国家质检总局科技计划项目(2011IK200)
- 作品数：5 被引量：15H指数：3
- 相关作者：王珣吴静高宏伟栾凤侠孙方达更多>>
- 相关机构：东北农业大学黑龙江省农业科学院山东出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目黑龙江省科技厅青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 多重PCR结合变性高效液相色谱技术转基因小麦检测方法的建立被引量：7
- 2011年
- 为了满足对小麦转基因成分高通量快速检测的需要,建立了一种新的转基因小麦检测方法。通过对不同稀释倍数的转基因小麦品系B73-6-1中的内源基因Wx012、外源基因ubiquitin、bar、nos、uidA进行单一PCR和多重PCR扩增,应用琼脂糖凝胶和变性高效液相色谱(DHPLC,denaturing high performance liq-uid chromatography)技术分离PCR产物,进行灵敏度分析,并用非转基因小麦京花1号籽粒、大豆籽粒、麦片、转基因小麦B73-6-1加工成的油炸制品为样本,对建立的检测体系进行检测。结果表明,样品经多重PCR扩增和DHPLC分离后,能够得到准确可靠的转基因图谱。与凝胶电泳方法比较,本研究所建立的多重PCR-DHPLC具有更高的检测通量和灵敏度(能够同时检测5个基因,灵敏度达到1 ng.μL-1),能够满足小麦转基因成分的高通量快速检测的要求,同时也为转基因产品检测提供了一种新的技术手段。
- 白月栾凤侠王珣关学佳
- 关键词：转基因小麦多重PCR变性高效液相色谱
- 应用多重PCR-DHPLC方法快速检测转基因马铃薯及EH92-527-1品系鉴定被引量：5
- 2011年
- 以EH92-527-1转基因马铃薯为试材,应用多重PCR技术同时扩增马铃薯的内源基因(UGPase)和外源基因(NOS终止子、NPTII结构基因和EH92-527-1品系特异基因),将扩增产物在DHPLC非变性条件下分离,分析几个基因扩增的结果;将模板进行稀释,确定了方法的检测灵敏度,并与凝胶电泳结果相比较,建立了马铃薯转基因成分筛选检测及品系鉴定的多重PCR-变性高效液相色谱(DHPLC)方法。试验结果表明,该方法能够同时筛选检测转基因马铃薯的四个内、外源基因,且与凝胶成像相比,有更好的检测灵敏度,可达到1 ng/μL。本文首次建立的马铃薯多重PCR-DHPLC检测方法,能够高通量快速准确的检测马铃薯中的转基因成分及对品系进行鉴定。
- 白月栾凤侠高宏伟
- 关键词：转基因马铃薯多重PCR变性高效液相色谱品系鉴定
- 转基因作物及产品检测技术的研究进展被引量：1
- 2013年
- 为了规范管理转基因产品,以建立转基因产品的检测技术标准为前提,通过分析转基因作物商业化的18a中转基因作物种植面积持续增长的态势,以核酸检测方法为主,介绍了基因芯片、PCR技术、变性高效液相色谱和环介导等温扩增技术在转基因检测领域的研究进展,并对今后转基因检测技术标准的发展进行了展望。
- 胡珅程阳栾凤侠
- 关键词：转基因作物核酸变性高效液相色谱环介导等温扩增
- 应用PCR-DHPLC技术高通量快速检测转基因玉米被引量：5
- 2012年
- 利用多重PCR结合DHPLC技术首次建立转基因玉米高通量快速检测方法。根据公布的转基因玉米外源基因序列设计并合成适合多重PCR的引物序列,以转基因玉米为模板,通过优化多重PCR和DHPLC的反应条件,建立一套同时快速筛选检测玉米中多种转基因成分的7重PCR-DHPLC检测方法。该方法的检测灵敏度为0.195 ng/μL,质粒检测灵敏度为1×103拷贝/μL。
- 吴静李铁柱孙瑶孙方达栾凤侠赵明超
- 关键词：转基因玉米
- 马铃薯、番茄内源基因PCR检测引物设计及特异性分析被引量：3
- 2011年
- 对马铃薯UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因(UGPase,U20345)和番茄多聚半乳糖醛酸酶-2a基因(PG-2a,X04583.1)进行序列相似性分析和多序列比对,确定特异片段,设计特异引物,经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测,引物具有较高的特异性;同时建立利用双重PCR检测马铃薯和番茄混合成分的方法,当马铃薯和番茄DNA混合质量为1.25ng时,仍可对其成分进行可靠的鉴定。新设计的马铃薯和番茄内源基因的引物及建立的双重PCR检测方法具有一定的特异性和灵敏性,适于出入境检验检疫部门对马铃薯和番茄制品进行检测。
- 才华栾凤侠关学佳朱巍白月
- 关键词：马铃薯番茄UGPASE双重PCR
