荧光定量PCR分析，绘制标准曲线。结果TMEVUTR片段成功克隆至pMD18-T载体中，测序结果表明重组质粒中插入的UTR序列正确，实时荧光定量PCR分析10倍梯度系列稀释的质粒标准品所得到的标准曲线良好，统计学分析显示α值与标准品浓度的对数存在良好线性关系，回归系数在0．99以上。结论成功构建了TMEVUTR片段实时荧光定量PCR标准品，为今后TMEV实时荧光定量PCR检测打下了基础。
- 袁文张钰王静刘香梅黄韧
- 关键词：实时荧光定量PCR标准品
