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国家自然科学基金(31272109)
作品数:
1
被引量:1
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相关作者:
黄鹰
刘媛
徐重新
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张存政
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相关机构:
江苏省农业科学院
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发文基金:
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作者
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谢雅晶
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张霄
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黄鹰
传媒
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江苏农业学报
年份
1篇
2013
共
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抗Bt(Cry1B)毒素单链抗体在sf9昆虫细胞中的表达及活性测定
被引量:1
2013年
通过构建pFastBacTM HT-A-scFv重组质粒,并将重组质粒化转DH10BacTM Escherichia coli感受态细胞,进行蓝白斑筛选,获得阳性克隆.PCR和基因测序检测证实挑取的白斑阳性单克隆存在完整、正确的单链抗体基因.提取阳性克隆中的重组杆状病毒穿梭载体(Bacmid-scFv)侵染sf9昆虫细胞,细胞发生明显病变特征.通过SDS-PAGE、Western blotting和间接竞争性ELISA等方法检测,发现单链抗体在sf9昆虫细胞中表达成功,测得纯化后蛋白浓度为103.000 0 μg/ml,Cry1B毒素对单链抗体的抑制中浓度(IC50)为1.010 0 μg/ml,最低检测线IC10为0.011 3μg/ml,线性检测范围为0.500 0~10.000 0 μg/ml.可溶性scFv对抗原类似物无交叉反应.
徐重新
张霄
张存政
刘媛
谢雅晶
黄鹰
刘贤金
关键词:
单链抗体
真核表达系统
酶联免疫分析
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