山东省卫生厅科技基金(2011QW029)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王玉于爱莲焦凤萍于广福郑绮菡更多>>
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- HSV-2gD、HBsAg和IL18多表位基因疫苗的构建方法被引量：2
- 2012年
- 目的研究多表位串联重组核酸疫苗中IL18与HBsAg(S)抗原、P6(NP6)抗原在质粒中所处位置的差异对抗原表达是否有影响。方法分别将IL18连接在融合蛋白P6-S(NP6-S)的氨基端和羧基端,即构建4种质粒:pc-IL18-P6-S、pc-IL18-NP6-S、pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18。采用DNAstar软件分析4种质粒表达的融合蛋白的抗原性。将重组质粒分别转染CHO细胞进行瞬时表达,通过间接免疫荧光和Western blotting检测S、P6(NP6)抗原的表达情况,以确定最佳的连接方式。结果应用DNAstar软件分析可知IL18在融合蛋白的氨基端的抗原性高于在羧基端。间接免疫荧光检测结果发现IL18位于融合蛋白羧基端的质粒表达的抗原性优于氨基端,即:质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18的S、P6(NP6)抗原的表达情况均优于质粒pc-IL18-P6-S和pc-IL18-NP6-S,故选用质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18作为优势质粒。结论成功构建了4种质粒,并确定了优势质粒,此项技术将为新一代多基因核酸疫苗的研制提供实验依据,从而为构建更加有效的多价DNA疫苗奠定了良好的基础。
- 焦凤萍郑绮菡王玉于爱莲于广福
- 关键词：多表位基因IL-18单纯疱疹病毒II型HBSAGDNA疫苗
- HSV-2gD模拟抗原表位、HBsAg与IL-18融合蛋白DNA疫苗的免疫效果观察
- 2012年
- 目的:研究串联重组核酸疫苗pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-P6-IL18和pc(pcDNA3.1)-S(HBsAg)-NP6-IL18对机体的免疫效果,P6是我们前期采用噬菌体展示技术筛选出的HSV-2gD的模拟抗原表位,NP6为与HSV-2gD模拟抗原表位P6最相似的天然抗原表位序列。方法:分别将空质粒pcDNA3.1(阴性对照组)和构建的真核表达质粒pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔2周。末次免疫后2周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后一月,处死小鼠,无菌分离脾脏,用刀豆蛋白A刺激淋巴细胞,采用MTT法测定脾淋巴细胞增殖率。结果:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体(抗HBsAg抗体和抗HSV-2gD模拟表位抗体)的产生,与阴性对照组相比可诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18,可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。结论:重组核酸疫苗pc-S-P6-IL18和pc-S-NP6-IL18能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,可用于今后预防HBV和HSV-2感染的研究。
- 焦凤萍郑绮菡于爱莲王玉于广福
- 关键词：DNA疫苗IL-18HBSAG
- HSV-2gD、gBCTL表位及Hsp70融合DNA疫苗的免疫效果观察被引量：4
- 2013年
- 目的研究多表位重组DNA疫苗pc(pcDNA3.1-)-P6-gBCTL-Hsp70的免疫原性。方法将构建的真核表达质粒pcP6-gBCTL-Hsp70转染CHO细胞表达,采用间接免疫荧光和Western blotting检测P6抗原的表达情况。将重组质粒肌肉注射免疫接种Balb/c小鼠3次,每次间隔2周。末次免疫后1周采集眼眶静脉血,末次免疫后1月无菌分离小鼠脾脏。采用ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率,LDH法检测CTL活性。结果重组质粒pc-P6-gBCTL-Hsp70具有一定的免疫原性,可刺激机体产生特异性抗体,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18,促进小鼠脾淋巴细胞的增殖,CTL杀伤病毒感染细胞活性增强。结论重组核酸疫苗pc-P6-gBCTL-Hsp70能诱导较强的细胞免疫和体液免疫。
- 焦凤萍王玉于爱莲田兆菊李冬赵兴民
- 关键词：DNA疫苗HSP70单纯疱疹病毒II型
- HSV-2gD核酸疫苗的构建及免疫效果观察被引量：1
- 2012年
- 目的:在前期筛选的HSV-2gD模拟抗原表位序列P6的基础上,以pcDNA3.1(-)为载体、IL-18为佐剂,构建P6与IL-18串联的重组表达质粒,并在真核细胞中表达。将重组质粒免疫小鼠,观察免疫效果。方法:采用串联简并引物PCR法构建重组质粒pcDNA3.1-IL18-P6和pcDNA3.1-IL18,以酶切、测序鉴定。将重组质粒分别转染CHO细胞进行瞬时表达,通过间接免疫荧光和Western blot法检测P6的表达情况。将构建的真核表达质粒肌内注射免疫接种BALB/c小鼠3次,每次间隔1周。末次免疫后1周眼眶静脉采血,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体滴度、IFN-γ及IL-18含量;末次免疫后1个月,处死小鼠,无菌分离脾脏,MTT法测定脾淋巴细胞增殖率。结果:构建的串联重组质粒pcDNA3.1-IL18-P6和pcDNA3.1-IL18经酶切及测序显示基因序列完全正确,经间接免疫荧光、Western blot法检测可证实模拟抗原表位序列P6具有近似天然序列的生物学活性。重组核酸疫苗pcDNA3.1-IL-18-HSV P6免疫小鼠后可刺激血清特异性抗体的产生,诱导分泌较高水平的IFN-γ和IL-18。可促进小鼠脾淋巴细胞的增殖。结论:成功构建和表达了重组质粒pcD-NA3.1-IL18-P6,其能诱导较强的细胞免疫和体液免疫,从而为构建更加有效的HSV-2DNA疫苗奠定了良好的基础。
- 焦凤萍刘莉王玉于爱莲于广福
- 关键词：单纯疱疹病毒白细胞介素-18模拟抗原表位疫苗
