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浙江省医药卫生科学研究基金(2003B104)
作品数:
1
被引量:2
H指数:1
相关作者:
沈周俊
丁国庆
陈善闻
廖国栋
周卸来
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相关机构:
浙江大学医学院附属第一医院
浙江大学医学院附属邵逸夫医院
上海交通大学医学院附属瑞金医院
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发文基金:
浙江省医药卫生科学研究基金
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相关领域:
医药卫生
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医药卫生
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作者
1篇
周卸来
1篇
廖国栋
1篇
陈善闻
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丁国庆
1篇
沈周俊
传媒
1篇
中华外科杂志
年份
1篇
2008
共
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人干扰素α-2b基因重组卡介苗的构建与鉴定
被引量:2
2008年
目的构建能自动分泌表达人干扰素α-2b(IFNα-2b)的重组卡介苗(rBCG-IFNα-2b)菌株,并对其进行鉴定。方法分别从人外周血和BCG基因组中提取DNA,聚合酶联反应(PCR)扩增人IFNα-2b基因和BCGAg85B信号肽基因,将该两片段插入质粒pMV261,构建分泌型卡介苗穿梭表达载体pMV261-AgS5B-IFNα-2b。电穿孔将该载体导入BCG中,构建rBCG-IFNα-2b。分别用PCR扩增和Westernblot检测rBCG-IFNα-2b中人IFNα-2b基因和蛋白的表达情况,酶联免疫吸附(ELISA)检测rBCG-IFNα-2b培养上清中IFNα-2b蛋白的表达情况。结果采用酶切、PCR扩增及DNA测序对pMV261-AgS5B-IFNα-2b进行鉴定,结果显示BCGAgS5B信号肽片段和人IFNα-2b片段与文献结果一致,连接方向正确。以rBCG-IFNα-2bDNA为模板、IFNα-2b引物进行PCR扩增后得到与理论上大小相同的扩增片段,Westernblot显示rBCG-IFNα-2b的培养上清和菌体中均可检测到IFNα-2b蛋白的表达,且培养上清中蛋白的表达量明显多于菌体,ELISA法可检测到培养上清中有高表达的IFNα-2b蛋白(301.45pg/ml)。结论成功构建了能自动分泌表达人IFNα-2b的新型重组卡介苗菌株rBCG-IFNα-2b,为进一步研究其免疫活性和抗膀胱肿瘤疗效奠定了基础。
丁国庆
沈周俊
陈善闻
周卸来
廖国栋
关键词:
卡介苗
膀胱肿瘤
干扰素Α-2B
基因重组
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