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湖南省科技厅重点项目(06SK2004): 作品数：13 被引量：43H指数：4; 相关作者：肖志强陈主初易红张鹏飞彭芳更多>>; 相关机构：中南大学湘雅医院更多>>; 发文基金：湖南省科技厅重点项目国家重点基础研究发展计划教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

鼻咽癌患者血清自身抗体多因素判别公式的建立及初步验证: 2011年; 目的探讨采用作者前期通过蛋白质组学研究发现的四种鼻咽癌(NPC)患者血清自身抗体来建立多因素判别公式对NPC的临床诊断价值。方法采用本实验室建立的酶联免疫吸附试验方法(ELISA)分别检测了36例NPC患者、20例其它肿瘤患者及20例健康体检者血清抗细胞角蛋白19(CK19),抗Rho GDP解离抑制因子2(Rho-GDI-2),抗热休克蛋白70(HSP70)和抗亮氨酸氨基肽酶(LAP3)抗体浓度,并对4种抗体浓度采用多因素判别分析方法建立判别函数。结果鼻咽癌患者血清中4种抗体的含量明显高于正常对照组。以4种抗体组成的判别函数对NPC判别的灵敏度为41.7%,特异性为95%,判别正确率为61.8%。结论四种自身抗体组成的多因素判别公式有助于NPC的筛查和诊断。; 易斌罗建清周欢群姚润肖志强; 关键词：鼻咽癌酶联免疫吸附试验自身抗体标志物

p53沉默对人鼻咽癌细胞株CNE2放射生物学特性的影响被引量：10: 2008年; 目的:研究p53沉默对鼻咽癌(NPC)细胞株CNE2放射敏感性的影响,探讨NPC中过表达的p53蛋白是否参与了放射诱导的细胞损伤和凋亡过程。方法:以稳定干扰p53基因表达的鼻咽癌细胞株CNE2sip53和对照细胞株CNE2/pSUPER为对象,采用集落存活分析法分析在不同放射剂量照射后的细胞存活分数(SF)并计算放射生物学参数D0,α,β和放射敏感比(SER);采用MTT法检测放射线对细胞生长的影响;采用流式细胞术检测放射线对细胞周期及凋亡的影响。结果:CNE2sip53细胞照射后的SF值高于CNE2/pSUPER细胞;与CNE2/pSUPER细胞相比,CNE2sip53细胞D0值和SF2值均增大,而α值,β值和SER均减小;放射线诱导CNE2sip53细胞凋亡及对细胞增殖的抑制作用弱于其对CNE2/pSUPER细胞的作用;放射线诱导CNE2/pSUPER细胞阻滞于G1期,而诱导CNE2sip53细胞阻滞于G2期。结论:稳定沉默鼻咽癌细胞中p53基因表达后,细胞对放射的敏感性降低,提示NPC细胞中过表达的p53蛋白参与了放疗诱导的NPC细胞损伤和凋亡过程。; 石慧英孙懿易红冯雪萍陈主初肖志强; 关键词：鼻咽癌放射生物学 P53

Raf激酶抑制蛋白对鼻咽癌细胞增殖的影响被引量：2: 2008年; 目的:探讨Raf激酶抑制蛋白(RKIP)对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法:采用脂质体转染方法将反义RKIP核酸表达质粒pcDNA3.1(-)-asRKIP及空白载体pcDNA3.1(-)分别转染鼻咽癌细胞系6-10B细胞,用West-ern印迹检测RKIP表达,建立RKIP表达下调的稳定转染细胞和对照细胞系。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术和软琼脂集落形成实验检测RKIP表达下调对鼻咽癌细胞增殖、细胞周期分布和停泊非依赖性生长的影响。结果:建立了RKIP表达下调的6-10B鼻咽癌细胞系;RKIP表达下调促进6-10B细胞增殖和停泊非依赖性生长,并加速其越过G0/G1期。结论:RKIP具有抑制鼻咽癌细胞增殖和停泊非依赖性生长的作用,可能在鼻咽癌发病中具有重要作用。; 欧阳果良陈彦易红冯雪萍张鹏飞李茂玉李萃阮林彭芳陈主初肖志强; 关键词：鼻咽癌 RAF激酶抑制蛋白增殖细胞周期

应用激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌蛋白质表达谱的建立被引量：4: 2009年; 目的:建立鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究奠定基础。方法:应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术从NPC组织纯化NPC细胞,应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化NPC细胞的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质,利用生物信息学资源构建NPC的2-DE蛋白质组数据库。结果:建立了NPC蛋白质2-DE参考图谱,2-DE图谱共显示(1312±30)个蛋白质点,共鉴定了427个蛋白质点,包括241个非冗余蛋白质,并构建了NPC的2-DE蛋白质组数据库,这些数据可从本实验室网站(http://www.xyproteomics.org)上进行查询。结论:首次建立了LCM纯化NPC细胞2-DE蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究提供了重要的信息和资料。; 彭芳汤参娥李茂玉李萃程爱兰李峰张鹏飞李美香肖志强陈主初; 关键词：鼻咽癌蛋白质表达谱激光捕获显微切割二维凝胶电泳质谱

采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发自身抗体的鼻咽癌相关抗原被引量：4: 2009年; 目的采用血清蛋白质组学方法筛选能诱发机体产生自身抗体的鼻咽癌（NPC）相关抗原，以便为NPC诊断和治疗提供候选标志。方法收集19份NPC组织，采用二维凝胶电泳（2-DE）技术分离组织总蛋白质，每份组织样本同时做3块2-DE胶，其中将1块2-DE胶作为制备胶进行考马斯亮蓝染色，另2块2-DE胶采用半干式电转法将胶中的蛋白转至PVDF膜上，并分别与NPC患者自身的血清和健康人血清进行2-DE免疫印迹分析，识别能与多数NPC患者血清反应而不与或很少与健康人血清反应的蛋白质点，再从制备2-DE胶中切取相应蛋白质点，进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MOLDI—TOFMS）和电喷雾电离四级杆飞行时间质谱（ESI-Q—TOFMS／MS）分析，获取肽质量指纹图和肽序列标签，数据库搜索鉴定蛋白质。结果鉴定了13个能诱发机体产生自身抗体的NPC相关抗原：热休克蛋白70（HSP70）、人血清白蛋白（HAS）、热休克蛋白60（HSP60）、细胞角蛋白15（CK15）、亮氨酸氨基肽酶（LAP3）、α-烯醇化酶（Ot—enolase）、ErbB3结合蛋白（EBP1）、细胞角蛋白19（CK19）、核糖体蛋白P0（RPP0）、丙酮酸脱氢酶E1（PDE1）、GTP结合调节蛋白（GNBP）、抗增殖蛋白（prohibitin）和RhoGDP解离抑制因子2（Rho—GDI2），13种蛋白质点在21％的鼻咽癌患者中可见，而健康人中缺乏或出现频率较低。结论本研究筛选到13个NPC相关抗原，这些抗原能诱导患者产生自身抗体，这些抗体有可能成为NPC诊断标志和治疗靶标。; 易斌陈颖李萃张鹏飞李茂玉易红彭芳陈主初肖志强; 关键词：鼻咽肿瘤蛋白质组学抗原肿瘤自身抗体肿瘤标记

鼻咽癌细胞系5-8F和6-10B的差异蛋白质组学研究被引量：3: 2007年; 目的:比较不同转移潜能的鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞系5-8F和6-10B细胞蛋白质组的差异,筛选NPC转移相关蛋白质。方法:应用二维凝胶电泳(two-dimensional gel electro-phoresis,2-DE)技术分离具有相同遗传背景、不同转移潜能的鼻咽癌细胞系5-8F和6-10B细胞的蛋白质,图像分析识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorp-tion/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质,Western免疫印迹方法验证部分差异蛋白质在2株细胞中的表达水平。结果:建立了5-8F和6-10B细胞蛋白质的2-DE图谱,识别了65个差异表达的蛋白质点,鉴定了15个非冗余的差异表达蛋白质。Western免疫印迹分析证实了差异蛋白质膜联蛋白A1和14-3-3protein sigma在5-8F和6-10B细胞中的差异表达水平。结论:15个非冗余的差异表达蛋白质为研究NPC转移机制提供了实验依据。; 向亚莉易红李萃张鹏飞李茂玉陈主初肖志强; 关键词：鼻咽癌双向凝胶电泳质谱

鼻咽癌转移相关的分泌蛋白质的筛选被引量：3: 2007年; 目的:筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)转移相关的分泌蛋白质,为阐明NPC转移机制以及筛选NPC转移分子标志物提供实验依据。方法:应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术分离一对来自同一亲本,具有不同转移潜能的NPC细胞系5-8F和6-10B细胞的分泌蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾-四极杆-串联质谱(ESI-Q-TOFMS/MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定。Western印迹法检测差异分泌蛋白质nm23-H1在两株细胞中的表达水平。结果:建立了5-8F和6-10B分泌蛋白质的2-DE图谱,质谱分析鉴定出14个非冗余的分泌蛋白质,其中Oncop-rotein18等蛋白质在高转移潜能NPC细胞系5-8F中的表达水平高于无转移潜能的NPC细胞系,而nm23-H1等蛋白质在5-8F细胞系中的表达水平低于6-10B细胞系。Western印迹分析证实了nm23-H1在5-8F和6-10B细胞分泌蛋白质中的差异表达水平。结论:所鉴定的14个非冗余的差异分泌蛋白质为研究NPC转移机制以及筛选NPC转移分子标志物提供了实验依据。; 向亚莉易红李茂玉张鹏飞李萃彭芳阮林陈主初肖志强; 关键词：鼻咽癌分泌蛋白质双向凝胶电泳质谱

RKIP低表达与鼻咽癌侵袭转移和NF-κB信号通路活化相关被引量：12: 2009年; 为筛选鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)发病相关的蛋白质,采用双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)和质谱(mass spectrometry,MS)技术比较NPC组织与癌旁正常鼻咽上皮组织(adjacent normal nasopharyngeal epithelialtissue,ANNET)蛋白质表达的差异,鉴定了21个差异蛋白,其中Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP)等9个蛋白质在NPC组织中的表达水平低于ANNET.为探讨RKIP在NPC转移中的作用和机制,采用Western blot检测RKIP在不同转移潜能的5-8F和6-10BNPC细胞中的表达水平,采用免疫组化方法检查RKIP在石蜡包埋NPC组织、正常鼻咽上皮组织(normal nasopharyngeal epithelial tissue,NNET))及颈淋巴结转移NPC组织(lymphnode metastatic NPC,LMNPC)中的表达水平,采用脂质体转染方法将正义、反义RKIP表达质粒及其相应空白载体分别转染5-8F和6-10B细胞,建立相应的稳定转染细胞系,分析RKIP表达水平改变对NPC细胞体外侵袭能力和NF-κB信号通路活性的影响.结果显示:RKIP在高转移5-8F细胞中的表达水平低于非转移6-10B细胞、在NPC组织中的表达水平低于NNET、在转移癌中表达缺失.上调RKIP表达能抑制5-8F细胞的侵袭能力,而下调RKIP表达能增强6-10B细胞的侵袭能力;上调RKIP表达能降低5-8F细胞的p-IκB-α水平和NF-κB的转录活性,而下调RKIP表达能增加6-10B细胞的p-IκB-α水平和NF-κB的转录活性.研究结果提示,RKIP可能是NPC的一个转移抑制蛋白,RKIP表达下调可能通过活化NF-κB信号通路促进NPC细胞侵袭和转移.; 陈彦李君易红欧阳果良李萃张鹏飞李茂玉彭芳陈主初李建玲肖志强; 关键词：鼻咽癌 RAF激酶抑制蛋白核因子ΚB

siRNA抑制nm23-H1基因表达对鼻咽癌6-10B细胞生物学行为的影响被引量：1: 2009年; 目的:采用RNA干扰技术下调nm23-H1基因在鼻咽癌6-10B细胞中的表达,探讨nm23-H1表达下调对6-10B细胞生物学行为的影响。方法:采用脂质体法将nm23-H1基因siRNA(nm23-H1 siRNA)瞬间转染6-10B细胞,Western印迹检测转染细胞中nm23-H1蛋白的表达水平,然后利用MTT法、流式细胞术和Transwell小室实验分别检测转染6-10B细胞的增殖、细胞周期和体外迁移侵袭等生物学行为的变化;测序检测6-10B细胞nm23-H1基因有无S120G点突变。结果:nm23-H1 siRNA有效地下调nm23-H1基因的表达,nm23-H1 siRNA转染6-10B细胞的增殖能力增强,S期细胞增多,体外迁移和侵袭能力增强(P<0.05)。6-10B细胞nm23-H1基因无S120G点突变。结论:nm23-H1基因具有抑制人鼻咽癌细胞6-10B增殖和体外迁移侵袭的作用。; 邹鹰李君易红肖艳华汤参娥陈主初肖志强; 关键词：NM23-H1 SIRNA 鼻咽癌

鼻咽癌组织与正常鼻咽上皮组织的差异磷酸化蛋白质组分析被引量：2: 2007年; 目的:比较鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织与正常鼻咽上皮组织磷酸化蛋白质组差异,筛选差异磷酸化蛋白质,为揭示NPC的发病机制提供依据。方法:采用双向凝胶电泳技术(2-DE)分离NPC组织与正常鼻咽上皮组织的总蛋白质,蛋白质转膜后与抗酪氨酸磷酸化抗体进行Western印迹分析,图像分析识别差异磷酸化蛋白质点,电喷雾-四极杆-串联质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)鉴定差异的酪氨酸磷酸化蛋白质,采用NetPhos软件预测蛋白质的酪氨酸磷酸化位点,并采用生物信息学方法对差异磷酸化蛋白质的功能和亚细胞定位进行分析。采用Western印迹检测差异蛋白质(phosphatidylethanolamine-binding protein 1)在正常鼻咽黏膜组织和鼻咽癌组织的总蛋白质中的磷酸化水平。结果:建立了NPC组织与正常鼻咽上皮组织的酪氨酸磷酸化蛋白质表达谱,识别了25个差异酪氨酸磷酸化蛋白质,共鉴定了13个差异酪氨酸磷酸化蛋白质,其中7个蛋白质的酪氨酸磷酸化水平在NPC组织中增强,而6个蛋白质的酪氨酸磷酸化水平降低。NetPhos软件预测和生物信息学分析结果显示,13个差异蛋白质均存在酪氨酸磷酸化位点,其功能涉及物质代谢、细胞结构、细胞防御以及信号转导。与正常鼻咽黏膜组织相比较,差异蛋白phosphatidylethanolamine-binding protein 1在鼻咽癌组织中磷酸化表达水平下调。结论:鉴定了13个可能与NPC发病相关的酪氨酸磷酸化蛋白质,为揭示NPC发病机制提供了科学论依据。; 欧阳果良陈彦阮林李茂玉张鹏飞李萃彭芳易红陈主初肖志强; 关键词：鼻咽癌磷酸化蛋白质组酪氨酸磷酸化双向凝胶电泳串联质谱

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