国家自然科学基金(30871682)
- 作品数：7 被引量：27H指数：4
- 相关作者：王志强牛良鲁振华崔国朝李钰婷更多>>
- 相关机构：中国农业科学院郑州果树研究所河南农业大学河南农业职业学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- ‘中油桃9号’及其黄肉芽变的类胡萝卜素代谢和基因表达分析被引量：10
- 2015年
- 以‘中油桃9号’(白肉)及其黄肉芽变的果肉为试材,采用HPLC法对类胡萝卜素的积累水平进行定性和定量分析,实时荧光定量PCR法对类胡萝卜素代谢关键基因的表达水平进行分析。结果表明:在幼果期,‘中油桃9号’与突变体的果肉颜色无明显差异,但在果实成熟时差别很大;幼果期时‘中油桃9号’与突变体的类胡萝卜素总量相近,以β–胡萝卜素、紫黄质和叶黄质为主;果实成熟期‘中油桃9号’的类胡萝卜素总量比突变体高很多,呈现出高含量的紫黄质、β–胡萝卜素和玉米黄质;实时定量表达分析表明,果实成熟期‘中油桃9号’的CCD4转录水平比突变体高得多。果实成熟时CCD4基因的表达差异可能是导致‘中油桃9号’与突变体类胡萝卜素积累差异的主要原因。
- 朱运钦曾文芳鲁振华牛良崔国朝王志强
- 关键词：油桃白肉黄肉芽变类胡萝卜素基因表达
- 半矮生型桃生长跃变期差异表达基因的cDNA-AFLP初步分析被引量：5
- 2011年
- 半矮生型桃"SD9238"是在中国农业科学院郑州果树研究所育种圃实生苗后代中发现的突变体,其早期生长缓慢,5月中旬之后进入迅速生长期,与普通型截然不同。本研究以"SD9238"为研究试材,采用cDNA-AFLP差显技术分析其新梢生长跃变期前后4个生长阶段差异表达基因。研究中共采用256对选择性引物组合,扩增出9021条可分辨的条带,其中有差异的条带共有1987条。初步选取其中11个差异条带,进行克隆和序列测定,生物信息学分析表明,转录衍生片段(Transtript derived fragment,TDF)的主要功能涉及木质素生物合成;蛋白质水解;转录调控及生长调节等,还有一些是未知功能基因。研究所得结果为进一步揭示半矮生桃生长调控的分子机理奠定了基础。
- 李钰婷鲁振华牛良韩世明王志强
- 关键词：CDNA-AFLP
- 桃半矮生性状的SSR标记被引量：1
- 2010年
- 本研究以普通型油桃品种‘晴朗’为母本、半矮生型油桃‘SD9238’后代——‘中油桃14号’为父本杂交的141个F1代单株为试材,对半矮生性状进行了SSR分子标记研究。通过集群分离分析法(bulked segregant analysis,BSA)用位于桃基因组上的56对SSR引物进行了筛选,获得一个与桃半矮生性状相关的SSR标记CPDCT23,该标记在普通型上表现为显性,在半矮型上表现为隐性。进一步分析表明,该标记对F1代单株性状预测的正确率为92.2%,为进一步开展有关控制该半矮生性状的分子机制研究提供参考。
- 韩世明王志强牛良李钰婷刘淑娥李春奇
- 关键词：半矮生型SSR标记
- 半矮生型桃节间长度相关基因的筛选和鉴定被引量：4
- 2013年
- 为了进一步研究调控节间长度相关基因的表达模式及为克隆该半矮生性状的基因提供依据,采用cDNA-AFLP分析方法对半矮生型桃节间"生长跃变期"差异表达的基因进行筛选,并对差异的转录衍生片段(TDFs)进行回收、克隆、测序、功能注释及qRT-PCR验证。采用256对引物,共产生9021个TDFs,有明显差异的TDFs共899个,成功回收到497个TDFs,254条序列与已知基因高度相似。差异表达的基因主要涉及到信号转导、生长发育、转录调控、蛋白质代谢、防御和物质与能量代谢等。选取其中26个基因进行实时荧光定量PCR验证,结果表明26个基因的qRT-PCR表达丰度分析与cDNA-AFLP结果一致。分离到植物生长素、细胞分裂素、油菜素内酯、脱落酸、细胞周期等调控途径中生长调控相关的候选基因,可为阐明节间生长调控机制奠定基础。
- 鲁振华李钰婷王志强牛良崔国朝王玉兰
- 关键词：半矮生型CDNA-AFLP差异表达基因节间长度功能注释
- 半矮生型桃F-box基因的克隆和表达特征分析被引量：4
- 2013年
- 【目的】研究半矮生型桃‘SD9238’F-box基因的序列特征及F-box基因在新梢生长跃变期的表达与节间伸长的关系,为进一步研究该基因调控半矮生型桃植株生长的分子机制奠定基础。【方法】利用基因克隆和RACE技术获得‘SD9238’F-box基因的gDNA及cDNA序列,并分析该基因的序列特征。采用qRT-PCR分析该基因在新梢生长跃变期的表达水平。【结果】获得F-box基因gDNA全长3 650 bp,cDNA全长1 936 bp,GeneBank登陆号为KF023192。该基因ORF长1 509 bp编码502个氨基酸,蛋白质分子质量55.984 kD。生物信息学分析表明,氨基酸序列具有F-box蛋白家族中LRR的结构特征,与蔷薇科中苹果和草莓的F-box基因同源,相似性达98%。QRT-PCR分析结果表明,F-box基因在节间生长跃变期表达量的动态变化与新梢节间的伸长速率动态变化趋势一致,其基因相对表达量在半矮生型桃中于节间生长跃变点5月22日达到最大值,为第一时期的9.4倍;在普通型桃中同样于5月22日达到基因相对表达量的最大值,但只为第一时期的2.2倍。【结论】获得了‘SD9238’新梢中F-box基因KF023192的序列全长,并明确了该基因的序列特征。对该基因在新梢生长过程的动态表达分析显示,KF023192可能参与了半矮生桃新梢节间生长的调控。
- 王玉兰鲁振华王志强牛良崔国朝
- 关键词：F-BOX基因克隆RACEQRT-PCR
- 半矮生桃基因组DNA的提取及SSR-PCR反应体系的优化被引量：2
- 2010年
- 为获得高纯度高质量的DNA和建立稳定的SSR-PCR反应体系,采用常规CTAB法和改进CTAB法提取半矮生桃基因组DNA。结果表明:改良CTAB法提取的DNA纯度高,多糖和蛋白质含量低,可用于SSR反应。同时,通过对影响SSR反应的6个要素设计正交试验,确定了最优的SSR-PCR反应体系,20μL反应体系为:25 mmol/LMg2+1.5μL、2.5 mmol/L dNTPs 2μL、5 U的Taq酶0.22μL、10×Buffer缓冲液4μL、10 mmol/L引物0.6μL、20 ng模板0.8μL,优化的退火温度为57.6℃。
- 韩世明王志强牛良鲁振华刘淑娥宋银花李春奇
- 关键词：基因组DNASSR
- 桃SRAP-PCR反应体系建立及与半矮生型相关标记的研究被引量：1
- 2010年
- 试验采用常规CTAB法提取了桃叶片基因组DNA,并以半矮生型桃基因组DNA为模板,通过对影响扩增结果的Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq酶浓度及引物浓度的梯度试验,对桃SRAP-PCR反应体系进行了优化.结果表明:桃SRAP-PCR的最佳反应体系为DNA模板25～30ng,10×Buffer2μL,Mg2+浓度2.5mmol·L-1,dNTP浓度0.25mmol·L-1,Taq酶1.1U,引物浓度0.3μmol·L-1.通过BSA法建立半矮生型和普通型基因池,从266对SRAP引物中筛选出21对与桃半矮生性状相关的SRAP标记,并通过对18个个体的扩增检测,发现了1个与半矮生性状相关的标记.
- 鲁振华王志强牛良宋银花刘淑娥
- 关键词：SRAP分子标记半矮生型
