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国家自然科学基金(30970165): 作品数：11 被引量：40H指数：4; 相关作者：李忠玉吴移谋黄秋林周洲周辉更多>>; 相关机构：南华大学美国德州大学德克萨斯大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金湖南省自然科学基金湖南省普通高等学校更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白经TLR2激活MAPKs信号通路诱导人单核细胞产生前炎症细胞因子: 2013年; 沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)可引起泌尿生殖道感染,导致不孕、异位妊娠等严重并发症.过度的炎症反应被认为是Ct感染造成机体生殖道免疫病理损伤的重要原因,但其具体机制尚不清楚.本研究旨在探讨Ct质粒蛋白pORF5的潜在致炎活性,以及与TLR2和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的关系.结果表明,pORF5蛋白以剂量和时间依赖方式诱导THP-1细胞产生TNF-α,IL-1β,IL-8等前炎症细胞因子.进一步研究表明,pORF5蛋白能激活p38/MAPK和ERK/MAPK,但不能激活JNK/MAPK;p38/MAPK和ERK/MAPK特异性抑制剂及TLR2抗体能降低前炎症细胞因子产生水平.该研究初步证实,pORF5质粒蛋白经TLR2活化的p38/MAPK和ERK/MAPK通路诱导THP-1细胞产生前炎症细胞因子,pORF5质粒蛋白可能是Ct重要的致病因子,参与Ct炎症病理过程.; 周辉黄秋林李忠玉吴移谋谢小兵马康康曹文娟周洲陆春雪钟光明; 关键词：沙眼衣原体丝裂原活化蛋白激酶前炎症细胞因子

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白单克隆抗体2H4的纯化及其免疫学特性研究被引量：1: 2011年; 目的纯化抗沙眼衣原体pORF5单克隆抗体2H4并鉴定其免疫学特性.方法大量培养pORF5单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株并收集培养上清,采用G蛋白免疫亲和层析法纯化2H4单克隆抗体；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定2H4效价及抗体亚类；Western blot鉴定其特异性；免疫荧光试验（IFA）检测2H4单克隆抗体的衣原体种属特异性.结果纯化后2H4抗体的纯度高达93％；效价为1：1024,免疫球蛋白类型为IgG2a;2H4抗体不仅能特异性识别pORF5融合蛋白,而且能特异性识别Ct血清型A、D、L2、鼠农原体（MoPn）、鹦鹉热嗜农原体（6BC）质粒所编码的内源性pORF5蛋白,但不识别衣原体其他质粒蛋白和肺炎嗜衣原体（Cpn）.结论获得了高纯度的能特异识别pORF5质粒蛋白的单克隆抗体,为进一步研究pORF5蛋白结构和功能以及沙眼衣原体诊断试剂盒的研制奠定了良好的基础.; 李忠玉吴移谋黄秋林粟盛梅周洲陈超群周辉钟光明; 关键词：沙眼衣原体单克隆抗体免疫学特性

假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位研究被引量：1: 2012年; 包涵体膜蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用.为确定假定蛋白CT440在沙眼衣原体感染细胞中的定位及特征,本研究采用PCR方法从D型沙眼衣原体的基因组中扩增Ct440基因,克隆入pGEX-6p原核表达载体构建pGEX-6p/Ct440原核表达重组体,重组体转化到XL1-blue大肠杆菌,IPTG诱导表达融合蛋白GST-CT440.纯化后的CT440融合蛋白免疫小鼠制备抗体,间接免疫荧光(IFA)和Western blot测定抗体的特异性.特异性抗体用于分析CT440蛋白在衣原体感染细胞内的定位、表达时相特征及其对衣原体感染的影响.结果表明,CT440蛋白定位于沙眼衣原体包涵体膜上,为沙眼衣原体包涵体膜蛋白;该蛋白在衣原体感染12h后开始表达,直至持续到整个感染周期;转基因在胞浆表达的CT440融合蛋白不影响其后的衣原体感染.本实验为深入研究衣原体与宿主细胞间的相互作用,阐明衣原体致病机制提供了重要的实验依据.; 李忠玉黄秋林粟盛梅周洲陈超群钟光明吴移谋; 关键词：沙眼衣原体

沙眼衣原体pORF5蛋白真核表达系统的构建与鉴定被引量：1: 2010年; 目的构建沙眼衣原体(Ct)pORF5基因重组质粒pDSRed-C1/pORF5,建立pORF5稳定转染的表达系统并对其进行鉴定。方法PCR法扩增pORF5基因,定向插入pDSRed-C1真核表达载体构建pDSRed-C1/pORF5重组体,重组体经酶切、PCR及测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染法,分别将pDSRed-C1/pORF5和pDSRed-C1导入HeLa-229细胞,通过G418筛选获得转入目的基因的阳性细胞克隆;荧光显微镜和Western blot检测pORF5蛋白在细胞中的表达。结果所克隆的pORF5基因片段经测序完全正确;转染pDSRed-C1/pORF5的HeLa-229细胞大部分有pORF5蛋白的表达,而转染空载体pDSRed-C1或未转染的HeLa-229细胞,均未见pORF5蛋白表达。结论成功构建了稳定表达外源新基因pORF5的细胞系,为进一步研究该蛋白的结构功能、阐明Ct的致病机制、研制基因工程疫苗提供了有利的条件。; 李忠玉吴移谋黄秋林周洲; 关键词：沙眼衣原体真核表达

沙眼衣原体pORF5质粒蛋白诱发小鼠生殖道免疫损伤初步研究被引量：13: 2013年; 目的研究沙眼衣原体（Ch／amyd／atrachomatis，ct）pORt5质粒蛋白对小鼠生殖道组织的免疫损伤作用，并初步探讨其损伤机制。方法表达纯化GST-pORF5融合蛋白，融合蛋白经PreScissionProtease酶切和去内毒素处理后分别在第1、3、6天接种于BALB／c小鼠阴道后穹窿，第7天处死小鼠，分离小鼠生殖道组织，肉眼大体观察并进行炎症病理评分；ELISA方法检测血清、阴道灌洗液和小鼠脾细胞培养上清中的TNF-a、IL-1β和IL石细胞因子水平。结果pORF5蛋白接种组小鼠输卵管壶腹部与峡部出现不同程度的肿胀，周围结缔组织发生黏连，并出现了不同程度的扭曲与积水，而PBS和csr（谷胱甘肽S-转移酶）蛋白对照组输卵管组织未出现明显改变；同时生殖道组织炎症病理积分明显高于PBS对照组（P〈0．01）和GST对照组（P〈0．01）；pOaF5蛋白接种组小鼠脾细胞培养上清、阴道分泌物中TNF-a、IL-IB、Ib6水平均显著高于PBS和GST蛋白对照组（P〈0．05）；血清中TNF-a、IL-1B水平显著高于PBS和GST蛋白对照组（P〈0．01）。结论pOaF5蛋白能引起BAIB/c小鼠生殖道组织免疫损伤，该损伤机制可能与TNF-a、IL-115、IL石等炎症因子水平升高有关。; 邓红玉李忠玉吴移谋周辉马康康陆春雪钟光明; 关键词：沙眼衣原体免疫损伤细胞因子

衣原体持续性感染机制的研究进展被引量：1: 2011年; 人类致病性衣原体主要有肺炎嗜衣原体（Chlamydophila pneumoniae,Cpn）和沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）。其中Cpn是引起人类急性呼吸道感染的重要病原菌,可引起多种呼吸系统感染性疾病,如新生儿肺炎、支气管炎、咽炎等,; 周辉李忠玉; 关键词：肺炎嗜衣原体呼吸系统感染性疾病急性呼吸道感染沙眼衣原体新生儿肺炎

pORF5 plasmid protein of Chlamydia trachomatis induces proinflammatory cytokine production through MAPK pathways in THP-1 cells: Objective To investigate the potential pathogenicity of pORF5 plasmid protein of Chlamydia trachomatis and its...; Zhou HuiLi ZhongyuWu YimouMa KangkangZhou ZhouLu Chunxue

质粒蛋白pORF5在沙眼衣原体感染细胞中的定位及免疫原性研究(英文)被引量：4: 2011年; 目的分析沙眼衣原体隐蔽性质粒编码的质粒蛋白pORF5在感染细胞中的定位并初步探讨免疫原性特征。方法 PCR扩增pORF5质粒蛋白编码基因,构建原核表达重组体pGEX-6p/pORF5,重组体转化大肠杆菌XL1-blue中诱导表达融合蛋白;融合蛋白经Glutathione Sepharose亲和层析纯化后免疫小鼠,制备单克隆抗体和多克隆抗体,间接免疫荧光技术及免疫印迹鉴定抗体的特异性,并分析pORF5质粒蛋白在感染细胞中的分布特征。采用ELISA方法分析pORF5质粒蛋白的免疫原性。结果 pORF5原核表达重组体成功构建,融合蛋白在大肠杆菌中可溶性表达;pORF5主要分布于宿主细胞胞浆,但也少量分布在EB、RB上;pORF5能与衣原体患者血清及鼠免疫血清发生强烈地免疫反应。结论 pORF5为衣原体分泌蛋白,并具有很强的免疫原性。; 李忠玉吴移谋黄秋林钟光明周洲粟盛梅; 关键词：沙眼衣原体质粒分泌蛋白免疫原性

Development of ELISAs for the Detection of Urogenital Chlamydia trachomatis Infection Targeting the pORF5 Protein被引量：1: 2013年; Objective To prepare antibodies against pORF5 plasmid protein of Chlamydia trachomatis and develop double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assays (DAS-ELISAs) for the detection of genital C. trachomatis infections. Methods The pORF5 protein was expressed in Escherichia coli and used to immunize BALB/c mice and New Zealand rabbits to produce monoclonal antibodies (mAbs) and polyclonal antibody (pAb) for DAS-ELISAs. Clinical samples from 186 urogenital infection patients (groups Ⅰ) and 62 healthy donors (groups Ⅱ) were detected in parallel by the DAS-ELISAs developed in this study and by IDEIA PCE commercial ELISA. Results Two hybridoma cell lines, named 2H4 and 4E6, stably secreting specific mAbs against pORF5 were obtained. The mAb 2H4 was recognized by 32 (17.20%, positive recognition rate) and 25 (13.44%), mAb 2H4 by 0 (0%) and 2 (3.22%) samples from groups Ⅰ and Ⅱ, respectively. The sensitivities of mAbs 2H4 and 4E6 were 92.11% and 77.78% and the specificities were 100% and 96.88%, respectively in relation to the IDEIA PCE commercial ELISA. The sensitivities of detection for the DAS-ELISAs were 10 ng/mL (based on 2H4) and 18 ng/mL (based on 4E6). Conclusion Two DAS-ELISAs were developed in this study that provided a feasible and effective assay that could be considered alternative tools for the serodiagnosis of C. trachomatis infection.; LI Zhong YuHUANG Qiu LinSU Sheng MeiZHONG Guang MingWU Yi Mou; 关键词：衣原体感染泌尿生殖道 ELISA试剂盒酶联免疫吸附法

沙眼衣原体分泌性蛋白Pgp3滴鼻免疫增强小鼠对衣原体生殖道感染的保护作用被引量：7: 2012年; 【目的】探讨不同免疫途径沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)分泌性蛋白Pgp3的免疫保护效果,分析其可能的保护机制,以确定Pgp3蛋白疫苗在Ct疫苗研制中的应用价值。【方法】分泌性蛋白Pgp3经滴鼻或肌注途径免疫雌性Balb/c小鼠,免疫60 d后,阴道接种鼠沙眼衣原体(Chlamydia muridarum,Cm)建立生殖道感染动物模型,在该模型中评价Pgp3蛋白疫苗抗Cm感染的保护效果,并探讨其机制。【结果】滴鼻或肌注免疫后,小鼠血清及生殖道中检测到了特异性抗体;小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ、IL-17及IL-5水平均明显高于对照组,且滴鼻免疫组IFN-γ水平升高较肌注组更显著(P<0.05);Pgp3蛋白滴鼻免疫组小鼠经Cm生殖道感染后,阴道带菌时间明显缩短,输卵管病理改变轻而肌注免疫组其保护作用不明显。【结论】Pgp3蛋白经滴鼻免疫可有效诱导小鼠产生明显的抗Cm保护效应。其可能的免疫保护机制与诱导Th1型为主的细胞免疫应答及高效价的特异性抗体有关,提示Pgp3蛋白疫苗具有潜在的疫苗研究与开发价值。; 陆春雪吴移谋彭波李忠玉胡四海钟光明; 关键词：沙眼衣原体蛋白疫苗免疫保护

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