辽宁省教育厅高等学校科学研究项目(L2011219)
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：大连大学大连海洋大学更多>>
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- 沉默HepG2细胞核糖核酸酶抑制因子的shRNA逆转录病毒载体的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建针对人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的shRNA逆转录病毒载体,为探讨hRI抗肿瘤作用机制打下基础。方法用亚克隆法将目的片段pkd-dsRI和pkd从表达载体pKD-dsRI克隆到pLNCX上,用双酶切筛选得到阳性克隆后,用脂质体法将其转染到人肝癌细胞HepG2细胞中,用800 mg/L G418筛选2周,产生稳定的细胞克隆后,用RT-PCR检测细胞中核糖核酸酶抑制因子mRNA表达的变化。结果双酶切鉴定为阳性克隆。RTPCR表明,对比空白组(0.790±0.014)和空载体组(0.904±0.027),干扰组hri基因表达(0.361±0.048)明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了针对hRI的shRNA逆转录病毒载体。
- 李琳李坤王福强丁宁
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子SHRNA逆转录病毒载体
- 增强型绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子包装细胞系的建立及鉴定
- 2014年
- 目的:建立及鉴定产生绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的PA317包装细胞系。方法:采用脂质体转染法将pLNCX-EGFP-C1-hRI质粒转染至PA317包装细胞,分为空白细胞组(未转染组)、pLNCX-EGFP-C1转染组(对照组)、pLNCX-EGFP-C1-hRI转染组(实验组),每组设3个复孔,转然后用RT-PCR和Western blot方法检测egfp-hRI基因在PA317细胞的表达。结果:RT-PCR和Western blot方法显示,转染后在PA317细胞中检测到egfp-hRI基因表达;用脂质体转染法获得了G418阳性的PA317包装细胞克隆。结论:实验成功建立了产生绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子的PA317包装细胞系,为后续试验奠定了基础。
- 丁宁李坤常明
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子增强型绿色荧光蛋白
- 绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子病毒感染NIH3T3细胞的研究
- 2014年
- 目的:鉴定NIH3T3细胞中绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子基因(egfp-hRI)的表达情况。方法:采用上清感染法,将产生绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子反转录病毒的PA317细胞上清感染NIH3T3细胞,使反转录病毒介导的绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子载体(pLNCX-EGFP-C1-hRI)稳定整合于NIH3T3细胞。用荧光显微镜检测目的基因的表达,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测目的基因在NIH3T3细胞的表达。结果:在荧光显微镜下可见绿色荧光在细胞浆内表达,Western blot法检测到目的基因表达。结论:建立表达绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子的NIH3T3细胞株。
- 李坤丁宁
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子绿色荧光蛋白
- siRNA干扰人核糖核酸酶抑制因子在HeLa细胞中的表达鉴定
- 2014年
- 目的鉴定已构建的干扰人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的siRNA表达载体pKD-dsRI的干扰效果。方法用脂质体法将所构建的pKD-dsRI与充当报告基因的重组绿色荧光蛋白融合hRI的逆转录病毒载体(pLNCXEGFP-C1-hri)共转染到人宫颈癌HeLa细胞中。实验设4组:空白细胞组(未转染组)、pLNCX-EGFP-C1-hri转染组(对照组1)、pKD+pLNCX-EGFP-C1-hri共转染组(对照组2)及pKD-dsRI+pLNCX-EGFP-C1-hri共转染组(干扰组)。采用RT-PCR和Western blotting检测egfp-hri基因在转录后基因水平和蛋白质水平的表达。结果干扰组egfp-hri基因的mRNA转录水平和蛋白表达水平较对照组1与对照组2分别下降了91%、85%和83%、81%(P<0.05)。结论已成功构建了针对hRI的siRNA表达载体。
- 李坤丁宁李琳
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子SIRNA
- 靶向人核糖核酸酶抑制因子双抗性的shRNA逆转录病毒载体构建及鉴定
- 2014年
- 目的构建靶向人核糖核酸酶抑制因子（hRI）新霉素-潮霉素B双抗性的shRNA逆转录病毒载体,为探讨人核糖核酸酶抑制因子抗肿瘤作用机制提供依据。方法用亚克隆法,将潮霉素B抗性基因hygr从载体pIRES-hygr2克隆到pLNCX-pKD-dsRI-neor与pLNCX-pKD-neor上,用酶切筛选得到阳性重组质粒pLNCX-pKD-dsRI-neor-hygr与pLNCX-pKD-neor-hygr。转染时设干扰组、空载体组和空白组。用脂质体法将pLNCX-pKD-dsRI-neor（干扰组）、pLNCX-pKD-neor-hygr（空载体组）转染到人肝癌细胞SMMC77细胞中,未处理的细胞作空白组,用400 mg/L G418和200 mg/L潮霉素B筛选3～4周产生稳定的细胞克隆后,用Western blotting检测细胞中核糖核酸酶抑制因子表达的变化。结果酶切结果证明重组质粒构建成功;Western blotting表明,与空白组（0.1810±0.015）和空载体组（0.1951±0.027）相比,干扰组RI表达（0.0311±0.048）明显下调（P〈0.05）。结论成功构建的靶向人核糖核酸酶抑制因子新霉素-潮霉素B双抗性的shRNA逆转录病毒载体能下调RI基因的表达。
- 李坤丁宁
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子SHRNA逆转录病毒载体
- 荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子基因在人肝癌细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的探讨重组绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子(RI)的逆转录病毒载体pLNCX-EGFP-C1-hri在肝癌细胞中的表达。方法用脂质体法将所构建的重组载体pLNCX-EGFP-C1-hri转染到人肝癌HepG2细胞中,用600 mg/L G418筛选2周后采用RT-PCR和Westen blot检测pLNCX-EGFP-C1-hri表达。结果在HepG2细胞中,pLNCX-EGFP-C1-hri在基因转录水平和蛋白质水平均高效表达(P均<0.01)。结论本研究成功构建重组绿色荧光蛋白融合人RI的逆转录病毒载体。
- 李琳李坤王福强丁宁常明
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子逆转录病毒载体绿色荧光蛋白肝细胞
- 人核糖核酸酶抑制因子的shRNA逆转录病毒载体的鉴定
- 2014年
- 目的：鉴定构建的针对人核糖核酸酶抑制因子（ RI）的shRNA逆转录病毒载体。方法用脂质体法将针对人RI的shRNA逆转录病毒载体转染到人肝癌细胞SMMC7721中，用800 mg/L G418培养3～4周筛选产生稳定的细胞克隆，用RT-PCR和Western blot检测细胞中RI mRNA和蛋白的表达。结果 RT-PCR 和Western blot 表明，RI表达明显下调（ P＜0．05）。结论成功构建了针对人RI的shRNA逆转录病毒载体。
- 覃尚珠李坤丁宁王福强李琳
- 关键词：人核糖核酸酶抑制因子SHRNA逆转录病毒载体
