国家自然科学基金(30740016)
- 作品数：3 被引量：24H指数：3
- 相关作者：段振玲王赞宏李莉彭芝兰更多>>
- 相关机构：山西医科大学第一医院昆明医学院第一附属医院四川大学更多>>
- 发文基金：山西省青年科技研究基金国家自然科学基金山西省卫生厅科技攻关计划项目更多>>
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- 自噬基因Beclin1抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的研究被引量：4
- 2011年
- 目的:研究自噬基因Beclin1对裸鼠宫颈癌细胞株HeLa移植瘤的抑制作用。方法:将自噬基因Beclin1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Westernblot检测其mRNA及蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长抑制率;将HeLa细胞接种于裸鼠右前肢腋下建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分别以重组质粒pcDNA3.1(+)-Bec-lin1、pcDNA3.1(+)和生理盐水200μl每两天1次直接瘤内注射,连用3周后,测量3组肿瘤大小并观察肿瘤组织形态学改变。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1能使HeLa中Bec-lin1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05),并显著抑制HeLa细胞的生长,呈现时间依赖性,与其余两组相比,有显著统计学差异(P<0.05);经重组质粒治疗21天后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相对于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.05),病理检查可见,pcD-NA3.1(+)-Beclin1处理组瘤块内细胞坏死减少,结缔组织增生,而对照组中癌细胞分布呈弥漫性。结论:自噬基因Beclin1可以抑制HeLa移植瘤的生长。
- 王赞宏段振玲李莉
- 关键词：自噬BECLIN1宫颈癌裸鼠
- 自噬基因Beclinl对宫颈癌HeLa细胞生长影响的体内外研究被引量：16
- 2011年
- 目的研究自噬基因Beclinl在宫颈癌细胞株HeLa中过表达对HeLa细胞体内外生长的影响。方法构建自噬基因Beclinl的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-Beclinl，转染HeLa细胞[pcDNA3．1（＋）．Beclinl组]，同时设空载体转染组[pcDNA3．1（＋）组]和空白对照组。采用荧光定量PCR和Westernblot法检测3组HeLa细胞中BeclinlmRNA和蛋白的表达变化，采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测3组HeLa细胞生长的变化，采用流式细胞术检测3组HeLa细胞的凋亡情况，采用单丹磺酰尸胺染色检测3组HeLa细胞的自噬情况。将3组HeLa细胞分别接种于裸鼠皮下，观察体内成瘤性和生长情况。结果pcDNA3．1（＋）-Beclinl组、pcDNA3．1（＋）组和空白对照组HeLa细胞中BeclinlmRNA的表达水平分别为994．718±468．764、0．570±0．121和0．736±0．251。pcDNA3．1（＋）-Beclinl组HeLa细胞中BeclinlmRNA的表达水平较pcDNA3．1（＋）组和空白对照组明显增高（P〈0．05），而pcDNA3．1（＋）组与空白对照组间的差异无统计学意义（P〉0．05）；3组HeLa细胞中Beclinl蛋白的表达情况与mRNA相似。pcDNA3．1（＋）-Beclinl组的自噬细胞率为10．9％，明显高于空白对照组和pcDNA3．I（＋）组（分别为2．5％和3．1％，P〈0．05）。pcDNA3．1（＋）-Beclinl组HeLa细胞的凋亡率为（28．2±2．3）％，明显高于peDNA3．1（＋）组和空白对照组[分别为（14．6±4．6）％和（11．2±3．0）％，P〈0．05]。Beclinl在HeLa细胞中过表达可抑制肿瘤细胞在体外的生长，抑制率为58．7％；并可使HeLa细胞在裸鼠体内成瘤时间延长，瘤体体积和重量明显小于pcDNA3．1（＋）组和HeLa组（P〈0．05），抑瘤率为52．2％。结论自噬基因Beclinl过表达可抑制HeLa细胞在体内外的增殖，促进细胞的自噬与凋亡，为宫颈癌基因治疗提供了新的选择途径。
- 王赞宏李莉彭芝兰段振玲
- 关键词：自噬宫颈肿瘤HELA细胞
- 自噬基因beclin 1对子宫颈癌HeLa细胞生长的作用及其机制被引量：5
- 2011年
- 目的研究自噬基因beelin 1对宫颈癌细胞株HeLa细胞生长的抑制作用，并探讨其可能的机制。方法实验分为5组：（1）pcDNA．3．1（＋）-beclin 1组：转染重组载体pcDNA3．1（＋）-beclin 1质粒（过度表达beelin 1基因）的HeLa细胞；（2）pSUPER—beelin 1组：转染重组载体pSUPER．beclin 1质粒的HeLa细胞（抑制Beclin1基因表达）；（3）pcDNA3．1（＋）组：转染空载体pcDNA3．1（＋）质粒的HeLa细胞；（4）pSUPER组：转染空载体pSUPER质粒的tteLa细胞；（5）空白对照组：未转染质粒的HeLa细胞。采用逆转录（RT）PCR技术和蛋白印迹法检测各组细胞中beclin 1 mRNA和蛋白的表达以及凋亡因子——半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9（caspase-9）mRNA及蛋白的表达；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞的生长情况；流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；电镜观察和流式细胞仪检测各组细胞的自噬情况。将各组细胞分别接种于裸鼠皮下，观察各组裸鼠体内的成瘤性及肿瘤生长情况。结果（1）各组细胞中beclin 1、caspase-9 mRNA和蛋白的表达：peDNA3．1（＋）-beclin 1组beelin1和caspase-9 mRNA的表达水平分别为994．72±468．76和12．88±2．71，pSUPER-beelin 1组分别为0．18±0．63和0．11±0．08，peDNA3．1（＋）组分别为0．57±0．12和4．28±3．25，pSUPER组分别为0．67±0．29和2．77±1．27，空白对照组分别为0．74±0．25和3．67±3．78，pcDNA3．1（＋）-beclin 1组均明显高于peDNA3．1（＋）组、pSUPER 1组和空白对照组，pSUPER—beelin 1组均明显低于pcDNA3．1（＋）组、pSUPER组和空白对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。各组细胞中beclin 1和caspase-9蛋白的表达情况与mRNA相似。（2）各组细胞的生长情况：pcDNA3．1（＋）-beclin 1组细胞的生长明显慢于空白对照组及pcDNA3．1（＋）组，而pSUPER．beclinl组细胞的生长明显快于空白对照组�
- 王赞宏李莉段振玲
- 关键词：膜蛋白质类凋亡调节蛋白质类半胱氨酸天冬氨酸
