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人血管生成素2原核表达载体的构建及鉴定被引量：2: 2012年; 目的构建人血管生成素2（Angiopoietin2）原核表达载体。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），通过逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增获取Angiopoietin2基因片段，然后将其克隆人pET32a质粒载体表达系统，实现Angiopoietin2在大肠杆菌BL21中的稳定表达，并通过凝胶电泳、SDS．PAGE及基因测序等对表达蛋白进行鉴定。结果从HUVEC中克隆出约1．5kb的Angiopoietin2基因，通过pET32a载体系统实现了Angiopoietin2蛋白的表达，SDS—PAGE、电泳及测序分析证实表达成功，融合蛋白相对分子质量为70×10^3。结论应用基因重组技术成功构建了人Angiopoietin2原核表达载体。; 张中林张吉发艾勇彪袁玉蜂何跃明刘志苏; 关键词：血管生成素原核表达载体

利用噬菌体展示技术制备人血管生成素2单链抗体被引量：2: 2012年; 目的用纯化的人血管生成素2（Ang2）蛋白，通过噬菌体展示技术从非免疫小鼠噬菌体展示抗体库中淘选、鉴定Ang2单链抗体。方法以纯化的人Ang2蛋白为抗原，对非免疫小鼠噬菌体展示抗体库进行富集和筛选，获得Ang2单链抗体，利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Westernblot法检测目的蛋白的表达并测序。结果经过3轮富集和筛选，获得了1个能特异性识别Ang2蛋白的阳性噬菌体克隆，DNA测序表明其含有完整的单链抗体基因片段，大小约750bp，表达蛋白相对分子质量约33．7×10^3；通过SDS-PAGE进一步实现Ang2单链抗体（phage-Ang2-scFv）的鉴定。结论成功分离并鉴定人Ang2-scFv，为进一步的功能学研究奠定了基础。; 张中林艾勇彪张吉发袁玉蜂刘志苏何跃明; 关键词：血管生成素2 单链抗体

人促血管生成素2单链抗体对裸鼠人肝癌血管生成及肿瘤生长的作用被引量：7: 2013年; 目的观察促血管生成素2（An萨）单链抗体（scFv-An舀）对人肝癌血管生成及肿瘤生长的作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），各组分别添加血管内皮生长因子（VEGF）、VEGF＋Ang2、VEGF＋Ang2＋ScFv-Ang2，通过HUVEC增殖测定、迁移实验、小管形成实验观察ScFv-Ang2在体外对HUVEC生物学行为的影响；建立荷人肝癌细胞株MHCC97的肝原位移植瘤模型裸小鼠24只，随机分为实验组和对照组，实验组瘤内注射ScFv-Ang2（4×10^11 pfu／m1），对照组予以生理盐水，测量肿瘤大小、肺转移灶数目、癌组织CD31蛋白表达及微血管密度（MVD）计数，观察ScFv-Ang2对肝细胞癌（HCC）血管生成及肿瘤生长的作用。结果体外实验中观察到ScFv-Antg2可抑制VEGF和ArtS2诱导的HUVEC增殖、迁移及小管形成；ScFv-Ang2瘤内注射组肿瘤体积、重量、肺转移灶数目、CD31表达水平以及MVD计数均显著低于对照组（P〈0．05）。结论ScFv-Ang2在体外实验中具有抑制HUVEC形成血管的作用，体内实验中对裸鼠人肝癌具有抑制血管生成和肿瘤生长的作用。; 张中林毛晓雯张吉发袁玉蜂刘志苏何跃明刘权焰; 关键词：血管生成素2 单链抗体新生血管化

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