国家自然科学基金(31200864)
- 作品数：13 被引量：67H指数：3
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- 心肌I_(K1)激动剂zacopride抗左甲状腺素致大鼠心室重构作用的研究
- 2017年
- 目的探讨心肌内向整流钾通道(I_(K1))激动剂zacopride对左甲状腺素致大鼠心室重构的抑制作用及可能的机制。方法 SD大鼠,随机分为对照组,左甲状腺素模型组,zacopride 5、15、50μg·kg^(-1)干预组,zacopride(15μg·kg^(-1))+氯喹(7.5μg·kg^(-1))组和卡托普利阳性对照组。连续给药10 d。超声测量大鼠左室舒张期内径(LVIDd)、左室收缩期内径(LVIDs)、室间隔厚度(IVS)、左室射血分数(EF)和左室短轴缩短率(FS);测心肌肥厚指数;Langendorff急性分离成年大鼠单个心室肌细胞,全细胞膜片钳技术测量各组I_(K1)电流、L-型钙通道(I_(Ca-L))电流的变化;Fluo-4激光共聚焦显微镜观察细胞形态,测胞内游离钙离子浓度([Ca^(2+)]_i)。结果与对照组比,左甲状腺素模型组全心和左心肥厚指数明显增加,LVIDd、LVIDs增大,IVS增厚,EF和FS明显降低(P<0.01);I_(K1)电流减小,ICa-L增加(P<0.01);心室肌细胞增宽、肥大,[Ca^(2+)]_i增高(P<0.01)。Zacopride干预后,各指标均明显改善,15μg·kg^(-1)为最适效应剂量。氯喹7.5μg·kg^(-1)作为I_(K1)通道相对特异性阻断剂,可阻断zacopride对I_(K1)通道的激动效应,明显逆转zacopride的减轻钙超载和抗心室重构作用。结论 Zacopride可能通过选择性激动心肌I_(K1),减轻细胞内钙超载而逆转左甲状腺素诱发的心室重构。
- 郭云飞杨迎刘福翟旭雯张研李盼张莉吴博威刘清华
- 关键词：内向整流钾通道左甲状腺素心室重构心肌肥大钙超载
- 大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道重组质粒构建及真核表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道真核表达质粒,并鉴定其在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达。方法提取大鼠心脏组织细胞RNA,逆转录扩增kir2.2、kir2.3通道编码基因,克隆至真核表达质粒pEGFP-N1中,构建重组质粒并转染HEK293细胞,应用全细胞膜片钳法定kir2.2、kir2.3通道电流。结果重组质粒pEGFPN1-kir2.2及pEGFP-N1-kir2.3经双酶切和测序证实构建正确,并在HEK293细胞中成功表达,且记录到相应通道电流。结论成功构建了大鼠心脏kir2.2、kir2.3通道真核表达质粒,并在HEK293细胞中成功表达。
- 张莉秦桂秀张新华刘克战吴博威刘清华焦咪范辰辰宋瑞瑞鲍春丽李瑜
- 关键词：基因表达
- 体育类院校大学生运动员心电图早复极的检出率及特点
- 2016年
- 目的 了解体育类院校大学生运动员早复极发生率及特点.方法 选取北京体育大学竞技体育学院在校17～24岁大学生运动员1658名,以连续2个导联J点抬高（≥0.1 mV）和（或）R波降支的切迹（正向,≥0.1 mV）或粗钝作为早复极诊断标准.将入选的发生复极者作为试验组,非早复极者为对照组,分别比较其左室高电压发生率、心室率、QTc的差异性.结果 1658名大学生运动员共检出早复极556例,总发生率为33.5％,男性运动员多于女性运动员（38.1％比22.0％,P＜0.05）.不同训练年限组中,男/女性运动员分别随训练年限的增加,早复极的发生率增加（P＜0.05）;同一训练年限组中,男性运动员早复极的发生率高于女性运动员（≤5年,26.7％比6.9％;5～10年,35.9％比19.9％;≥10年,46.7％比33.1％,P均＜0.05）.早复极组男/女性运动员左室高电压发生率均高于非早复极组（男性8.2％比3.1％,女性5.8％比1.4％,P＜0.05）.早复极组男/女性运动员心室率、QTc较非早复极组无明显减慢及延长（P＞0.05）.结论 本研究中大学生运动员早复极总发生率为33.5％,训练年限越长,早复极的发生率越高,相同训练年限,男性运动员早复极的发生率高于女性运动员.早复极组男/女性运动员左室高电压发生率均高于非早复极组.
- 李瑜曹晓娜刘清华
- 关键词：心电图大学生运动员
- Zacopride通过PKA途径选择性激动大鼠心肌Kir2．1通道被引量：3
- 2013年
- 前期研究发现促胃肠动力药zacopride(5-HT4受体激动剂兼5-HT3受体拮抗剂)通过选择性激动大鼠心室肌内向整流钾电流(inward rectifier potassium current,IK1)表现出抗室性心律失常无房性致心律失常作用,本研究旨在探讨zacopride这一独特的药理特性的分子机制.采用胶原酶法急性分离大鼠心房肌细胞;利用全细胞膜片钳技术观察zacopride对大鼠心房肌细胞IK1电流、细胞跨膜电位和在HEK293细胞上表达的大鼠心肌Kir2.1,Kir2.2,Kir2.3通道和磷酸化位点突变的Kir2.1(S425L)通道的效应,以及干预5-HT受体和干预PKA,PKC,PKG信号通路的工具药对zacopride调节IK1作用的影响.运用Western blot分析大鼠心房肌及心室肌kir2.x通道构成.结果表明,zacopride对大鼠心房肌细胞IK1电流及跨膜电位无显著影响;可使HEK293细胞上表达的同源Kir2.1外向电流增加40.7%±9.7%(在50 mV,P<0.01),而对同源Kir2.2、同源Kir2.3及异源Kir2.1+Kir2.2,Kir2.1+Kir2.3和Kir2.2+Kir2.3通道电流均无明显作用.Western blot分析显示,Kir2.3表达量在大鼠心房及心室无明显差异,而大鼠心房Kir2.1的表达量仅为心室相应量的25%;HEK293细胞上5-HT3受体缺失,5-HT4受体呈低表达水平.PKA抑制剂能够显著抑制zacopride激动Kir2.1电流的效应,而PKC,PKG抑制剂不能影响这一效应;zacopride在50 mV可使Kir2.1 S425L突变体电流增加13.3%±6.5%,但无统计学意义(P>0.05).以上结果提示,zacopride激动Kir2.1电流的效应是经AC/cAMP/PKA信号通路介导的,而与其对5-HT3和5-HT4受体的作用无关.
- 张莉刘清华刘成芳翟旭雯封启龙许瑞龄崔香丽赵志青曹济民吴博威
- 关键词：内向整流钾通道5-HT受体蛋白激酶
- 基于多源数据和动作电位特征筛选心肌内向整流钾通道特异性激动剂
- 2019年
- 目的 基于多源数据和心肌动作电位(action potential,AP)特征筛选出新的内向整流钾通道(inward rectifier potassium channel,IK1)特异性激动剂。方法 HCT116人结肠癌细胞经IK1特异性激动剂zacopride 1μmol/L(Za_1组)和40μmol/L(Za_40组)分别孵育24 h后进行转录组测序(RNA-seq),与对照组(Ctl组)差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)信息导入基于多源数据的药物重定位平台,筛选zacopride作用相似物。采用膜片钳法验证预测药物对SD大鼠左心室肌细胞静息电位(resting potential,RP)和AP的影响。结果 Ctl与Za_1组DEG226个,Ctl与Za_40组DEG 302个。经药物重定位平台筛选,两组数据分别筛选出相似度排序前100的药物,取交集并通过文本关联分析,最终得到7种可能与zacopride具有相似作用且未见文献报道的药物,随机编号Drug 1-7。Drug 4、6、7可增大RP,缩短动作电位时程(action potential duration,APD),是潜在的IK1激动剂;Drug 1和3对AP无明显影响;Drug 5可明显延长APD;Drug 2在低浓度时延长APD,高浓度时缩短AP。经进一步验证,Drug 6阿库氯铵在1~50μmol/L浓度范围内可剂量依赖性增大RP,并缩短APD,符合IK1特异性激动剂对动作电位的作用特征。结论 基于多源数据和心室肌AP作用特征的药物筛查方法有利于快速有效判断药物可能的离子通道靶点,从而筛查到更多的IK1激动剂,为抗心律失常新理论和新方法的研究提供更多可能。
- 李盼赵晓泽乔希贺培凤卢学春于琦刘清华
- 关键词：内向整流钾通道激动剂多源数据转录组测序动作电位
- 脓毒性休克患者早期主要炎性因子水平及其临床意义被引量：43
- 2019年
- 目的探讨主要炎性因子与重症医学科(ICU)患者发生脓毒性休克的相关性,为其诊疗提供判断依据.方法选择2017年3月至2018年8月大同市第三人民医院ICU收治的成人患者为研究对象,根据脓毒性休克诊断标准将其分为脓毒性休克组和非脓毒症组.比较两组患者基本信息,包括年龄、性别、体重指数(BMI)、病程、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ)、感染部位和病原菌等,以及确诊后8 h内C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8)等炎性因子水平.采用Logistic回归分析ICU患者发生脓毒性休克的危险因素.结果共入选154例ICU患者,其中有74例发生脓毒性休克.脓毒性休克组除APACHEⅡ评分显著高于非脓毒症组外(分:23.42±3.64比15.67±2.26,P<0.05),其他基线资料比较差异均无统计学意义.脓毒性休克组患者CRP、NT-proBNP、TNF-α、IFN-γ、PCT、IL-6、IL-8水平均明显高于非脓毒症组〔CRP(mg/L):164.3±22.6比52.3±16.2,NT-proBNP(ng/L):426.3±288.9比167.3±80.6,TNF-α(ng/L):193.4±39.3比88.1±20.3,IFN-γ(ng/L):133.3±52.0比97.0±56.1,PCT(ng/L):27.6±10.2比7.3±4.1,IL-6(ng/L):83.0±17.6比20.9±6.4,IL-8(ng/L):445.8±34.0比84.0±25.7,均P<0.05〕.Logistic回归分析显示,CRP、NT-proBNP、TNF-α、PCT、IL-6为ICU患者发生脓毒性休克的独立危险因素〔CRP:优势比(OR)=1.662,95%可信区间(95%CI)=1.132~2.567;NT-proBNP:OR=14.688,95%CI=3.580~20.238;TNF-α:OR=1.093,95%CI=1.043~1.343;PCT:OR=6.378,95%CI=4.556~12.243;IL-6:OR=9.641,95%CI=2.242~13.786,均P<0.05〕.结论CRP、NT-proBNP、TNF-α、PCT、IL-6等炎性因子水平明显升高是脓毒性休克早期诊断的重要因素.
- 杨建钢杨玉彬刘清华
- 关键词：脓毒性休克炎性因子白细胞介素
- 5-HT4受体部分激动剂RS67506作为心肌IK1通道抑制剂的研究被引量：1
- 2019年
- 目的验证5-HT4受体部分激动剂RS67506对心室肌内向整流钾通道(IK1)和动作电位(actionpotential,AP)的作用特征.方法取成年雄性SD大鼠心脏经Langendorff离体灌流、胶原酶法急性分离单个左心室肌细胞,采用膜片钳技术检测l^30μmol/LRS67506对心室肌静息电位(restingpotential,RP)、动作电位(actionpotential,AP)及Ix1通道电流的影响.结果1μmol/L、10μmol/L、30μmol/LRS67506可剂量依赖性降低静息电位[由(-75.2±0.4)mV分别降低至(-72.7±0.5)mV、(-70.1±0.4)mV和(-67.9±0.9)mV,P<0.01],延长动作电位复极时间(APD)[APD90由(31.1±1.1)ms分别延长至(34.7±0.6)ms、(40.4±1.2)ms和(45.0±0.5)ms,P<0.05或P<0.01].同时剂量依赖性抑制IK1,30μmol/LRS67506可使IK1外向电流密度(-60my)降低58.4%(P<0.05);内向电流密度(-100mV)降低53.2%(P<0.01).结论RS67506对大鼠心室肌IK1和AP的作用特征符合IK1抑制剂的特点,可能作为大鼠心肌IK1抑制剂,为临床防治心律失常提供新的药理学工具药.
- 赵晓泽刘清华
- 关键词：内向整流钾通道静息电位动作电位心律失常
- 4种5-HT_4受体激动剂对大鼠心肌I_(K1)通道的影响及促心律失常风险比较被引量：3
- 2017年
- 目的比较4种5-羟色胺4型(5-HT4)受体激动剂西沙必利(cisapride),扎考必利(zacopride),莫沙必利(mosapride)和2[1-(4-胡椒基)哌嗪]基苯并噻唑{2-[1-(4-Piperonyl)piperazinyl]benzothiazole,BZTZ}对大鼠心室肌细胞膜内向整流钾通道(IK1)功能和蛋白表达的影响,并观察其对大鼠离体心脏心律的影响,从而评估其致心律失常的风险。方法应用全细胞膜片钳技术分别观察4种激动剂对胶原酶分解的成年SD大鼠心室肌细胞膜IK1和HEK293细胞异源表达的Kir2.1通道电流的影响。应用免疫印迹法检测4种激动剂孵育大鼠心室肌细胞24 h后IK1主要亚单位Kir2.1通道蛋白表达的变化。将麻醉大鼠的心脏取出进行Langendorff主动脉逆行灌流,分别观察4种激动剂给药30 min内离体心脏节律的变化,全程记录心电图。结果在大鼠心室肌细胞,BZTZ,西沙必利和莫沙必利0.1~10μmol·L-1可浓度依赖性地抑制IK1。在相同浓度(1μmol·L-1)时,BZTZ对IK1的抑制效应最强(P<0.01),其次为西沙必利,莫沙必利最弱。扎考必利可激动IK1(P<0.01)。在Kir2.1重组质粒转染HEK293细胞,扎考必利激动Kir2.1通道电流(P<0.01),而莫沙必利无明显影响。在大鼠离体心脏,BZTZ和西沙必利1μmol·L-1可引起严重的心律失常,期前收缩数分别达到159±28和(61±13)次(P<0.01),室速发生率分别为50%(P<0.05)和25%,室颤发生率分别为37.5%和12.5%。莫沙必利和扎考必利对心律均无明显影响,不引起心律失常的发生。扎考必利还可抑制西沙必利和BZTZ诱发的心律失常。4种激动剂的促心律失常风险等级依次为BZTZ>西沙必利>莫沙必利和扎考必利。结论 IK1可能作为5-HT4受体激动剂致心律失常副作用的独立风险因子和筛选安全5-HT4受体激动剂和促胃肠动力药的新靶点。
- 刘清华李瑜曹晓娜张莉翟旭雯
- 关键词：内向整流钾通道促胃肠动力药
- 心肌内向整流钾通道(IK1)激动剂缺血预处理对再灌注性心律失常的影响被引量：3
- 2018年
- 目的在麻醉大鼠或离体灌流大鼠心脏建立缺血/再灌注(再灌注)性心律失常模型,应用心肌内向整流钾通道(La)激动剂扎考比利(Zacopride)缺血预处理观察Zacopride对再灌注性心律失常的效应并分析可能的机制。方法在体实验:结扎SD大鼠心脏冠状动脉左前降支,局部缺血15min,松扎后再灌15min,建立再灌注性心律失常模型。在缺血前3min(缺血预处理,pretreatment)分别给予1.5、15或50μg/kgZacopride。应用利多卡因(Lidocaine)做阳性对照药。全程连续记录心电图。离体实验:麻醉SD大鼠,开胸取出心脏,建立Tyrode液-Langendorff离体灌流系统,结扎SD大鼠心脏冠状动脉左前降支,局部缺血15min,松扎后再灌15min,建立离体再灌注性心律失常模型。缺血前3min分别给予0.1、1或10μmol/L Zacopride观察预处理对离体再灌注性心律失常的影响,IK1非特异性阻断剂BaCl2 1μmol/L拮抗Zacopride的效应。结果在体实验:应用1.5~50 Zacopride缺血预处理可显著抑制再灌注诱发的心律失常,最适剂量为15μg/kg(p<0.05),与利多卡因效应相仿(P>0.05);离体实验:Langendorff离体灌流心脏应用0.1~10μmiol/LZacopride缺血预处理可有效抑制再灌注心律失常的发生,1μmol/L为Zacopride作用最适浓度,其效应被1μmol/L BaCl2明显逆转。结论大鼠在体和离体实验证明,Zacopride预处理可有效抑制再灌注性心律失常;应用低剂量的BaCl2可消除Zacopride的抗心律失常作用,表明Zacopride抗缺血-再灌注性心律失常作用是通过其激动Ik1通道介导的。
- 赵晓泽张研李盼乔希李瑜刘清华
- 关键词：内向整流钾通道再灌注心律失常
- 心肌内向整流钾通道IRK1激动剂后适应可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤
- 2021年
- 目的:探讨心肌内向整流钾通道IRK1激动剂扎考必利(Zac)后适应减轻心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的作用及机制。方法:胶原酶法分离成年雄性SD大鼠心室肌细胞,体外利用矿物油覆盖法建立H/R损伤模型。细胞分别缺氧45和75 min之后去除上层石蜡油密封层并更换新鲜台氏液,复氧30 min;2种损伤模型复氧前分别给予0.1、1和10μmol/L的Zac进行药物后适应;激光共聚焦显微镜观察比较Fluo-4负载细胞内游离钙离子浓度;Westernblot法测定各组心肌细胞IRK1主要亚单位Kir2.1蛋白的表达。此外,在心肌H9c2(2-1)细胞建立H/R模型,分别缺氧3和5 h,之后复氧2 h;2种损伤模型复氧前分别加入0.1、1和10μmol/LZac进行药物后适应;ELISA法检测乳酸脱氢酶和caspase-3含量;CCK-8法检测细胞活力;Westernblot法测定各组心肌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白的水平。结果:成年大鼠心室肌细胞复氧时预先给予0.1~10μmol/LZac可有效抑制H/R引起的IRK1抑制和细胞内钙超载。在心肌H9c2(2-1)细胞H/R模型中,0.1~10μmol/LZac后适应可激活PI3K/Akt信号通路,减少心肌细胞的坏死和凋亡,其中0.1μmol/LZac为最适效应浓度;IRK1阻断剂BaCl_(2)可有效抑制Zac的效应(P<0.01),表明Zac的后适应保护是IRK1依赖的。结论:通过激动心肌IRK1减轻心肌细胞内钙超载并激活PI3K/Akt信号通路是减轻H/R损伤的有效策略。IRK1可能成为拮抗心肌缺血/再灌注损伤药物作用的新靶点。
- 刘清华许言午李瑜刘文媛赵晓泽
- 关键词：内向整流钾通道药物后适应PI3K/AKT信号通路
