江苏省高校自然科学研究项目(10KJB310011)
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 相关作者：李新莉樊赛军孟庆慧徐久宏高耀明更多>>
- 相关机构：苏州大学华盛顿特区乔治敦大学更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 辐射敏感性新基因UHRF1真核表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建UHRF1的真核表达载体,并验证其在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达。方法采用RT-PCR方法,从乳腺癌细胞MCF-7的总cDNA中扩增出2.3kb的UHRF1基因的cDNA片段,经限制性内切酶KpnⅠ与XhoⅠ双酶切,定向克隆到真核表达载体pcDNA3中,构建重组质粒pcDNA3(+)-UHRF1,利用限制性内切酶双酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;构建成功的重组质粒,经脂质体Lipofactamin2000介导转染MDA-MB-231细胞,G418筛选阳性克隆,以RT-PCR和Western blot检测UHRF1的mRNA和蛋白的表达。结果获得全长约为2.3kb的UHRF1基因片段;重组质粒经限制性内切酶XhoⅠ和KpnⅠ酶切、电泳后显示2.3kb的UHRF1目的片段和5.4kb的pcDNA3载体片段,即UHRF1基因的cDNA已正确克隆到真核细胞表达载体pcDNA3中;UHRF1转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后的RT-PCR和Western blot的结果显示:UHRF1的mRNA和蛋白水平均呈现高表达。结论成功构建UHRF1基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定基础。
- 李新莉孟庆慧朱然朱巍樊赛军
- 关键词：基因克隆真核表达载体脂质体
- UHRF1对人乳腺癌细胞MDA-MB-231辐射敏感性的影响及作用机制被引量：1
- 2010年
- 目的 了解基因UHRF1的不同表达水平对乳腺癌细胞MDA-MB-231辐射敏感性的影响及潜在的作用机制.方法 利用克隆形成实验观察细胞存活;流式细胞术测定细胞周期;利用DNA片段分析和Annexin V试剂盒测定细胞凋亡;Western blot测定蛋白表达变化;利用经典的染色体分析,观察染色体畸变（着丝粒环和双着丝粒）.结果 与对照相比较,UHRF1转染可将D0值由2.08 Gy提高至3.17 Gy,即降低MDA-MB-231细胞对X射线的辐射敏感性.利用siRNA抑制UHRF1的表达,可将X射线照射后细胞的生存率由41%降低至17%,即增强了细胞的辐射敏感性.UHRF1的高表达,可诱导G2/M期阻滞,抑制细胞凋亡,下调促凋亡蛋白Bax,上调DNA损伤修复蛋白Ku70和Ku80的表达水平,而且,抑制X射线诱导的染色体畸变.结论 UHRF1的高表达可以抑制细胞凋亡,促进DNA损伤修复.因此,通过抑制UHRF1的表达,可作为临床提高乳腺癌放疗疗效的新靶标.
- 李新莉孟庆慧Eliot M Rosen樊赛军
- 关键词：乳癌
- 大鼠心脏放射损伤对内皮素-1和心肌肌钙蛋白Ⅰ表达水平的影响被引量：3
- 2011年
- 目的观察SD大鼠心脏放射损伤时血清内皮素1(ET-1)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)表达水平的变化,以及将ET-1和cTnⅠ作为放射性心肌损伤诊断指标的可行性。方法采用随机数字表法,将健康雌性SD大鼠30只分为对照组和照射组。照射组大鼠采用直线加速器心前区照射,单次剂量25 Gy。照射后第5、15、30、60天经下腔静脉取血5 ml,离心后取血清,采用ELISA试剂盒,分别测定血清ET-1和cTnⅠ含量。结果照射组大鼠血清ET-1含量均高于对照组,但只有在照射第5天和第15天时与对照组的差异有统计学意义(分别P<0.01和0.05)。cTnⅠ的含量在照射后30 d内均高于对照组,而后下降,但只有照射后第15天(P<0.05)和第30天(P<0.01)时与对照组间的差异有统计学意义。结论大鼠心脏放射损伤的早期血清ET-1和cTnⅠ含量即明显升高,可将血清ET-1和cTnⅠ作为诊断早期放射性心肌损伤的敏感性与特异性指标。
- 徐久宏高耀明张军宁李新莉
- 关键词：心脏内皮素-1
