“十一五”国家科技支撑计划(2006BAK02A211)
- 作品数：11 被引量：72H指数：6
- 相关作者：王自良张海棠姜金庆邓瑞广范国英更多>>
- 相关机构：河南科技学院河南省动物免疫学重点实验室西北农林科技大学更多>>
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- 相关领域：农业科学化学工程生物学轻工技术与工程更多>>
- 吡虫啉残留酶联免疫吸附检测方法的建立被引量：7
- 2011年
- 通过化学修饰合成吡虫啉(imidacloprid,IMI)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备分子结合比合理的免疫抗原(IMI-BSA)和包被抗原(IMI-OVA)。对经IMI-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行间接酶联免疫吸附和阻断酶联免疫吸附,初步探明抗吡虫啉多克隆抗体(IMI-pAb)的免疫学特性。在此基础上,采用聚乙二醇(PEG)介导细胞融合技术进行了免疫鼠脾细胞和骨髓瘤细胞融合,通过阳性杂交瘤细胞筛选和克隆化培养,获得3C8杂交瘤细胞株。结果显示:该3C8杂交瘤细胞株具有高效价、高亲和力和强特异性的特点;通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度和最佳抗体稀释倍数,建立基于吡虫啉单克隆抗体(IMI-mAb)的IMI残留阻断酶联免疫吸附,其线性范围为7.48×10-6～3.24×10-4mg/mL(R2=0.9928),最低检测限为8.00×10-6mg/mL。
- 李广领姜金庆陈锡岭张淑静王自良
- 关键词：吡虫啉单克隆抗体酶联免疫吸附测定法
- 氨苄青霉素人工抗原的制备及抗体特性鉴定被引量：7
- 2009年
- 根据氨苄青霉素(AMP)分子结构上存在的化学活性基团羧基,用碳化二亚胺法(EDC)将AMP偶联于载体蛋白BSA,合成人工抗原BSA-AMP,用紫外扫描(UV)和SDS-PAGE进行鉴定,推算分子结合比;用BSA-AMP免疫新西兰白兔,间接ELISA测定多抗血清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,琼脂双扩散试验和交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-AMP偶联成功,分子结合比为1∶17.6,获得了高效价、敏感、特异的AMPpAb,为AMP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 张海棠李桂平季跃光王自良
- 关键词：氨苄青霉素半抗原人工抗原抗体
- 19-去甲睾酮异源性ciELISA试剂盒的研制及应用被引量：6
- 2010年
- 筛选抗19-去甲睾酮(NT)单克隆抗体,建立异源性ciELISA试剂盒。用人工抗原NT-17-BSA免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立1株抗NT单克隆杂交瘤细胞NT1-B7,同种型为IgG1/k,腹水效价达0.64×105,亲和常数(Ka)为4.31×109L/mol,半数抑制浓度(IC50)为0.55ng/ml,与群勃龙和雌二醇的交叉反应率(CR)分别为2.2%和1.6%,与其它化合物无CR。异源性ciELISA试剂盒在猪肉、猪尿、牛肉和牛尿四种基质中的检测限分别为0.24ng/ml、0.23ng/ml、0.22ng/ml和0.17ng/ml,批内和批间相对标准差(RSD)在4.4%～21.8%,添加回收率在85%～110%,4℃下保存期至少6个月。NT-Kit的基质pH适用范围为6.5～7.5,温育过程优化后可节约检测时间30～90min。试剂盒灵敏度高、特异性强,可应用于样品基质中NT残留检测。
- 姜金庆张海棠王自良王建华范国英
- 关键词：单克隆抗体间接竞争ELISA异源性快速检测试剂盒
- 19-去甲类固醇激素检测方法研究进展被引量：4
- 2010年
- 综述了19-去甲类固醇激素检测的筛选法、定量法和确证法,探讨了多残留同时检测试纸条和蛋白质芯片等最新技术。
- 姜金庆张海棠王自良王建华
- 关键词：筛选法定量法试纸条蛋白质芯片
- 莱克多巴胺单克隆抗体的研制及阻断ELISA检测方法的建立被引量：11
- 2008年
- 用混合酸酐法将莱克多巴胺（RAC）偶联于牛血清白蛋白（BSA）,合成免疫原BSA-RAC,并用紫外和凝胶电泳鉴定;用BSA-RAC免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立抗RAC单克隆抗体（mAb）杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb。应用RAC mAb研制RAC残留快速检测阻断ELISA试剂盒（RAC-Kit）,并测定其性能。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为1∶24.5;筛选出3株杂交瘤细胞,其中最好的4D8株的亲和常数Ka为1.65×1010L/mol。RAC-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1~170μg/L,灵敏度为0.52μg/L,检测限为1μg/L,饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为91.1%和89.2%,平均批内和批间变异系数〈15%,与多巴酚丁胺的交叉反应率为22.3%,与其他化合物无交叉反应,RAC-Kit在4℃可保存180d。
- 张海棠王自良邓瑞广钟华范国英
- 关键词：莱克多巴胺人工免疫原单克隆抗体阻断ELISA快速检测试剂盒
- 新烟碱杀虫剂噻虫嗪免疫学特性研究被引量：1
- 2011年
- 通过化学修饰合成了噻虫嗪(thiamethoxam,TMX)人工半抗原,采用碳二亚胺法(EDC)将该抗原与牛血清蛋白和卵清蛋白偶联成功制备了分子结合比合理的免疫抗原(TMX-BSA)和包被抗原(TMX-OVA).对经TMX-BSA免疫的6周龄Balb/c实验鼠的免疫抗血清进行了间接ELISA和阻断ELISA,初步明确了抗噻虫嗪多克隆抗体(TMX-pAb)的免疫学特性,为噻虫嗪残留免疫学快速检测技术开发和检测产品研制奠定了坚实基础.
- 李广领李新安李金丽肖娜娜赵亚娟陈锡岭
- 关键词：噻虫嗪单克隆抗体酶联免疫吸附测定法
- 食品镉离子污染免疫检测技术的研究与应用被引量：5
- 2009年
- 传统的理化分析方法在食品Cd2+污染检测方面发挥了重要的作用,但均存在一定的缺陷,急需建立快速、高效的检测方法。食品Cd2+污染免疫检测是一种新型的分析方法,与理化分析方法相比,具有省时省力、费用低廉、便于携带、操作简便等优点,已成为重要的检测手段。详细综述了目前国内外在食品Cd2+污染免疫检测方面的研究方法和成果,主要包括Cd2+人工抗原的制备与鉴定、Cd2+单克隆抗体的制备及免疫学特性影响因素分析和Cd2+免疫检测方法的建立及应用。在总结这些研究的基础上,展望了食品Cd2+污染免疫检测技术的发展方向。
- 张海棠王自良刘耀东
- 关键词：食品安全免疫检测
- 克伦特罗和莱克多巴胺多残留胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：17
- 2013年
- 本试验旨在研制同时检测克伦特罗(CL)和莱克多巴胺(RAC)的多残留胶体金免疫层析试纸条(Multi-strip)。用细胞融合技术筛选CL和RAC杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,金标抗体竞争性膜层析技术研制Multi-strip。该试纸条由样品垫、偶联垫、双检测线和质控线标记的NC膜、吸收垫等几部分构成,其中偶联垫上灌注有CL和RAC两种金标单克隆抗体,双检测线由检测抗原CL-OVA和RAC-BSA喷膜构成,间距2mm。结果表明:多残留试纸条的CL和RAC目测检测限分别为1和2ng·mL-1,检测时间5～8min。基质呈阳性的真实样品用单残留试纸条、ELISA和GC-MS检测,结果一致,无假阳性或假阴性案例。该试纸条具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合于现场检测和筛选。
- 姜金庆杨雪峰王自良邓瑞广王选年张改平
- 关键词：克伦特罗莱克多巴胺胶体金
- 睾酮多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立被引量：2
- 2012年
- 采用优化的碳化二亚胺法制备睾酮(TES)人工抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立间接竞争ELISA标准曲线。标准曲线在PBS中的线性检测范围为0.096～92.200 ng/mL,相关系数R2=0.972 2,半数抑制浓度(IC50)为2.800 ng/mL,最低检测限(LOD)为0.035 ng/mL;抗体与去甲睾酮的交叉反应率为22.3%,与其他检测化合物的交叉反应很小或忽略不计。羊尿20倍稀释后进行添加回收试验,其添加值与检测值的相关系数为0.985 2。因此,该免疫学方法可用于动物尿液中睾酮残留水平的定量分析。
- 李超英姜金庆李凤云杨金明吴世秀刘明成
- 关键词：睾酮人工抗原多克隆抗体间接竞争ELISA
- 莱克多巴胺人工免疫原合成及抗体特性被引量：9
- 2008年
- 将莱克多巴胺(RAC)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的RAC-戊二酸酐半醛化合物(RAC-SA);采用混合酸酐法(MA)将RAC-SA与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-RAC和包被抗原OVA-RAC,用红外(IR)、紫外(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,推算分子结合比;用BSA-RAC免疫新西兰白兔,间接ELISA测定多克隆抗体(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,琼脂双扩散试验、WestGold膜杂交试验和交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为24.5∶1;获得了高价、敏感、特异的RAC pAb,为RAC残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。
- 张海棠王自良王艳荣邓瑞广
- 关键词：莱克多巴胺半抗原人工免疫原抗体
