南京医科大学科技发展基金(09NJMUZ52)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 视网膜Müller细胞透明质酸酶功能分析被引量：1
- 2011年
- 目的分析离体培养的视网膜Müller细胞对透明质酸的降解功能。方法提取的Mller细胞来自酶降解的猪后极部视网膜,并以3种不同细胞标记:胶质纤维酸性蛋白、波形蛋白、谷氨酰胺合成酶进行免疫荧光确认。细胞分为4组,其中1组培养液中加入透明质酸,2组培养液中加入透明质酸和抗integrinα2β1抗体,3组培养液中加入透明质酸和抗CD44抗体,4组培养液中未加入其他试剂。细胞预培养后,收集上清液。按配置聚丙烯酰胺凝胶的方法 ,加入透明质酸,不加入十二烷基硫酸钠制作底物胶。样品在底物胶电泳后,凝胶在酶降解缓冲液中培养24h,淋洗后以5g.L-1亮蓝染色、体积分数7%醋酸脱色,观察有无透明质酸降解后形成的脱色条带。结果 93.8%细胞胶质纤维酸性蛋白抗体染色阳性,94.6%细胞波形蛋白抗体染色阳性,88.6%细胞谷氨酰胺合成酶抗体染色阳性。培养的Mller细胞有降解透明质酸的功能,(4组)表现为蓝色背景(透明质酸染色)下的淡白色双条带(透明质酸降解后脱色);将细胞和透明质酸预培养可使脱色条带明显增厚,表现为明亮的白色条块(1组),同时加入透明质酸和integrinα2β1抗体产生相似的白色条块(2组),同时加入透明质酸和CD44抗体使脱色恢复为淡白色双条带(3组)。结论培养的Mller细胞有降解透明质酸的功能,细胞与透明质酸的相互作用明显加强细胞降解透明质酸的功能,CD44抗体可能减弱这种加强作用,integrinα2β1抗体无明显作用。
- 陆融乔伟振赵伟
- 关键词：MÜLLER细胞透明质酸酶
- CD44抗体对视网膜Müller细胞降解透明质酸功能的影响
- 2011年
- 目的观察CD44抗体对视网膜Mueller细胞降解透明质酸（HA）功能的影响。方法培养的猪后极部视网膜Mueller细胞．取第2代细胞用于实验。细胞分为1、2、3组。每组含12×10^3个Mueller细胞。其中1组培养液中未加入其他试剂；2组培养液中加入0．01mg／mlHA；3组培养液中加入0．01mg／mlHA和10μg／ml抗CD44抗体。2、3组细胞和HA、单克隆抗CD44抗体预培养．收集1、2、3组上清液．行HA-底物胶电泳法和类酶链免疫吸附测定（ELISA）法检测。结果HA-底物胶电泳法分析结果显示．1组表现为蓝色背景下的白色细淡的双条带；2组双条带明显增厚，合并成较粗和明亮的脱色条块；3组脱色条块回复为细淡的双条带。类ELISA法检测结果显示．1、2、3组口发光度[A，旧称光密度（OD）]值分别为0．310±0．025、0．093±0．051、0．025±0．069。2组A值较1组A值明显降低，与1组A值比较．差异有统计学意义（t=28．1．P〈0．01）；3组A值与1组A值比较．差异无统计学意义（t=4．92，P〉0．05），与2组A值比较．差异有统计学意义（t=26．9，P〈0．01）。结论Mueller细胞与HA的相互作用可加强细胞降解HA的功能，CD44抗体可降低这种加强作用。
- 陆融乔伟振
- 关键词：MUELLER细胞
- Vinculin和α-平滑肌肌动蛋白在视网膜前膜细胞及其迁出传代细胞中的表达
- 2011年
- 目的分析vinculin和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在视网膜前膜细胞及其迁出传代细胞中的表达。方法手术中取得视网膜前膜共17例,选取倒置相差显微镜下易于展开和辨别细胞形态的组织5例,清洗展开固定后,以单克隆抗vin-于明胶涂层的盖玻片上培养,将迁出的细胞培养传代,免疫荧光染色后在荧光显微镜下观察。结果术中取得的视网膜前膜细胞抗vinculin和α-SMA抗体染色阳性。12例视网膜前膜组织中,7例培养24h后细胞从组织迁移至明胶涂层的盖玻片上并增殖,其中4例可培养至第2代,4例中2例可培养至第3代,这些细胞抗vinculin和抗α-SMA抗体染色均呈阳性。结论术中剥离的视网膜前膜细胞及其迁出传代细胞均表达vinculin和α-SMA,提示这些细胞具有较强且较恒定的收缩能力。
- 陆融乔伟振
- 关键词：VINCULINΑ-平滑肌肌动蛋白视网膜前膜
