江苏省自然科学基金(BK2006244)
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 双链AAV载体的构建及其转导效率的检测
- 2007年
- 基因治疗为人类多种疾病的治疗带来了希望．但其临床应用的道路曲折．问题在于安全和有效的基因输送系统的开发。如何将治疗基因特异、有效地传递给靶细胞，这是基因治疗中的关键。腺相关病毒（AAV）已被广泛用作基因治疗的载体。由于其安全性和低免疫反应性而受到人们的青睐，目前尚未见AAV与恶性疾病明确有关的报道。AAV为单链DNA病毒，由单链基因组向有转录活性的双链形式的转变限制了AAV载体介导的基因转导。自身互补双链DNA的腺相关病毒（scAAV）载体绕开了病毒DNA第二条链合成这一限速步骤，能显著提高AAV的转导效率。本研究率先在国内进行scAAV的构建和包装．并检测其转导效率。
- 吴剑卿赵卫红
- 关键词：双链DNA基因转导单链DNA病毒腺相关病毒恶性疾病
- 腺相关病毒载体介导造血干/祖细胞的基因转导被引量：1
- 2007年
- 造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)具有自我更新、分化和增殖的独特特性,并可用自体移植法移植给患者,这使其成为基因治疗中引人注目的靶点。到目前为止尚未发现腺相关病毒(AAV)载体的致病性。在利用造血干细胞的基因治疗中,AAV载体受到人们的广泛关注。既往的AAV转导HSCs的研究结果不完全一致,现将该方面的研究进展作一概述。
- 朱蓓李燕吴剑卿赵卫红
- 关键词：腺相关病毒造血干细胞基因转导
- FKBP52在重组腺相关病毒载体胞内转运中的作用研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨细胞质中FKBP52对重组腺相关病毒(AAV)介导的基因转导效率的作用。方法测定AAV在FKBP52-野生型(WT)、FKBP52-杂合型(HE)及FKBP52-基因敲除(KO)鼠胚纤维母细胞(MEFs)中的基因转导效率,观察羟基脲(HU)对不同基因型MEFs中AAV转导效率的影响。采用流式细胞术、EMSA、Southernblot、免疫沉淀、West-ernblot等方法分析FKBP52对AAV在细胞内转运的作用。结果传统的单链AAV不能有效地转导FKBP52-WTMEFs,在FKBP52-HE及FKBP52-KOMEFs中的转导效率也未见明显增加。在这些细胞中,AAV不能有效地转运至细胞核。HU处理后能使AAV在WTMEFs中的转导效率提高25倍,但是在KOMEFs中AAV转导效率仅提高4倍。为避免AAV第二链合成的影响,进一步采用自身互补的AAV(scAAV)载体进行研究,结果发现,HU能使WTMEFsscAAV基因转导效率增强23倍,但在KOMEFs中转导效率仅增加4倍。提示,HU处理后KOMEFs中转导效率未增加的原因并非由于AAV第二链的合成障碍所致。HU处理后,59%的AAV基因组DNA出现在WTMEFs细胞核,KOMEFs细胞核中为28%,提示HU介导的AAV转运通路在KOMEFs中存在缺陷。转染FKBP52表达质粒的KOMEFs经HU处理后,AAV所介导的基因转导效率恢复至WTMEFs的水平,且直接与其转运至细胞核的转运功能改善相吻合。结论作为一种细胞分子伴侣蛋白,FKBP52能促进AAV在细胞内转运,有益于重组AAV载体在人类基因治疗中的应用。
- 吴剑卿赵卫红程蕴琳殷凯生
- 关键词：腺相关病毒基因表达
- 腺相关病毒载体在肺疾病基因治疗中的应用被引量：1
- 2007年
- 腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）载体具有安全性好、免疫原性低、能感染分裂细胞和非分裂细胞、能介导基因的长期稳定表达等优点。因此,作为一种基因导入系统,重组AAV载体在基因治疗的研究和开发中受到越来越多的关注和重视。本文着重就重组AAV载体在肺部疾病基因治疗中的应用以及改进重组AAV载体的策略作简要综述。
- 吴剑卿许伟李燕
- 关键词：腺相关病毒肺疾病基因治疗
