浙江省科技攻关计划(2004C12010)
- 作品数：10 被引量：96H指数：5
- 相关作者：梁运祥赵述淼徐顺清崔罗生张忠明更多>>
- 相关机构：华中农业大学更多>>
- 发文基金：浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生农业科学更多>>
- 产低温脂肪酶假单胞菌的选育及产酶条件的优化被引量：24
- 2006年
- 从取自华中农业大学的土样和长江流域及桂林桃花江水样中筛选到一株产低温脂肪酶的适冷菌,初步鉴定为假单胞菌,命名为Pseudomonas sp.YT34-8。对其产酶条件进行优化,得到其最佳发酵条件为:玉米浆2.00%,豆饼粉2.50%,蔗糖1.00%,橄榄油0.57%,MgSO4.7H2O 0.05%,K2HPO4 0.10%,发酵温度8℃,初始pH值7.0,发酵时间48 h,250 mL摇瓶装液量21 mL;摇瓶转速182 r.min-1。在此条件下,其发酵酶活力可达到7.833 U.mL-1。对其所产低温脂肪酶进行初步研究,其最适作用pH值为8.0,最适作用温度为30℃,在pH值5.0～10.0范围内、40℃以下酶活力较稳定。
- 余琼梁运祥
- 关键词：低温脂肪酶适冷菌
- 耐胃肠道环境及肠道病原菌拮抗的猪源乳酸菌的分离与筛选被引量：19
- 2007年
- 从健康猪粪便筛选分离到对肠道致病菌有较强抑制特性的3株乳酸菌,分别鉴定为屎肠球菌(Enterococcus faecium)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。体外益生特性研究表明:3株乳酸菌能耐受胃肠道环境,能黏附猪小肠表面粘液,对猪源产肠毒素型大肠杆菌(Escherichia coli O139,E. coli O139)、E. coli C83905、E. coli C83524、E. coli C83529、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium O4Hi,ST O4 Hi)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)均有较强的抑制特性。对小白鼠肠道大肠杆菌的数量进行研究,结果证明对照组大肠杆菌数量没有明显降低,而添加乳酸菌组大肠杆菌数量明显降低。对小白鼠腹腔注射E. coliC83905,乳酸菌组死亡率明显小于对照组。结果证明3株乳酸菌在猪饲料添加剂方面有较好的应用前景。
- 沈中艳赵述淼梁运祥
- 关键词：乳酸菌益生特性
- 黑曲霉内切β-1,4-葡聚糖酶在毕赤酵母中的高效表达被引量：9
- 2008年
- 利用RT-PCR技术,提取黑曲霉(Aspergillusniger)L3的总RNA进行反转录,并通过PCR扩增得到去除天然信号肽的β-1,4-葡聚糖酶基因egⅠ,将其插入到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,使之位于α-因子信号肽下游,并与之同框,构建重组表达质粒pPIC9k-egⅠ,电击转化毕赤酵母GS115,经MM、MD、CMC-Na和G418平板筛选,得到重组毕赤酵母工程菌1#和5#,在摇瓶中β-1,4-葡聚糖酶酶活分别达到1456U/mL和1928U/mL。重组酶最适温度为70℃,最适pH为5.0。
- 黄君张昌毅赵述淼梁运祥
- 关键词：黑曲霉毕赤酵母
- 动物肝组织中丙二醛含量测定方法的改进被引量：21
- 2010年
- 目的初步探讨糖类物质对肝组织中丙二醛(MDA)含量测定的干扰并改进测定方法。方法该实验以含糖量不同的小鼠肝匀浆作为实验材料,通过葡萄糖在450nm和532nm处吸光度值的正相关关系建立直线回归方程,校正MDA在532nm处的吸光度值。计算出样品中MDA含量。结果肝组织中糖类物质会干扰MDA含量的测定,尤其是当样品中糖量含量间差异较大时,糖的干扰可能导致对机体受损程度的错误评判。结论改进后的方法更为科学、准确,可应用于动物肝组织丙二醛含量的测定。
- 周琪梁运祥
- 关键词：丙二醛灵芝多糖葡萄糖
- 壳聚糖酶产生菌Mitsuaria sp.141-2的产酶发酵工艺被引量：2
- 2007年
- 对产壳聚糖酶突变株Mitsuaria sp.141-2进行了研究,结果表明,该菌株所产的壳聚糖酶为诱导酶,最适作用pH值4.0,最适作用温度37～42℃。通过单因素试验和正交试验,得到优化的产酶条件:壳聚糖0.50/、装液量100mL·500mL-1三角瓶、起始pH值7.0、接种量2/、温度30℃、培养时间48h。在此条件下,酶活力可达3.631U·mL-1。
- 胡远亮李专梁运祥
- 关键词：壳聚糖酶发酵工艺正交试验
- 多酶交替降解壳聚糖及其酶解产物分子量分布的研究被引量：3
- 2007年
- 用纤维素酶和甘露聚糖酶对壳聚糖进行交替降解,对酶的降解产物用Sephadex G100凝胶色谱柱进行分离,分析水解产物的相对分子质量分布。研究表明,先用纤维素酶水解24h,再用甘露聚糖酶水解24h,可将分子量为100万左右的壳聚糖部分完全降解,产物相对分子质量主要分布在10000Da以下。
- 李专胡远亮梁运祥
- 关键词：壳聚糖甘露聚糖酶纤维素酶凝胶色谱
- 乳酸克鲁维酵母乳糖酶基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质被引量：2
- 2010年
- 通过PCR扩增从乳酸克鲁维酵母基因组获得乳糖酶基因lac4,将其克隆至大肠杆菌表达载体pET-28a(+),并在大肠杆菌BL21中获得表达,酶活性达(44.78±2.84)U/mL。利用Ni-ResinHP亲和层析技术纯化该酶,SDS-PAGE分析表明,重组酶分子质量约为122ku。酶学性质研究表明,该酶最适反应温度为43℃,37℃时半衰期为30min,最适反应pH为7.0,在pH4.0～10.0范围内有良好的稳定性,Ca2+、Zn2+、Fe2+、Co2+、Mg2+、Mn2+对酶有非常明显的激活作用,比酶活性为(255.55±2.32)U/mg,酶反应常数Km为3.49mmol/L,最大反应速率vmax为4.22mmol/(min.mg)。
- 徐顺清陈杏洲崔罗生梁运祥张忠明
- 关键词：乳酸克鲁维酵母乳糖酶基因表达酶学性质
- 油菜花粉黄酮的提取与纯化被引量：9
- 2007年
- 对油菜花粉黄酮的提取与纯化工艺进行了系统的研究。结果表明,在95℃水浴条件下,按1∶35的固液比加入95%乙醇提取2h为最佳,破壁花粉黄酮得率3.167%,较未破壁花粉提高了50.6%;8种大孔树脂中DM-130型树脂为纯化的最适树脂,在最佳上样量16.78mg,并用最佳洗脱液50mL50%乙醇洗脱的情况下,产品黄酮纯度达到60.5%。
- 王芙蓉梁运祥
- 关键词：油菜花粉黄酮纯化
- 黑曲霉木聚糖酶基因(xynA)在大肠杆菌中的表达及酶学分析被引量：5
- 2009年
- 从黑曲霉(Aspergillus niger)F19中克隆得到木聚糖酶基因xynA。将不带原基因信号肽编码序列的xynA基因片段以正确的阅读框架克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-28a(+)上,并转化E.co-liBL21,获得重组工程菌BLX1。经过IPTG诱导,xynA获得特异性表达,其表达产物以包涵体和胞内可溶性蛋白2种形式存在。经过SDS-PAGE分析,重组蛋白分子质量约为24 ku。酶学分析表明,最适反应温度为50℃,最适反应pH为5.0,在酸性条件下具有较好的稳定性。
- 崔罗生祝茂生徐顺清朱辉梁运祥张忠明
- 关键词：黑曲霉木聚糖酶酶学性质
- 冰岛硫化叶菌反螺旋酶基因的遗传学分析被引量：2
- 2009年
- 根据同源重组的原理,构建了用于敲除冰岛硫化叶菌中反螺旋酶(RG)基因的质粒pRG。重组质粒反复转化冰岛硫化叶菌,得到质粒整合到宿主染色体上的单交换菌株,但没有获得反螺旋酶基因缺失的双交换转化子。由此推测反螺旋酶基因是冰岛硫化叶菌必需的功能基因,敲除反螺旋酶基因可导致细胞死亡,或者转化菌株为生存需要存在某种未知机制而阻止双交换发生。单交换菌株可以再次发生同源重组,通过PCR的方法,证实再次重组得到的皆为回复突变而无缺失突变菌株。
- 刘薇佘群新梁运祥
- 关键词：基因敲除
