上海市科学技术委员会资助项目(03DZ19309)
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 鸡VEGF基因的克隆及融合蛋白的表达与分离纯化
- 2008年
- 为获得鸡VEGF基因片段,原核表达GST-cVEG基因,并对融合蛋白进行分离纯化,应用RT-PCR从鸡睾丸中扩增出VEGF片段,将PCR产物克隆至pMD 18-T载体。随后,将cVEGF片段亚克隆至带有GST的原核表达载体pGEX-4T-2中,测序鉴定。将重组质粒pGEX4T2-cVEGF转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导,并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化,纯化产物以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,结果表明,成功地构建了原核表达质粒pGEX4T2-cVEGF。GST-cVEGF融合蛋白在大肠杆菌中得到了表达,Ni-NTA Agarose纯化后得到较纯的蛋白。Western blot分析证实,纯化后蛋白是GST-cVEGF融合蛋白,为进一步研究GST-cVEGF融合蛋白疫苗抗小鼠肿瘤模型奠定了基础。
- 刘倩唐亮谈立松赵玉军
- 关键词：融合蛋白原核表达
