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重组人Wnt10b蛋白的制备及其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达: 2012年; 目的基因工程制备重组人Wnt10b蛋白，观察其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达。方法以pUC19-Wntlob为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增cDNA，扩增产物和pEGFP—N1载体双酶切，连接酶连接构建pEGFP-N1-Wntlob真核表达载体，酶切和测序鉴定该载体；Lipofectamine^TM 2000将该载体转染入COS-7细胞，计算转染率。Westernblot和免疫细胞化学法检测COS-7细胞Wntlob蛋白表达；将子鼠背部皮肤置于含Wnt10b蛋白的培养液中培养2d，Westernblot法检测皮肤Wntlob和B．连环蛋白的表达。结果PCR扩增出的人Wntlob基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体，成功构建pEGFP—N1一Wntlob；pEGFP—N1-Wntlob，成功转染COS-7细胞，转染率为20％-40％，转染后COS-7细胞Wntlob蛋白表达较对照组增加（P〈0．05），COS-7细胞分泌的WntlOb蛋白能促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达（P〈0．05）。结论成功制备具有生物活性的重组人Wnt10b蛋白，Wntlob蛋白促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达增加。; 纪影畅李宇胡志奇蔡湘娜黄铿高建华; 关键词：COS细胞基因表达

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广东省自然科学基金(9151503102000037)