国家科技重大专项(2013ZX10001001-001-007)
- 作品数：4 被引量：34H指数：3
- 相关作者：蒋岩李晶姚均王宇颜浩更多>>
- 相关机构：中国疾病预防控制中心江西省疾病预防控制中心北京金豪制药股份有限公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项北京市科委科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV-1基因型耐药检测能力验证考核品的制备和评估被引量：3
- 2015年
- 目的制备人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)基因型耐药检测能力验证考核品,并对其均匀性和稳定性进行评估。方法选取前期检测出的5个HIV-1阳性血浆样本,其中4个具有不同耐药位点,1个对药物敏感,提取HIV-1病毒RNA,经逆转录PCR和巢式PCR获得3 100bp的pol区基因;将目的基因与pMDTM19-T载体连接后进行基因克隆,从阳性菌液中提取回收重组质粒并测序鉴定,最后评估考核品的均匀性和稳定性。结果 5个目的基因扩增测序均成功,与载体连接后得到重组载体V1、V2、V3、V4、V5,梯度退火荧光PCR结果显示考核品退火温度为64.1℃;质粒稀释倍数≤10 000时,各个样本做荧光PCR的Ct值均小于30,因此,将每种质粒稀释10 000倍分装制成考核品;选择浓度不同的3个样本V1、V2和V3分别做均匀性检测,3组Ct值差异均无统计学意义(P>0.05),该考核品均匀性良好;选择V1、V2、V3做稳定性检测,结果显示该考核品至少可以在室温和4℃稳定保存20d,在-20℃和-80℃保存反复冻存5次后浓度均未发生明显变化,表明该考核品稳定性较好。结论本研究中用克隆载体制备的HIV-1基因型耐药检测能力验证考核品均匀性稳定性良好,是一种经济便捷的HIV-1基因型耐药检测考核品制备方法 。
- 罗慧景李晶范文成蒋岩姚均
- 关键词：HIV-1基因型耐药性克隆载体
- 某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型核酸定量检测试剂盒的性能评估被引量：9
- 2013年
- 目的对某种人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的临床应用性能进行评估。方法收集不同HIV感染状态人群的血液样品共计109份,分别使用HIV-1被评估试剂与参比试剂的核酸定量检测试剂盒进行平行对比试验。统计学处理使用Kappa值、R2和Bland-Altman模型。结果被评估试剂检测结果相对于参比试剂,检测结果的总符合率为97.25%(95%CI:92.17%～99.43%),Kappa值为0.92(P<0.001),一致性强度为最强。109例样本中,均在被评估试剂与参比试剂定量检测范围内的样本为84例,两种试剂盒检测结果的回归分析表现出较强的相关性(R2=0.853 6)。使用Bland-Altman模型比较两种试剂检测结果的差异均值,结果显示对于未进行抗病毒治疗的HIV感染者样本两种试剂检测结果具有较好的一致性。结论被评估试剂和参比试剂对同一份血浆样本检测结果具有较好的定性符合程度和较强的相关性,对HIV感染者样本两试剂检测结果有较强的定量一致性。
- 李繁蒋岩王天怡项秋萍潘品良
- 关键词：HIV-1聚合酶连反应
- 检测HIV-1新发感染的限制性抗原亲和力方法的重复性与稳定性评价被引量：19
- 2013年
- 目的评价检测艾滋病病毒Ⅰ型(HIV-1)新发感染的限制性抗原亲和力酶联免疫试验的重复性、稳定性和准确度,探讨该方法推广应用的可行性。方法采用检测精密度、孔间精密度、批间差、两实验员和两实验室之间结果的相关性,评价试剂的重复性;利用37℃热稳定性试验评价试剂的稳定性;使用国际标准盘评价试剂的准确度。结果检测精密度结果显示,所有样本标化吸光度值(ODn)的变异系数(CV)<15%,两实验员和两实验室试验结果的相关系数R2值均>0.99,孔间精密度CV值最小为3.76%,3个批次试剂的批间差结果显示,25份内控盘样本中,只有1份样本CV值>15%,为22.5%。37℃放置7天与4℃保存的酶结合物和酶联板,对内控盘样本检测的ODn值没有明显区别。国际标准盘评判结果与预期值一致。结论检测HIV-1新发感染的限制性抗原亲和力方法具有较好的稳定性、重复性和准确度,可以在实验室网络中推广应用。
- 于海英叶艺张娜颜浩邱茂锋王宇蒋岩
- 关键词：艾滋病病毒稳定性
- 三种HIV-1基因型耐药检测方法的一致性评价被引量：5
- 2013年
- 目的 比较In-house HIV-1基因型耐药检测方法与TRUGENETM、ViroSeqTM两种商品化耐药检测方法结果的一致性.方法 选取25份2009-2013年来自美国Rush大学的HIV-1基因型耐药检测血浆国际考核样本,分别使用In-house、TRUGENETM和ViroSeqTMHIV-1基因型耐药检测方法,对其耐药相关突变位点及17种药物的耐药性进行检测 另取15份来自中国CDC性病艾滋病预防控制中心的待检血浆样本用In-house和TRUGENETM两种方法补充证实所得结论.对三种方法所得检测结果进行一致性评价.结果 耐药相关突变位点检测结果的一致性评价：25份国际考核样品中,三种方法对耐药相关突变位点检测结果的一致率为99.42％（2933/2950）,两两间比较一致性均为极强（Kappa值均＞0.81,P值均＜0.01）；耐药报告检测结果的一致性评价：三种方法两两间比较的不一致结果主要集中在核苷类逆转录酶抑制剂的齐多夫定（zidovudine,AZT）、去羟肌苷（didanosine,ddl）、司他夫定（stavudine,d4T）、阿巴卡韦（abacavir,ABC）4种药物,且主要为轻微不一致.其中In-house与 ViroSeqTM方法结果的轻微不一致率分别为28％ （7/25） 、28％ （7/25）、16％（4/25）、20％ （5/25）；In-house与TRUGENETM方法分别为44％（11/25）、28％（7/25）、36％（9/25）、28％ （7/25）；TRUGENETM与ViroSeqTM方法分别为24％（6/25）、8％（2/25）、28％（7/25）、8％（2/25）.In-house与ViroSeqTM比较时药物AZT,In-house与TRUGENETM比较时药物ddI、d4T、ABC、替诺福韦（tenofovir,TDF）为中度一致（加权Kappa系数分别为0.54,0.44,0.52,0.42,0.59,P值均＜0.01）,其余的比较结果均为高度一致（加权Kappa系数为0.61 ～ 0.80）或一致性极强（加权Kappa系数＞0.80）.15份待检样本的耐药相关突变位点的一致性为99.55％（1762/1770）,17种药物耐药结果的不一致也主要集中在AZT、ddI、d4T、ABC四种药物.结论 In-house HIV-1基因型耐药
- 李晶蒋岩吕超汪静姚均
- 关键词：获得性免疫缺陷综合征HIV-1基因型耐药性
