河北省科技支撑计划项目(09220302D)
- 作品数：4 被引量：39H指数：3
- 相关作者：郭巍刘小民李瑞军李杰张霞更多>>
- 相关机构：河北农业大学河北省生物研究所河北省科学院更多>>
- 发文基金：河北省科技支撑计划项目国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 棉铃虫围食膜肠粘蛋白基因HM72的克隆、表达及其蛋白组织定位被引量：3
- 2011年
- 围食膜是昆虫中肠上皮细胞分泌形成一层特有的非细胞性半透膜,肠粘蛋白是其重要的组成成分。本研究利用棉铃虫Helicoverpa armigera围食膜蛋白多克隆抗体免疫筛选棉铃虫中肠cDNA表达文库,共获得385个阳性克隆,经DNA测序和序列对比,确认其中之一为编码棉铃虫中肠围食膜肠粘蛋白的cDNA克隆HM72。序列分析显示,该cDNA全长为2888bp(GenBank登录号:HM017910),其中ORF长2469bp,编码823个氨基酸,包含起始密码子ATG和终止密码子TAA,在poly A末端上游19bp处有一个多聚腺苷酸信号序列AATTAA。氨基酸序列分析表明,其N-端含有16个氨基酸的信号肽,预测分子量为84.2kDa,等电点3.63,为酸性蛋白质。结构域分析表明,该蛋白具有5个几丁质结合功能域,一个粘蛋白结构域和两个甘氨酸-天冬氨酸富集区,该基因成功表达100kDa的目的蛋白。Western blot分析表明,HM72蛋白存在于棉铃虫中肠、围食膜、粪便及蜕中,并由整个中肠分泌,而在棉铃虫脂肪体、体壁、马氏管、唾腺、消化液、血淋巴中没有检测到HM72蛋白。
- 刘小民李杰郭巍徐大庆张霞
- 关键词：棉铃虫中肠上皮细胞围食膜CDNA表达文库
- 苏云金杆菌cry1Ib基因的克隆、表达与活性研究
- 2014年
- 根据cry1Ib类基因的全长序列设计引物,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)GS8菌株的质粒DNA为模板扩增出片段长为2.16kb的cry1Ib全长基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-21b,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,诱导表达出81.20kD的蛋白。推导的分子量为81.20kD,生物信息学分析表明其由719个氨基酸组成,氨基酸序列与Cry1Ib1蛋白的相似性为99.58%,不同于已知的10种Cry1Ib蛋白,是一种新的Cry1Ib蛋白,其基因已被国际基因命名委员会正式命名为cry1Ib3。杀虫活性测定结果表明:Cry1Ib3对小菜蛾(Plutella xylostella)有很强的杀虫活性,LC50为0.076 3μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、家蚕(Bombyx mori)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)和榆兰叶甲(Pyrrhalta aenescens)基本上没有活性。该基因的获得为我国抗虫转基因作物和工程菌的研制提供新的基因来源,亦为筛选延缓昆虫抗性产生的基因组合提供了重要依据。
- 刘廷辉王睿文李瑞军董建臻
- 关键词：苏云金芽胞杆菌克隆
- 棉铃虫羧酸酯酶基因cDNA的克隆、表达及活性分析被引量：7
- 2011年
- 【目的】克隆棉铃虫中肠羧酸酯酶基因,了解该酶的分子特性,为研究棉铃虫抗药性机理奠定基础。【方法】制备抗血清,对棉铃虫(Helicoverpa armigera(Hübner))中肠cDNA表达文库进行免疫筛选,得到编码棉铃虫羧酸酯酶基因的cDNA克隆,利用生物信息学软件和网站进行序列分析,构建原核表达载体进行表达,并以α-醋酸萘酯溶液为底物进行活性测定。【结果】测序分析表明,羧酸酯酶基因hc3(GenBank登录号:GU119888)全长2 896 bp,编码795个氨基酸。羧酸酯酶HC3的等电点pI为3.94,活性中心包括3个氨基酸残基(催化三联体):Ser204,Glu331,His444;第545—773位包含大量高度重复的Gly,Asp、Glu(GDE区域)构成亲水区。该基因在大肠杆菌BL21中成功表达约100 kD的HC3蛋白,检测表达的羧酸酯酶活性为0.32 mmol/100μL酶液。【结论】成功克隆、表达了棉铃虫羧酸酯酶蛋白HC3,并发现GDE亲水结构域。为进一步了解羧酸酯酶的三维结构及其水解作用并设计新型杀虫剂提供了可能。
- 刘小民李杰郭巍张霞李新娜
- 关键词：棉铃虫CDNA表达文库羧酸酯酶活性分析
- 12种药剂对蛴螬的田间药效评价被引量：30
- 2010年
- 为有效控制花生蛴螬危害,筛选高效、低毒、低残留的农药品种,选用12种不同杀虫剂,采用毒土处理方法进行田间药效试验。试验结果表明,供试的12种药剂中,30%辛硫磷微囊悬浮剂4050 g/hm2、30%毒死蜱微囊悬浮剂2250 g/hm2,对蛴螬防治效果分别为80.85%、78.73%,与3%克百威颗粒剂135 g/hm2、10%二嗪磷颗粒剂750 g/hm2差异不显著,但显著高于其它药剂,其对花生的保果效果分别为81.45%、80.99%,增产幅度分别为15.74%、12.71%,可作为替代高毒产品的理想药剂。
- 刘小民郭巍李瑞军柴彦苏增朝
- 关键词：花生蛴螬微囊悬浮剂田间试验
