安徽省高校省级自然科学研究项目(KJ2012-A-200)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：夏惠陶志勇方强陈勇高迎更多>>
- 相关机构：蚌埠医学院南阳市中心医院更多>>
- 发文基金：安徽省高校省级自然科学研究项目卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室开放基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 恶性疟原虫配子体期特异性蛋白Pfgdv1克隆表达及鉴定
- 2016年
- 目的克隆恶性疟原虫配子体期特异性基因(Plasmodium falciparum gametocyte development 1 gene,Pfgdv1),体外表达和鉴定重组Pfgdv1蛋白。方法通过PCR法从恶性疟原虫感染病人血液DNA样本中扩增Pfgdv1基因,插入到原核表达载体p ET28a(+),构建p ET28a-Pfgdv1重组表达质粒,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),通过异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达重组蛋白,经Ni+-亲和层析柱纯化重组蛋白,纯化产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定。结果 PCR扩增的Pfgdv1基因长度约为1.65 kb,重组p ET28a-Pfgdv1质粒构建成功,插入方向正确无框移,转化至E.coli BL21(DE3+)所表达的重组蛋白分子量约为67 k Da,且能被抗His标签单克隆抗体识别。结论成功克隆了Pfgdv1基因,表达并纯化了重组Pfgdv1蛋白,为进一步研究恶性疟原虫配子体期传播阻断疫苗奠定了基础。
- 苏胖胖孟令文李江艳陶志勇陈勇乔继琛武肖肖金赟王好鹏方强王雪梅夏惠
- 关键词：恶性疟原虫配子体传播阻断疫苗原核表达
- 一种简便高效制备伯氏疟原虫蛋白的实验方法被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨建立简便有效的大量制备鼠伯氏疟原虫蛋白的方法。方法:采集伯氏疟原虫感染晚期的大鼠外周血经肝素抗凝,通过白细胞滤器过滤去除白细胞,再使用30%阿拉伯胶溶液经密度梯度离心法分离含虫红细胞,经皂素溶血,收集纯化的原虫,虫体经超声波破碎后离心,上清液经SDS-PAGE电泳分析。采用蛋白凝胶灰度扫描方法分析蛋白电泳条带的分布。结果:从大鼠含虫外周血可分离制备出大量的可溶性疟原虫蛋白,对大鼠分离的疟原虫可溶性蛋白与小鼠来源的原虫可溶性蛋白比较,两种蛋白的电泳图谱完全相同。结论:利用大鼠模型可简便高效地制备大鼠伯氏疟原虫,结合超声波破碎法可提取足量的可溶性疟原虫蛋白抗原。
- 刘从森陈勇朱玲玉唐素兰管俊昌夏惠
- 关键词：伯氏疟原虫蛋白抗原
- PvMSP1对树突状细胞分化成熟和功能的影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察间日疟原虫裂殖子主要蛋白1(PvMSP1)对树突状细胞(DC)分化成熟和功能的影响,并探讨该蛋白通过Toll样受体(TLR)通路活化DC的机制。方法选择不同剂量的PvMSP1(1.0、10.0、100.0μg/ml)体外刺激人单核细胞来源的DC,采用流式细胞术分析DC成熟性相关分子CD83、CD86、HLA-DR的表达变化;ELISA检测DC培养上清中IL-10、IL-12的表达水平;RT-PCR检测DC TLR4、TLR9 mRNA的表达水平;MTT法检测DC刺激自体淋巴细胞增殖的能力。同时选择未刺激的DC作为阴性对照组,LPS刺激的DC作为阳性对照组。对所得数据进行方差分析和q检验。结果与未刺激组比较,LPS诱导组CD83、CD86、HLA-DR的百分含量均增加,PvMSP1诱导组CD83、CD86、HLA-DR的表达也均升高(P均<0.05);LPS诱导组IL-10、IL-12的表达量明显增加(P<0.01),PvMSP1诱导组IL-10、IL-12的表达量也均增加(P均<0.05);LPS组DC TLR4 mRNA的表达增加(P<0.05),TLR9 mRNA的表达无明显变化(P>0.05),PvMSP1诱导组DC TLR4 mRNA的表达增加(P<0.01),TLR9 mRNA无明显变化(P>0.05);DC能够刺激自体淋巴细胞增殖。结论 PvMSP1具有促进DC分化成熟的作用,且经其诱导成熟的DC具备抗原递呈功能;PvMSP1可能经TLR4通路而非TLR9通路诱导DC成熟。
- 高迎陶志勇夏惠杨文选陶莉方强买月琴
- 关键词：间日疟原虫分化
- 间日疟原虫醛缩酶的克隆、表达与初步鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:克隆间日疟原虫醛缩酶(Plasmodium vivax aldolase,PvALD)基因,体外表达和鉴定重组PvALD蛋白。方法:PCR法从间日疟患者血液DNA样品中扩增PvALD基因,构建pET32c-PvALD重组表达质粒,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3+),诱导表达带有His标签的重组蛋白,并对PvALD在E.coli中表达进行优化,观察诱导时间、诱导剂浓度、培养基种类对该蛋白原核表达的影响。采用镍柱亲和层析纯化重组蛋白,相应表达物分别采用SDS-PAGE电泳和Western blot进行分析鉴定。结果:PvALD的PCR产物分子量为1.1 kb,重组质粒pET32c-PvALD经测序验证,其插入片段序列与GenBank参考序列相似性为100%,转化E.coli所表达的重组蛋白分子量约为60 kD。PvALD在LB中1 mmol/L IPTG诱导6 h条件下获得最佳的表达效果。亲和层析纯化后的PvALD经SDS-PAGE电泳检测,呈现单一条带,Western blot分析结果显示,该重组蛋白只能被间日疟患者血清特异性识别,而不能被恶性疟患者血清识别。结论:成功克隆了PvALD基因,表达了重组PvALD蛋白,为以PvALD作为靶标的间日疟快速诊断方法提供了基础。
- 高迎陶志勇夏惠陈勇王雪梅方强
- 关键词：间日疟原虫醛缩酶原核表达纯化
- 间日疟现症患者外周血树突状细胞亚群的变化
- 2012年
- 目的:观察间日疟现症患者外周树突状细胞(dendritic cells,DC)亚群比例的的变化,探讨DC亚群在间日疟发病机制中的作用。方法:采用流式细胞术四色荧光分析法检测18例间日疟现症患者(疟疾组)和36名健康成人(对照组)外周血的浆细胞样DC(pDC)和髓样DC(mDC)的比例。结果:疟疾组患者pDC明显低于对照组(P<0.01),mDC/pDC明显高于对照组(P<0.01),而mDC在2组间无明显不同(P>0.05)。结论:间日疟现症患者机体呈现免疫抑制状态,间日疟原虫与DC相互作用,可能通过调整mDC/pDC的比值参与间日疟感染的Th1型免疫应答的诱导和调控。
- 买月琴陶志勇刘丹陈勇方强李柏青夏惠
- 关键词：间日疟树突状细胞流式细胞术免疫应答
