安徽省自然科学基金(11040606M68)
- 作品数：7 被引量：8H指数：2
- 相关作者：江彤李祥宇蒋磊谢朝阳邓竹根更多>>
- 相关机构：安徽农业大学安徽省植物保护总站更多>>
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- 草莓镶脉病毒(SVBV)启动子的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 【目的】对草莓镶脉病毒(SVBV)启动子进行序列测定和分析,为进一步研究该启动子稳定表达活性、表达类型及驱动外源基因稳定表达提供理论依据。【方法】用CTAB法从感染SVBV的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV启动子,克隆并测序。将SVBV启动子与花椰菜花叶病毒属其他成员的启动子核苷酸序列进行比较,并构建其系统关系树,再用PlantCARE软件分析SVBV启动子序列中的各个作用元件。【结果】获得全长为1017 bp的SVBV启动子。序列比列表明,本研究构建的中国SVBV启动子与美国SVBV启动子序列相似性最高,达77.29%。从构建的系统关系树可以看出,中国SVBV启动子与美国SVBV启动子单独聚成一个亚分支,说明来源于草莓的2个SVBV启动子亲缘关系最近。另外,SVBV启动子和花椰菜花叶病毒(CaMV)启动子亲缘关系虽然相对较近,但二者序列相似性较低,说明SVBV启动子与CaMV 35 S启动子的结构差异较大。进一步分析表明,SVBV启动子除了具有一般植物启动子的典型作用元件TATA-box和CAAT-box外,还具有一些与组织特异性表达或诱导表达相关的调节因子。【结论】SVBV启动子具有多种转录顺式作用元件,可能是一个在双子叶植物中具有较强驱动活性的组成型启动子。
- 倪方锐李瑞李爽贾琳蒋磊宋培培江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒启动子克隆
- 草莓镶脉病毒编码的致病相关蛋白鉴定
- 草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)属于花椰菜花叶病毒科、花椰菜花叶病毒属(Caulimovirus).感染SVBV的弗吉尼亚草莓(Fragaria virginiana)...
- 邓竹根贾琳江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒致病机制
- 草莓镶脉病毒编码的P6蛋白是RNA沉默抑制子
- 基因沉默是植物依赖核酸序列特异性互作降解外源RNA来抵御病毒入侵的防御机制，许多植物病毒针对这种机制进化出一种反防御机制，编码不同的沉默抑制子来抑制基因沉默的发生.本研究系统鉴定了草莓镶脉病毒(SVBV)编码的P6蛋白功...
- 谢朝阳蒋磊江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒RNA沉默抑制子基因沉默
- 草莓镶脉病毒(SVBV)ORF Ⅵ基因的克隆及蛋白特性分析被引量：2
- 2011年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV ORF Ⅵ基因的全长片段,进行克隆并测序.序列分析表明SVBV ORF Ⅵ基因完整序列全长1 557bp,编码518个氨基酸.将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORF Ⅵ基因相比较,结果表明SVBV中国分离物ORF Ⅵ基因与SVBV美国分离物ORF Ⅵ基因核苷酸序列相似性最高,达84.5%;而与花椰菜花叶病毒属其他成员的ORF Ⅵ基因序列相似性均较低,仅为23.7%～27.9%.构建SVBV及其同属其他成员ORF Ⅵ基因的系统关系树,结果显示SVBV中国分离物与SVBV美国分离物单独形成1个分支,说明来源于草莓的2个SVBV亲缘关系最近,而与其同属其他成员的亲缘关系均较远.生物信息学分析表明SVBVORF Ⅵ基因表达的P6蛋白序列含有多种蛋白激酶磷酸化位点,其二级结构N端是1个α-螺旋富集区.该研究将为进一步研究P6蛋白的功能提供理论依据.
- 李瑞倪方锐贾琳蒋磊江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒ORF克隆
- 安徽省水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的分子检测和序列分析被引量：2
- 2013年
- 近年来,水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)在安徽各稻区危害日益严重,生产上仅凭症状难以区分2种病毒。本研究建立的RT-PCR方法可以实现一次性检测和鉴定RBSDV和SRBSDV 2种病毒,根据RBSDV和SRBSDV S9保守序列设计3个引物,不仅可以从单独感染RBSDV或SRBSDV的水稻样本中分别扩增出1条大小不同的特异性条带,而且还可以从感染RBSDV和SRBSDV的混合水稻样本中一次性扩增出2条大小不同的特异性条带。从安徽省庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市4个地区水稻田采集表现明显矮缩病症状的水稻样本,RT-PCR检测结果表明,庐江和郎溪水稻样本受到RBSDV侵染,怀宁和宣州水稻样本受到SRBSDV侵染。选取庐江县、郎溪县、怀宁县和宣州市各1个水稻样本,利用RT-PCR扩增出特异性条带,再分别克隆和测序。序列分析表明,庐江、郎溪2个样本的核苷酸序列与RBSDV-Shandong和RBSDV-Zhjr S9部分片段序列相似性高达99.3%～99.8%,且与RBSDV的亲缘关系最近,说明庐江和郎溪样本感染的病毒是RBSDV的2个分离物;怀宁、宣州2个样本的核苷酸序列与SRBSDV-Shangdong和RBSDV-2 S9部分片段序列相似性高达99.5%,且与SRBSDV亲缘关系最近,说明怀宁和宣州样本感染的病毒是SRBSDV的2个分离物。
- 李祥宇闫德龙郑兆阳陈莉刘家成丁克坚江彤
- 关键词：水稻黑条矮缩病毒南方水稻黑条矮缩病毒RT-PCR检测克隆
- 草莓镶脉病毒ORF Ⅵ基因的原核表达与抗血清制备被引量：4
- 2013年
- 为了分析草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)ORFⅥ基因的功能,采用原核表达技术获得该基因表达的重组蛋白并制备其抗血清。利用PCR技术扩增得到SVBV中国分离物的ORFⅥ基因,将此基因克隆到原核表达载体pET-SUMO上,获得重组质粒pET-SUMO-ORFⅥ。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导与Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为90 kD的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,采用间接ELISA和Western blot方法测定抗血清的效价、反应灵敏度以及ORFⅥ基因在本氏烟中的瞬时表达。结果显示,间接ELISA法测定抗血清对重组蛋白的效价达1∶256 000,Western blot法能够检测到稀释64 000倍的重组蛋白。利用稀释2000倍的抗血清,仍能够检测出SVBV中国分离物和美国分离物ORFⅥ基因在本氏烟中瞬时表达的蛋白。
- 江彤谢朝阳丁菲李祥宇贾琳
- 关键词：草莓镶脉病毒ORF原核表达抗血清
- 草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备被引量：1
- 2013年
- 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白。
- 蒋磊邓竹根谢朝阳杨友志李祥宇丁菲江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒克隆原核表达
- 南方水稻黑条矮缩病毒安徽分离物全基因组序列测定及分析
- 南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)是近年发现为害水稻的一种新病毒,能引起水稻植株矮缩、高位分蘖、倒生根、抽穗量少等症状,导致水稻减产甚至绝...
- 李祥宇闫德龙郑兆阳刘家成陈莉丁克坚江彤
- 关键词：南方水稻黑条矮缩病毒全基因组序列
- 草莓镶脉病毒启动子鉴定
- 启动子是基因表达调控的重要元件,它能够启动下游基因的转录,CaMV 35S启动子是植物基因工程中最为常用的启动子.草莓镶脉病毒(SVBV)和花椰菜花叶病毒(CaMV)同属于花椰菜花叶病毒属,有关SVBV启动子的研究,国内...
- 杨友志李瑞江彤
- 关键词：草莓镶脉病毒启动子活性分析
- 水稻条纹病毒安徽分离物NS3基因的克隆及其RNA沉默抑制子功能的初步鉴定
- 2013年
- 采集安徽马鞍山水稻条纹叶枯病感病稻株,TRIzol法提取样本总RNA,设计特异性引物进行RT-PCR扩增,获得水稻条纹病毒(RSV)安徽分离物的RNA3部分片段,克隆并测序。序列分析表明,该片段全长874 nts,含有完整的NS3基因,NS3基因序列长度为636 nts,编码211个氨基酸。序列比对发现,RSV安徽分离物NS3基因与来源于华东各省市RSV分离物NS3基因间的序列相似性高达97.6%～99.4%,而与RSV云南分离物NS3基因间的序列相似性相对较低,为93.4%～95.4%。构建RSV NS3基因系统关系树,发现RSV安徽分离物NS3基因与来源于华东各省市8个RSV分离物NS3基因聚成一个单独的分支,说明华东各省市各个RSV分离物亲缘关系最近。将RSV安徽分离物NS3基因插入植物表达载体pBIN438,构建重组植物表达载体pBIN-NS3并转化农杆菌。将含pBIN-NS3的农杆菌和含pBIN-GFP的农杆菌共浸润16c本氏烟叶片,6天后紫外灯下观察发现,共浸润区表现出强烈的绿色荧光,说明16c本氏烟GFP基因局部沉默被抑制,可以初步证明RSV安徽分离物编码的NS3蛋白是一个RNA沉默抑制子。
- 邓竹根丁菲贾琳宋培培江彤
- 关键词：水稻条纹病毒克隆RNA沉默抑制子
