国家自然科学基金(30740087)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：中国医科大学附属第一医院沈阳医学院奉天医院重庆市第九人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 芯片分析自发恶性转化的大鼠骨髓间充质干细胞的基因表达谱被引量：1
- 2009年
- 为解析骨髓间充质干细胞(MSCs)自发恶性转化的遗传学基础,探讨其临床可用性和安全性。采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离大鼠MSCs,流式细胞仪分析细胞同源性,体外培养6个月后获得自发恶性转化的MSCs。应用基因芯片分析自发恶性转化的MSCs中差异表达的基因,进一步采用实时定量RT-PCR验证芯片分析结果。MSCs发生自发恶性转化后,有44条差异表达基因,其中21条基因表达上调,23条基因表达下调。经实时定量RT-PCR检测差异表达基因结果与芯片分析结果一致。Wnt、SHH、Notch、TGFβ/BMPs等信号转导通路上的若干基因在MSCs自发恶性转化中起到重要作用。
- 高芸单忠艳滕卫平王红张红梅
- 关键词：间充质干细胞基因表达谱基因芯片
- 靶向GPR48的shRNA抑制人宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移被引量：5
- 2009年
- 背景与目的:GPR48受体偶联Gs蛋白介导细胞内信号转导通路,通过调节微管聚合状态和基质金属蛋白酶活性,影响肿瘤细胞的侵袭转移。本研究探讨靶向GPR48的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人宫颈癌细胞株HeLa体外侵袭能力及在体转移能力的影响。方法:以人GPR48mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,构建靶向GPR48的shRNA真核表达质粒,同时构建不针对任何已知mRNA的阴性shRNA真核表达质粒,分别转染至HeLa细胞,新霉素抗性筛选稳定表达siRNA的转化克隆。采用RT-PCR和Western blot检测GPR48的表达变化。通过Boyden小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HeLa细胞体外侵袭能力的变化;分别将转染和未转染GPR48shRNA的HeLa细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤生长情况及肺部转移情况。结果:RNA干扰使HeLa细胞GPR48表达下调80%;与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组穿膜细胞数显著减少(28.3±1.5和17.6±1.5vs.94.4±15.7,P<0.01)。裸鼠在体肺转移实验中,与阴性对照组比较,转染靶向GPR48重组质粒的实验组肺转移结节数显著减少(1.3±0.2和1.5±0.4vs.7.8±1.8,P<0.01)。结论:shRNA真核表达载体能明显抑制HeLa细胞的GPR48表达,有效抑制HeLa细胞的体外侵袭和在体转移。
- 高芸单忠艳王红张红梅滕卫平
- 关键词：短发夹状RNA宫颈肿瘤HELA细胞裸鼠
- 自发恶性转化的大鼠骨髓间充质干细胞基因表达谱的芯片分析被引量：2
- 2009年
- 目的:解析骨髓间充质干细胞(MSCs)作为组织工程种子细胞的自发恶性转化的分子遗传学基础,探讨其临床可用性和安全性。方法:密度梯度离心法和贴壁筛选法联合应用,分离大鼠MSCs,流式细胞仪分析细胞同源性,体外培养6个月后获得自发恶性转化的MSCs。Trizol总RNA抽提法获取足量的RNA,用于MSCs基因表达谱的分析。实时定量RT-PCR法对在自发恶性转化的MSCs中呈差异表达的基因进行扩增和检测,以验证基因芯片分析结果。结果:流式细胞仪检测表明了所分离MSCs的高度同源性。MSCs发生自发恶性转化后,有44条差异表达基因,其中21条基因表达上调,23条基因表达下调。经实时定量RT-PCR检测差异表达基因结果与基因芯片结果一致。结论:Wnt、SHH、Notch、TGFβ/BMPs等信号转导通路上的若干基因在MSCs自发恶性转化中起到重要作用。
- 高芸单忠艳滕卫平王红张红梅
- 关键词：间充质干细胞基因表达谱基因芯片
- GPR48单克隆抗体的制备及其在甲状腺癌中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的制作G蛋白偶联受体48(GPR48)的单克隆抗体并研究其在甲状腺癌中的表达。方法利用细胞融合法制作单克隆抗体,蛋白免疫电泳法检测单克隆抗体。免疫组化法研究GPR48蛋白在90例甲状腺癌及35例良性甲状腺组织中的表达情况。结果成功制备了GPR48的特异性单克隆抗体。良性甲状腺疾病组织和癌对侧的甲状腺组织中几乎没有GPR48的表达。甲状腺癌组织中GPR48表达阳性率为61.1%(55/90)。未分化型甲状腺癌和分化型甲状腺癌中GPR48的表达阳性率分别为80.0%和55.7%(P=0.09),伴有淋巴结转移和不伴有转移的分化型甲状腺癌中GPR48的表达阳性率分别为77.3%和45.8%(P=0.03)。结论GPR48抗体可用于相应蛋白的特异性检测,GPR48可作为提示肿瘤分化和淋巴结转移的新标记物。
- 关海霞宝荣王翠芳高芸
- 关键词：单克隆抗体甲状腺癌
- GPR48单克隆抗体的制备及其在结直肠癌中的表达
- 2008年
- 目的:制备G蛋白偶联受体48(Gprotein coupled receptor 48,GPR48)单克隆抗体,并研究其在结直肠癌中的表达。方法:采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,Western印迹法和FCM检测单克隆抗体的特异性,免疫组织化学法检测GPR48在40例结直肠癌中的表达。结果:制备获得GPR48的特异性单克隆抗体;GPR48在正常结直肠黏膜组织中无表达;淋巴结转移者GPR48阳性率(85.7%)明显高于无淋巴结转移者(34.6%)(P<0.05);高分化者的GPR48表达阳性率(22.2%)明显低于中、低分化者的77.3%(P<0.05);GPR48的表达与患者的性别和肿瘤大小均无关。结论:GPR48抗体是1种特异性抗体,可将其作为一项新的预测肿瘤分化程度和淋巴结转移的指标。
- 高芸单忠艳滕卫平
- 关键词：结直肠肿瘤抗体单克隆免疫组织化学
- GPR48单克隆抗体的制备、鉴定及应用被引量：1
- 2009年
- 目的:制备GPR48的单克隆抗体,并且初步评估其在体外对子宫颈癌细胞侵袭转移的抑制作用。方法:纯化的GPR48特异性片段作为抗原,细胞融合法制备GPR48单克隆抗体,蛋白免疫印迹法检测单克隆抗体的特异性,用体外侵袭性实验检测该单抗抑制子宫颈癌细胞Hela侵袭转移的作用。结果:制备了效价高、特异性好的GPR48单克隆抗体。当加入10 nmol/L浓度的单克隆抗体时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为280±18、73±11;而当加入单抗浓度为50 nmol/L时,对照组和实验组的穿膜细胞数分别为267±30、14±3。结论:GPR48单克隆抗体在体外能够显著抑制子宫颈癌细胞的侵袭转移。
- 高芸单忠艳王红滕卫平
- 关键词：单克隆抗体子宫颈癌
