上海市国际科技合作基金(055407036)
- 作品数：3 被引量：9H指数：1
- 相关作者：李卫华戚中田缪晓辉赵克开朱诗应更多>>
- 相关机构：第二军医大学广州医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金上海市国际科技合作基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒X基因转染人肝癌细胞株双向凝胶电泳图谱分析被引量：1
- 2008年
- 目的研究转染HBVX基因的人肝癌细胞株中蛋白质表达谱的改变，为筛查在HBV相关性肝细胞癌发生中发挥重要作用的关键蛋白质分子奠定基础。方法利用分子生物学方法建立稳定表达HBVX蛋白（HBx）的肝癌细胞株HepG2-HBx，同时设空载体pcDNA3转染细胞HepG2-pcDNA3及HBV全基因转染的人肝癌细胞株HepG2．2．15为对照。PCR法扩增Neo基因检测质粒DNA片段的插入，免疫印迹法检测HBx蛋白的表达。利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离3种肝癌细胞株HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2．2．15的总蛋白，用图像分析软件比较、分析、识别细胞间的差异表达蛋白质。统计学分析采用t检验。结果获得分辨率高、重复性好的3种细胞的双向电泳（2-DE）图谱。软件分析表明，HepG2-pcDNA3、HepG2-HBx和HepG2．2．15细胞的2-DE凝胶可识别蛋白点分别为（2095±137）、（2188±105）和（2109±20）个。比较HepG2-pcDNA3与HepG2-HBx细胞的2-DE图谱发现37个差异显著的蛋白点，其中21个在HepG2-HBx表达上调，16个下调，6个表达量差异在5倍以上（t一0．027，P〈o．05）；HepG2．2．15与HepG2-HBx细胞相比，有38个差异显著的蛋白点，其中35个在HepG2-HBx细胞中上调，3个下调，14个表达量差异在5倍以上（t=0．031，P〈0．05）。结论HBx基因转染引起人肝癌细胞株蛋白质表达谱的变化，可能与感染的肝细胞发生恶性转化的分子生物学机制有关。
- 李卫华缪晓辉戚中田朱诗应赵克开
- 关键词：蛋白质类转染
- 应用蛋白质组学技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白作用相关蛋白质
- 2010年
- 目的应用比较蛋白质组学方法寻找HBVX蛋白（HBx）作用相关蛋白，揭示HBx在肝细胞癌发生、发展中作用的分子机制。方法以转染HBx基因的人肝癌细胞株HepG2-Px和转染空白载体的人肝癌细胞株HepG2P。为研究对象，应用二维凝胶电泳技术分离2种细胞的总蛋白质，图像分析识别差异表达的蛋白质点，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱及电喷雾电离串联质谱对差异表达的蛋白质点进行鉴定，蛋白质免疫印迹法验证部分差异表达的蛋白质在2株细胞中的表达水平。数据比较采用t检验。结果得到分辨率较高、重复性较好的2株细胞系的二维凝胶电泳图谱，质谱分析共鉴定32个HBx作用相关蛋白，包括25个在HepG2-Px中表达上凋的蛋白瓶，如热休克蛋白90AB1、Bcl-2相关抗原-2，细胞核磷酸化蛋白、细胞内氯离子通道-1、基质金属蛋白酶3和黑色素瘤相关抗原12等，7个表达下调的蛋白质，如Wnt5a等。蛋白质印迹验证了部分差异表达蛋白在2株细胞中的表达水平。结论筛选出的差异表达蛋白主要涉及宿主细胞的基因转录、信号转导、细胞生长和增殖、细胞周期、细胞凋亡、DNA修复和细胞代谢、免疫应答等过程。提示这些与HBx相互作用的蛋白质可能与肝细胞癌的发生、发展相关，为揭示HBx的作用机制提供了线索。
- 李卫华缪晓辉戚中田倪武赵克开朱诗应
- 关键词：肝炎病毒乙型病毒蛋白质组学质谱分析法印迹法蛋白质
- 乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞生长的影响被引量：8
- 2008年
- 目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis Bvirus Xprotein,HBx)对肝癌细胞恶性程度的影响。方法构建携带HBVx基因真核表达载体pcDNA3/HBx,以脂质体介导转染HepG2肝癌细胞,建立可稳定表达HBx的肝癌细胞系HepG2-HBx细胞,同时设空载体pcDNA3转染细胞HepG2-pcDNA3及未转染HepG2细胞为对照组。PCR法扩增Neo基因检测插入的质粒DNA片段,免疫荧光检测HBx的表达。通过生长曲线测定、平板克隆形成实验、MTT比色实验、Hoechst33342核形态学染色观察及流式细胞仪测定,了解稳定转染细胞的生物学行为变化。结果与对照组相比,转染pcDNA3/HBx的HepG2-HBx细胞生长速度加快,其倍增时间缩短(28h对32.5h或34h,P<0.05),克隆形成率增加[(10.12±0.23)%对(5.33±0.19)%或(5.19±0.28)%,P<0.05],细胞周期分析显示由G0/G1期-S期的进程明显加快。细胞凋亡检测显示HepG2-HBx细胞可抵抗放线菌素D(ActD)诱导的凋亡作用。结论HBx可提高肝癌细胞的增殖活性,并增强肝癌细胞的抗凋亡能力,增加了肝癌细胞的恶性表型。
- 李卫华缪晓辉戚中田朱诗应赵克开
- 关键词：肝癌细胞乙型肝炎病毒X蛋白细胞周期细胞凋亡
