湖南省自然科学基金(07JJ3077)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 脂氧合酶介导的苯并（a）芘活化及DNA损伤被引量：1
- 2013年
- 目的 探讨细胞内5-脂氧合酶（5-LOX）对苯并（a）芘（B[a]P）的代谢活化及DNA损伤的影响,为脂氧合酶（LOX）作为外源化学物氧化代谢的替代途径提供进一步依据.方法 体外酶系统实验：B（a）P在含有大豆脂氧合酶（SLO）的酶体系中反应,用分光光度法检测其氧化产物;酶系统中加入DNA,用高效液相色谱仪检测其DNA加合物.细胞实验：人支气管上皮细胞（HBE）染毒24 h,B[a]P剂量分别为4、8、16、32、64、128 μmol/L,抑制剂（AA-861）、萘普生和α-萘黄酮分别为0.1、1、10 μmol/L,用免疫印迹法（western-blot）法检测各组5-LOX蛋白表达情况;用流式细胞计数及单细胞凝胶电泳实验检测各组的细胞毒性及DNA损伤情况;同时,检测特异性5-LOX抑制剂（AA-861）及其他特异性酶抑制剂（萘普生和α-萘黄酮）对5-LOX蛋白表达和对DNA损伤的影响.结果 在过氧化氢（H2O2）参与下,SLO可以协同氧化B[a]P,氧化生成B[a]P-7,8-环氧化物,在一定范围内呈剂量效应关系.GTP能够抑制SLO介导的B[a]P氧化,其IC50为0.46 mg/L.SLO介导B[a]P活化后,生成新的产物,出现一明显新增峰,但本次在体外未能检测到与DNA形成加合物.随着B[a]P染毒浓度的增加,HBE细胞存活率逐渐下降,AA-861和萘普生抑制后,细胞存活率上升,差异均有统计学意义（P＜0.05）.B[a]P可以使HBE内5-LOX蛋白表达增加,且表达量随B[a]P浓度增加而增加,5-LOX抑制剂AA-861对5-LOX蛋白表达基本无影响;流式细胞计数及单细胞凝胶电泳实验显示,各B[a]P染毒组DNA损伤指标随着B[a]P浓度增加而加重,与阴性对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.与64 μmol/L B[a]P组比较,加入抑制剂AA-861、萘普生和α-萘黄酮后DNA损伤程度逐渐减轻,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 在HBE内,B[a]P可能主要通过5-LOX介导的协同氧化,形成亲电子物质与DNA结合,使HBE产生DNA损伤,AA-861可以明显抑制该反应.
- 陈昌可黄云武越王静胡建安
- 关键词：5-脂氧合酶细胞毒性DNA损伤
- 脂氧合酶介导的苯并(a)芘活化及所致DNA损伤
- 目的初步探讨细胞内5-LOX对苯并(a)芘的代谢活化情况,试图为脂氧合酶(LOX)作为外源化学物氧化代谢的替代途径提供进一步依据。方法在体外酶系统用分光光度法检测LOX介导的苯并(a)芘氧化产物,用高效液相色谱测DNA加...
- 陈昌可胡建安黄云武越熊敏如
- 关键词：5-脂氧合酶苯并(A)芘细胞毒性DNA损伤
- 文献传递
- 人支气管上皮细胞5-脂氧合酶介导4-氨基联苯的活化及DNA损伤被引量：2
- 2011年
- 目的探讨人支气管上皮(HBE)细胞内5-脂氧合酶(5-LOX)对4-氨基联苯(4-ABP)的氧化活化及所致DNA损伤,为LOX作为前致癌物氧化活化的代谢途径提供依据。方法①体外酶系统实验:4-ABP在含有大豆脂氧合酶(SLO)的体外酶体系中反应,用分光光度法检测体系中反应产物生成。②细胞实验:4-ABP 100～800μmol.L-1染毒HBE细胞,MTT法检测HBE细胞存活率;Western印迹法检测5-LOX蛋白表达;单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。同时,检测特异性5-LOX抑制剂AA861对5-LOX蛋白表达和多种酶抑制剂对细胞存活率和DNA损伤的影响。结果在过氧化氢参与下,SLO可以协同氧化4-ABP,LOX抑制剂去甲二氢愈创木酸可抑制该协同氧化作用。4-ABP可以使HBE细胞内5-LOX蛋白表达增加,AA861对5-LOX蛋白表达没有影响;4-ABP 400μmol.L-1可以使HBE细胞产生明显的DNA损伤,彗星细胞的阳性率达47.7%(P<0.01),AA861和萘普生可以抑制该浓度4-ABP所致的DNA损伤,最大保护率分别为58.1%和21.7%。结论 4-ABP上调HBE的5-LOX蛋白表达。5-LOX可能通过介导4-ABP协同氧化,导致DNA损伤,这可能是4-ABP致癌的机制之一。
- 朱宏翔胡建安黄云武越熊敏如
- 关键词：药物协同作用DNA损伤
