广东省自然科学基金(5300754)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：李娟苏畅黄珊许多荣罗绍凯更多>>
- 相关机构：中山大学附属第一医院广州市第一人民医院更多>>
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- 调节破骨细胞分化的RANK特异性cDNA片段的研究被引量：3
- 2009年
- 【目的】在生理条件下寻找调节破骨细胞(OC)分化的核转录因子NF-κB受体激动剂(RANK)的特异性cDNA功能片段,为研究OC分化机制提供理论基础。【方法】先将RANK膜内部分的1.2kb大小的cDNA分成20个片段,用缺失突变的方法构建出20个由肿瘤坏死因子受体1和RANK跨膜和膜内部分组成的TNFR1/RANK嵌合体的突变体,每一个突变体在RANK膜内部分含60bp缺失。再将RANK-cDNA第1561～1680bp之间的120bp片段分为10个片段,构建10个新的TNFR1/RANK突变体,每一个突变体在其RANK膜内部分含12bp缺失。用包装细胞PlatE分别将各突变体包装成逆转录病毒,通过感染分别将这些逆转录病毒转染到肿瘤坏死因子受体1和2基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞(BMM)中。用TNFɑ刺激后、观察哪一个突变体不能诱导OC形成。【结果】首先发现表达TNFR1/RANK1561-1620或TNFR1/RANK1621-1680的逆转录病毒感染的BMM不能分化成OC,然后在RANK-cDNA第1561～1680bp这个大的片段中又发现表达TNFR1/RANK1597-1608、TNFR1/RANK1609-1620、TNFR1/RANK1621-1632或TNFR1/RANK1633-1644的逆转录病毒感染的BMM也不能分化成OC。【结论】RANK-cDNA第1597～1644bp之间的48bp片段(5′-gggcaggtgatgaacttcaagggtgacatcatcgtggtgtatgtcagc-3′)对OC形成起决定性作用。
- 许多荣罗绍凯苏畅方荸荠黄珊李娟
- 关键词：嵌合体破骨细胞分化
- 调节破骨细胞分化的RANK特异性基序的再确认被引量：1
- 2009年
- 目的:进一步确认核转录因子NF-κB受体激动剂(RANK)蛋白中调节破骨细胞(OC)分化的特异性基序(motif),为阐明OC分化机制提供理论依据。方法:分别突变RANK蛋白膜内部分第533-540之间的8个氨基酸(突变前氨基酸序列为DIIVVYVS,突变后氨基酸序列为ELLAAFAA),用定点突变方法构建8个由肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)和RANK跨膜部分和膜内部分共同组成的TNFR1/RANK突变嵌合体(TNFR1/RANK-533-TNFR1/RANK-540),每1个突变体在其RANK膜内部分含1个突变氨基酸。用包装细胞plat E分别将各突变体包装成逆转录病毒,通过逆转录病毒感染分别将这些突变体转染到TNFR1/TNFR2基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞(BMM)中。用TNF-浕和单核细胞集落刺激因子(M-CSF)刺激、观察转染哪种突变体的BMM不能诱导OC形成,不能诱导OC形成的突变体所包含的突变前氨基酸就是RANK调节OC分化的关键氨基酸,多个关键氨基酸组成的片段就是RANK特异性motif。结果:转染TNFR1/RANK-533、TNFR1/RANK-539和TNFR1/RANK-540的BMM均能分化成OC,表明氨基酸D533、V539、S540突变后对OC分化无影响;转染TNFR1/RANK-534的BMM有极少数能分化成OC,表明氨基酸I534突变后对OC分化有部分影响;而转染TNFR1/RANK-535、TNFR1/RANK-536、TNFR1/RANK-537和TNFR1/RANK-538的BMM均不能分化成OC,表明氨基酸I535、V536、V537和Y538突变后对OC分化起关键影响。结论:I534、I535、V536、V537和Y538这5个氨基酸组成的片段(534-IIVVY-538)可能就是RANK调节OC分化的特异性motif。
- 许多荣李庆山张祥忠邹外一罗绍凯李娟苏畅黄珊杨茂华
- 关键词：破骨细胞
