国家科技攻关计划(2004BA519A64)
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 相关作者：潘全李珊李云龙叶昕更多>>
- 相关机构：山东师范大学中国科学院更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 人Cyclin E原核表达载体的构建及表达被引量：2
- 2007年
- 目的:构建人CyclinE基因原核表达载体,并在E.coliBL21中表达并纯化。方法:PCR扩增人CyclinE基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET32a(+)中,构建重组质粒pET32a(+)-CyclinE。经限制性内切酶EcoRI与XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21,经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得全长约为1200bp的人的CyclinE基因片段。以构建的重组质粒pET32a(+)-CyclinE转化E.coliBL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约60000的融合蛋白。经SDS-PAGE、Westernblot分析显示,诱导表达的蛋白为CyclinE。结论:成功地构建了表达载体pET32a(+)-CyclinE,并表达出重组蛋白His-CyclinE,为进一步筛选在体内外能与CyclinE和CDK2结合的新蛋白奠定了基础。
- 李珊潘全李云龙叶昕
- 关键词：CYCLIN基因克隆原核表达
