国家自然科学基金(30740033)
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 相关作者：江彤蒋磊李瑞贾琳丁菲更多>>
- 相关机构：安徽农业大学安徽省淮北市相山区农林水利局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省高校省级自然科学研究项目安徽省自然科学基金更多>>
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- 草莓镶脉病毒(SVBV)ORF Ⅵ基因的克隆及蛋白特性分析被引量：2
- 2011年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV ORF Ⅵ基因的全长片段,进行克隆并测序.序列分析表明SVBV ORF Ⅵ基因完整序列全长1 557bp,编码518个氨基酸.将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORF Ⅵ基因相比较,结果表明SVBV中国分离物ORF Ⅵ基因与SVBV美国分离物ORF Ⅵ基因核苷酸序列相似性最高,达84.5%;而与花椰菜花叶病毒属其他成员的ORF Ⅵ基因序列相似性均较低,仅为23.7%～27.9%.构建SVBV及其同属其他成员ORF Ⅵ基因的系统关系树,结果显示SVBV中国分离物与SVBV美国分离物单独形成1个分支,说明来源于草莓的2个SVBV亲缘关系最近,而与其同属其他成员的亲缘关系均较远.生物信息学分析表明SVBVORF Ⅵ基因表达的P6蛋白序列含有多种蛋白激酶磷酸化位点,其二级结构N端是1个α-螺旋富集区.该研究将为进一步研究P6蛋白的功能提供理论依据.
- 李瑞倪方锐贾琳蒋磊江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒ORF克隆
- 草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备被引量：1
- 2013年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白。
- 蒋磊邓竹根谢朝阳杨友志李祥宇丁菲江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒克隆原核表达
- 草莓镶脉病毒启动子鉴定
- 启动子是基因表达调控的重要元件,它能够启动下游基因的转录,CaMV 35S启动子是植物基因工程中最为常用的启动子.草莓镶脉病毒(SVBV)和花椰菜花叶病毒(CaMV)同属于花椰菜花叶病毒属,有关SVBV启动子的研究,国内...
- 杨友志李瑞江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒启动子活性分析
- 草莓镶脉病毒(SVBV)ORFⅠ基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增含有SVBVORFⅠ的片段,克隆并测序。序列分析表明,该片段全长1 033个核苷酸,其中包含的ORFⅠ全长987个核苷酸,编码328个氨基酸。结果表明:将其与花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅠ序列相比较,中国SVBVORFⅠ与美国SVBV ORFⅠ序列相似性最高,达88.3%。进一步构建SVBV及其同属其他成员ORFⅠ的系统关系树,结果显示:中国SVBV ORFⅠ与美国SVBV ORFⅠ单独形成1个亚分支,说明来源于草莓的2个SVBV亲缘关系最近。
- 贾琳倪方锐李瑞蒋磊丁菲江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒克隆
- 草莓镶脉病毒(SVBV)启动子的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 【目的】对草莓镶脉病毒(SVBV)启动子进行序列测定和分析,为进一步研究该启动子稳定表达活性、表达类型及驱动外源基因稳定表达提供理论依据。【方法】用CTAB法从感染SVBV的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV启动子,克隆并测序。将SVBV启动子与花椰菜花叶病毒属其他成员的启动子核苷酸序列进行比较,并构建其系统关系树,再用PlantCARE软件分析SVBV启动子序列中的各个作用元件。【结果】获得全长为1017 bp的SVBV启动子。序列比列表明,本研究构建的中国SVBV启动子与美国SVBV启动子序列相似性最高,达77.29%。从构建的系统关系树可以看出,中国SVBV启动子与美国SVBV启动子单独聚成一个亚分支,说明来源于草莓的2个SVBV启动子亲缘关系最近。另外,SVBV启动子和花椰菜花叶病毒(CaMV)启动子亲缘关系虽然相对较近,但二者序列相似性较低,说明SVBV启动子与CaMV 35 S启动子的结构差异较大。进一步分析表明,SVBV启动子除了具有一般植物启动子的典型作用元件TATA-box和CAAT-box外,还具有一些与组织特异性表达或诱导表达相关的调节因子。【结论】SVBV启动子具有多种转录顺式作用元件,可能是一个在双子叶植物中具有较强驱动活性的组成型启动子。
- 倪方锐李瑞李爽贾琳蒋磊宋培培江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒启动子克隆
- 安徽淮北番茄曲叶病的病原鉴定初报被引量：6
- 2010年
- 采用分子手段鉴定了安徽淮北番茄曲叶病的病原。从安徽淮北番茄温室采集番茄叶片样本,用CTAB法从番茄叶片中提取总DNA。利用简并引物PA、PB进行PCR扩增,从大部分样本中扩增出双生病毒500 bp特异性条带。将扩增片段克隆并测序,该片段序列全长541 bp,与我国报道的番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）各个分离物序列相似性均很高,达到95.9%~99.4%,可以初步明确侵染安徽淮北番茄的双生病毒为番茄黄化曲叶病毒（TYL-CV）。安徽淮北TYLCV 500 bp片段序列与山东TYLCV相似性最高,达99.4%,而且从构建的系统关系树也可以看出,安徽淮北TYLCV与山东TYLCV的亲缘关系最近,推测安徽淮北番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）可能来源于山东。
- 丁菲王前蒋磊李瑞贾琳江彤
- 关键词：番茄
- 草莓镶脉病毒(SVBV)CP基因的克隆及序列分析被引量：3
- 2009年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计3对特异性引物扩增SVBVCP基因的3个片段,分别克隆并测序。经序列拼接得到SVBVCP基因完整序列,全长1407nts,编码468个aa。将它与美国报道的SVBV(NC001725)以及花椰菜花叶病毒属其它成员的CP基因相比较,结果表明,SVBVCP基因与SVBV(NC001725)CP基因序列相似性最高,达83.4%;而与花椰菜花叶病毒属其它成员的CP基因序列相似性均较低,仅为27.1%～33.2%。构建SVBV及其同属其它成员CP基因的系统关系树,结果显示中国SVBV与SVBV(NC001725)单独形成一个分支,而与其同属其它成员的亲缘关系均较远。
- 李爽李瑞宋培培江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒CP基因克隆
- 草莓镶脉病毒外壳蛋白的原核表达及多抗血清制备被引量：4
- 2012年
- PCR扩增得到了草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的外壳蛋白(coat protein,cp)基因,将SVBV cp基因克隆到原核表达载体pET-32a上,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为0.05 mmol·L-1的IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳及Western-blot分析表明,SVBV cp基因在大肠杆菌中得到了融合表达。利用Ni2+-NTA亲和树脂纯化重组融合蛋白,免疫家兔获得了重组蛋白的多抗血清。以此多抗血清建立了Dot-ELISA检测方法,结果表明,制备的特异性多抗血清可以快速检测出感病草莓样品中的SVBV。
- 江彤杨友志丁菲蒋磊李祥宇邓竹根谢朝阳宋培培
- 关键词：草莓镶脉病毒外壳蛋白原核表达
