广东省自然科学基金(020100)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 氯霉素乙酰基转移酶融合蛋白表达、纯化和鉴定被引量：1
- 2004年
- 目的对氯霉素乙酰基转移酶(Chloramphenicol acetyltransferase,CAT)基因进行表达和纯化。方法通过PCR扩增编码CAT氨基酸序列的基因片断,并将之克隆入pGEX-2T载体。IPTG诱导蛋白融合表达,产物经琼脂糖亲和层析树脂纯化。免疫印迹鉴定纯化蛋白的抗原性。结果筛选得到的重组子诱导后表达相对分子质量约为52 600的CAT融合蛋白。树脂纯化及酶切后均得到高纯度的蛋白样品。纯化蛋白能与抗CAT抗体特异结合。结论本研究获得了CAT基因的融合表达蛋白,并对其完成纯化,为制备抗血清和抗体打下基础。
- 潘玉先廖志勇郝卫车小燕
- 关键词：融合蛋白纯化
- EB病毒特异性增强子CAT报告质粒构建策略
- 2004年
- 构建携带EB病毒特异性增强子oriP不同结构域的CAT报告质粒,以探讨EB病毒特异性增强子与EB病毒核抗原-1结合后的转录增强作用。聚合酶链反应扩增得到增强子oriP全序列,借助于pUC19质粒将其不同结构域克隆到pCAT3Promoter(pCAT3/P)载体。扩增获得oriP全序列;构建得到携带EB病毒特异性增强子Orip不同结构域的CAT报告质粒pCAT3/P-oriP、pCAT3/P-FR、pCAT3/P-DS、pCAT3/P-(FR+DS)等,质粒中目的基因的插入方向经鉴定正确。
- 廖志勇车小燕徐华张丽娅潘玉先郝卫
- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒目的基因
- EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立
- 2004年
- 目的:建立表达Epstein-Barr(EB)病毒核抗原-1(EBNA1)的肿瘤细胞株,用于EB病毒相关肿瘤的研究。方法:将1 200 bp的EBNA1基因片段插入真核细胞表达载体pcDNA3中,使用脂质体介导pcDNA3/EBNA1质粒进入人鼻咽癌CNE2细胞和人宫颈癌Hela细胞,通过G418进行阳性克隆的筛选,PCR、RT-PCR进行鉴定。结果:成功建立EBNA1基因阳性的鼻咽癌和宫颈癌肿瘤细胞株,经PCR、RT-PCR检测证明两种转基因细胞株稳定表达EBNA1。结论:EBNA1阳性肿瘤细胞株的建立,为体外进行EB病毒相关肿瘤的研究提供细胞模型。
- 张丽娅廖志勇车小燕温坤潘玉先
- 关键词：EBNA1肿瘤细胞株EB病毒
