湖南省自然科学基金(07JJ3055)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：闵凌峰谢明萱陈琼曹兰玉王怀石更多>>
- 相关机构：中南大学南华大学更多>>
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- 氧化铁磁性纳米颗粒介导缺氧诱导因子1α shRNA质粒转染逆转A549/CDDP细胞对顺铂耐药的实验研究被引量：1
- 2010年
- 评价了氧化铁磁性纳米颗粒作为缺氧诱导因子1α shRNA(HIF-1α shRNA)重组质粒载体进行体内体外转染的可行性及其逆转人肺腺癌耐药细胞株(A549/CDDP)顺铂耐性的效果,并初步探讨相关机制.在成功构建HIF-1α shRNA重组质粒后,分别利用氧化铁磁性纳米颗粒及脂质体介导质粒转染A549/CDDP细胞及其移植瘤裸鼠动物模型,荧光显微镜检测转染效率,RT-PCR及细胞免疫化学检测转染后A549/CDDP细胞HIF-1α、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance1,MRP1)、肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein,LRP)mRNA及蛋白质表达,免疫组化检测转染后A549/CDDP移植瘤HIF-1α、MRP1及LRP蛋白表达,MTT法检测转染HIF-1α shRNA前后A549/CDDP细胞对顺铂的耐药性,并检测转染HIF-1α shRNA后A549/CDDP细胞移植瘤的肿瘤生长指数,HE染色检测纳米颗粒转染对裸鼠肝、肾及脑的组织学毒理作用.结果显示,氧化铁磁性纳米颗粒介导转染相对效率高于脂质体介导(P<0.01),HIF-1α shRNA转染A549/CDDP细胞后HIF-1α、MRP1、LRP mRNA及蛋白质表达下降,逆转A549/CDDP细胞对顺铂耐性82%,纳米颗粒介导HIF-1α shRNA转染A549/CDDP细胞移植瘤裸鼠动物模型后,移植瘤组织中HIF-1α、MRP1及LRP蛋白表达下降,转染HIF-1α shRNA后抑制移植瘤的生长,且与顺铂有协同效应,纳米颗粒转染后裸鼠肝、肾及脑组织无坏死.这些结果说明,纳米颗粒介导HIF-1α shRNA的体内体外转染效率高于脂质体,RNA干扰技术封闭HIF-1α基因可较大程度逆转耐顺铂人肺腺癌细胞的耐药性及其抑制瘤的生长,其作用可能与HIF-1α shRNA降低HIF-1α、MRP1及LRP表达有关,HIF-1α基因可作为逆转肺癌耐药治疗的有效靶点,磁性纳米颗粒介导HIF-1α shRNA质粒转染具有一定的生物安全性.
- 涂馨闵凌峰陈琼谢明萱何玲玲
- 关键词：氧化铁磁性纳米颗粒
- 应用毒理蛋白质组学技术研究多环芳烃类物质诱导气道上皮细胞毒理作用的机制被引量：3
- 2011年
- 为了更好地理解苯并芘(Benzo(a)pyrene,B(a)P)在气道细胞诱导的毒理作用机制.应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离B(a)P处理组(B(a)P-A549)、对照组(DMSO-A549)的总蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质点,Western blot验证差异蛋白热激蛋白27(heat shock protein 27,HSP 27)以及锰超氧化物歧化酶(Mn superoxide dismutase,Mn SOD)的表达,使用0.1,1,10μmol/L B(a)P处理A549细胞,应用Western blot及RT-PCR检测各组细胞中Mn SOD的表达,检测各组细胞中总抗氧化活性(total antioxidant capacity)、总SOD活性(total activity of SOD)、过氧化氢酶活性(catalase activity,CAT)、谷胱甘肽还原酶活性(glutathione reductase,Gr).本研究首先建立了B(a)P处理组、对照组的2-DE图谱,质谱鉴定了23个差异蛋白质,Western blot证实HSP 27及Mn SOD的表达水平在B(a)P处理组中较对照组明显下调;使用0.1,1,10μmol/L B(a)P处理A549细胞后,发现随着B(a)P的浓度升高,虽然Mn SOD的表达及SOD活性出现先诱导后抑制的现象,但CAT及Gr活性的增高依然提高了机体的总抗氧化活性.研究结果提示:HSP 27及Mn SOD与B(a)P在气道细胞诱导的毒理作用相关,CAT及Gr在对抗B(a)P带来的氧化损伤方面可能具有十分重要的作用.
- 闵凌峰何淑雅陈琼谢明萱彭红兵曹兰玉王怀石朱小燕
- 关键词：气道上皮细胞蛋白质组学HSP27MNSOD
