国家自然科学基金(81000701)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 发文基金：国家自然科学基金中华医学会-欧莱雅 中国人健康皮肤/毛发研究项目更多>>
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- DJ-1降低细胞内ROS并抑制细胞凋亡保护黑素细胞抵抗H2O2诱导的氧化应激
- 2011年
- 目的探讨DJ-1蛋白在原代培养的人黑素细胞中的表达以及抵抗H2O2诱导的氧化应激作用。方法免疫荧光方法鉴定DJ-1在原代培养黑素细胞中的表达；使用不同浓度H20。处理黑素细胞24h，改良MTT法选取适宜H2O2浓度为后续实验条件；Westem印迹检测H202处理组细胞内DJ-1表达变化；采用反向转染方法，实验分为空白对照组（不含siRNA片段）、阴性对照组（转染非特异性siRNA）和实验组（转染DJ-1特异性siRNA）。光学显微镜观察细胞贴壁后形态学差异；改良MTT法、荧光探针2’,7＇-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH—DA）、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素，碘化丙啶（AnnexinV—FITC／PI）分别检测H2O2处理后细胞活力变化、细胞内活性氧（ROS）水平及凋亡比例。结果免疫荧光显示DJ-1在黑素细胞细胞核和胞质中均表达，以细胞核表达为主；细胞活力随H2O2浓度增高呈剂量依赖关系下降，与对照组比较，0．5mmol／L H2O2处理24h后，细胞活力开始下降（P〈0．05）。做诱导氧化应激的实验条件；Western印迹结果显示，0．5mmol／L H2O2处理细胞24h后，DJ-1表达增高为H2O2未处理组的2．23倍（P〈0．05）。干涉DJ-1表达后，实验组黑素细胞形态与空白对照组相比，树突减少缩短，胞质空泡化改变。使用0．5mmol／L H2O2处理24h后，siRNA—DJ-1组细胞活力为对照组的35％（P〈0．05）。细胞内ROS的荧光密度值（FI）值（902±40）和凋亡比例（58％±6．1％）增高，与空白对照组细胞内ROS的FI值（529-1-32）和凋亡比例（30％±3．8％）相比，P值均〈0．05。结论DJ-1在黑素细胞中能够通过降低细胞内ROS水平和抑制细胞凋亡，从而抵抗H2O2所诱导的氧化应激。
- 王志勇刘玲李春英坚哲李凯李强高天文
- 关键词：白癜风黑素细胞氧化性应激
- 汉族人早年白发差异表达基因的初步筛选及功能探索被引量：1
- 2013年
- 目的:通过筛选早年白发患者和正常黑发者毛发中差异表达的基因,为研究毛发黑素合成及转运的生理病理机制提供线索。方法:留取门诊确诊的早年白发患者毛发,应用退火控制引物(ACP)初步筛选差异表达的候选基因,实时定量PCR法进一步确认候选基因的表达水平;设计合成筛选出的Slc7a11和小眼相关转录因子(Mitf)的siRNA后,转染入正常人黑素细胞系PIG1,在H2O2诱导下,通过Annexin-V FITC检测其凋亡。结果:ACP筛选及RT-PCR验证结果提示,Slc7a11和Mitf基因表达水平在早年白发患者和正常人间有较大差异(P<0.01);降低这两种基因的表达后,PIG1的凋亡率较正常组升高。结论:Slc7a11和Mitf基因不仅在正常毛发色素合成中发挥着作用,同时也参与着氧化应激诱导下黑素细胞凋亡的过程,可能在一些色素相关性疾病的发生发展中起着关键的作用。
- 张雅君齐显龙赵涛党二乐宋璞晋亮刘玲
- 关键词：ACP氧化应激
