江苏省高校自然科学研究项目(10KJB310006)
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 相关作者：邱文赵聃周建博王迎伟赵晨卉更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金南京医科大学科技发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 川芎嗪对大鼠被动型Heymann肾炎肾小球细胞增生及细胞外基质分泌的影响
- 2011年
- 目的:复制大鼠被动型Heymann肾炎(passive Heymann nephritis,PHN)动物模型,观察中药川芎嗪(Ligus-trazine)对PHN大鼠肾小球细胞增生和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)分泌的影响。方法:给SD大鼠静脉一次性注射抗Heymann的抗血清建立PHN大鼠模型(设正常血清对照组),同时给大鼠腹腔注射川芎嗪注射液(20 mg/100 g体质量,2天1次直至第5周末),然后于注射抗血清后的1,3,5周末时,取大鼠的肾皮质制成切片,分别进行HE染色计数肾小球细胞总数;免疫组化染色检查肾小球内增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅳ型胶原纤维(collagenⅣ,Col-Ⅳ)和纤维黏连蛋白(fibronectin,FN)的表达;另行电镜观察肾小球系膜区超微结构的变化。结果:PHN+川芎嗪组肾小球细胞总数、PCNA和α-SMA的表达与PHN模型组相比,未显示出明显的降低(P>0.05),Col-Ⅳ和FN的表达则显著低于PHN模型组。电镜检查证实,PHN+川芎嗪组大鼠系膜区基质积聚明显减轻。结论:中药川芎嗪能有效抑制PHN大鼠肾小球内Col-Ⅳ、FN的产生,但对细胞增生的影响并不明显。
- 赵晨卉周建博李妍赵聃邵启祥邱文
- 关键词：川芎嗪被动型HEYMANN肾炎肾小球细胞细胞外基质
- 沉默TSP-1基因对亚溶解型C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响
- 2011年
- 目的:研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增殖的影响。方法:设计合成针对TSP-1基因的发夹式siR-NA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,将TSP-1 shRNA(shTSP-1)转染体外培养的大鼠GMC,再给予亚溶解型C5b-9刺激。以实时PCR和蛋白质印迹法检查各组GMC中TSP-1、细胞周期蛋白D2(cyclin D2)及增殖细胞核抗原(proliferative cell nuclear antigen,PCNA)的mRNA及蛋白表达情况。另用3H-胸腺嘧啶核苷酸掺入法(3H-thymi-dine incorporation,3H-TdR)和CCK-8(cell counting kit-8)方法分别检查GMC的DNA合成及细胞数量的改变。最后,观察各组GMC中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达情况。结果:使用shTSP-1沉默TSP-1基因,对于亚溶解型C5b-9刺激GMC后18 h诱导的cyclin D2和PCNA表达及DNA合成均无显著影响,但是shTSP-1能够抑制亚溶解型C5b-9刺激GMC 54 h时细胞数量的增加,同时能下调由亚溶解型C5b-9刺激GMC引起的α-SMA表达。结论:用shTSP-1沉默GMC中的TSP-1基因,可抑制亚溶解型C5b-9刺激GMC的增殖和α-SMA的合成,shTSP-1对GMC增殖的影响可能与其下调α-SMA的表达有一定关系。
- 吴宜琴车楠冯雪凤邱文王迎伟
- 关键词：肾小球系膜细胞血小板反应蛋白-1增殖Α-平滑肌肌动蛋白
- 沉默血小板反应蛋白-1基因对亚溶解型C5b-9诱导肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响
- 2012年
- 目的研究沉默血小板反应蛋白-1(thrombospondin-1,TSP-1)基因对于亚溶解型(sublytic)C5b-9复合物诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响。方法设计合成针对TSP-1基因4个靶点的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA),并构建相应的表达质粒,筛选沉默效率最佳的TSP-1shRNA(shTSP-1)后,将shTSP-1转染体外培养的大鼠GMC,再给予sublytic C5b-9刺激。以Westernblot检查TSP-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)的表达情况。另用ELISA法测定培养上清中总转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和活化TGF-β1的含量。结果核酸序列分析证明,4种TSP-1shRNA重组质粒均构建成功。Western blot实验证实,构建的shTSP-1-3(Thbs1-3)具有最佳的沉默效率。将shTSP-1-3转染大鼠GMC后,在沉默TSP-1基因表达的同时,能明显抑制由sublytic C5b-9诱导的TGF-β1活化及细胞外基质(FN和collagenⅣ)的合成。结论 TSP-1基因表达在sublytic C5b-9刺激大鼠GMC诱导TGF-β1活化及ECM分泌的过程中,发挥了重要的促进作用。
- 邱文李妍周建博赵聃王迎伟
- 关键词：肾小球系膜细胞血小板反应蛋白-1细胞外基质小发夹RNA
- 大鼠XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒的构建及IRF-1结合位点的鉴定
- 2012年
- 目的:构建大鼠X染色体连锁的凋亡抑制蛋白相关因子1(X-linked inhibitor of apoptosis associated factor 1,XAF1)基因启动子(全长和截断)荧光素酶报告质粒,并观察在人胚肾细胞HEK293中过表达干扰素调节因子-1(interferon regulatoryfactor-1,IRF-1)对XAF1基因启动活性的影响,同时,筛选其可能的IRF-1结合位点。方法:采用PCR技术,扩增出大鼠XAF1基因启动子序列(-1497～+166 nt),将XAF1基因启动子插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中获得pGL3-XAF1-QC,与大鼠野生型IRF-1表达质粒(pcDNA3.1-IRF-1)共转染HEK293细胞,检测其荧光素酶活性,确定IRF-1对XAF1基因的启动作用。同时,应用生物信息学软件预测XAF1基因启动子上IRF-1潜在的结合位点,并构建截断的XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒(pGL3-XAF1-1、pGL3-XAF1-2、pGL3-XAF1-3和pGL3-XAF1-4)。将上述全长和各截断的XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒和IRF-1过表达质粒共转染HEK293细胞,再行荧光素酶活性测定,筛选IRF-1的结合位点。结果:菌液PCR及核酸测序证实,上述荧光素酶报告质粒均构建成功。将pGL3-XAF1-QC和pcDNA3.1-IRF-1共转染HEK293细胞发现,XAF1基因启动子活性显著增加。而将pGL3-XAF1-QC、pGL3-XAF1(1～4号)和pcDNA3.1-IRF-1共转染HEK293细胞后证实,pGL3-XAF1-3的启动活性显著低于pGL3-XAF1-1和pGL3-XAF1-2。提示IRF-1可能结合在大鼠XAF1基因启动子的-337～-47 nt区域。结论:本实验成功构建了大鼠全长及截断的XAF1基因启动子荧光素酶报告质粒,并初步筛查出IRF-1在XAF1基因启动子上的结合区域,为后续研究奠定了基础。
- 周建博邱文卢燕来单锴赵聃王迎伟
- 关键词：启动子生物信息学
