国家自然科学基金(81170808)
- 作品数：6 被引量：42H指数：5
- 相关作者：杨茂伟曹军军郭宝磊梁单杨蕾更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国人民解放军95935部队锦州医科大学更多>>
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- 高糖环境下成骨细胞通过MCP-1/c-fos/NFATC1通路促进破骨细胞分化被引量：10
- 2019年
- 目的探讨高糖环境下成骨细胞对破骨细胞分化的影响。方法应用成骨细胞系MC3T3-E1细胞与破骨细胞前体细胞系Raw264.7细胞构建共培养体系,并应用不同浓度(5.5和20.5 mmol/L)葡萄糖对共培养体系进行刺激。使用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色测定破骨细胞分化,采用Western blotting检测单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)、c-fos、NFATC1通路蛋白的表达。ELISA法检测培养液中MCP-1的含量。结果高糖刺激显著增高了本系统内成骨细胞MCP-1的表达,同时升高了系统中MCP-1的含量。TRAP染色显示,与正常组相比,高糖环境下TRAP+细胞数量显著增加。Western blotting结果显示,与正常组相比,高糖刺激下的破骨细胞c-fos、NFATC1表达明显升高。结论在共培养系统中高糖促进了成骨细胞分泌MCP-1,激活MCP-1/c-fos/NFATC1通路,进而增强破骨细胞的分化。
- 孙骏张磊赵威马洪冬王新栋李海天杨茂伟
- 关键词：单核细胞趋化蛋白-1糖尿病性骨质疏松成骨细胞破骨细胞
- 不同浓度锌对成骨细胞MC3T3-E1骨保护素基因表达和细胞增殖的影响被引量：5
- 2011年
- 目的研究不同浓度锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响。方法取小鼠的成骨细胞系MC3T3-E1培养并随机分为4组,A组加入10μmol/L硫酸锌;B组加入50μmol/L硫酸锌;C组加入200μmol/L硫酸锌;D组作为空白对照。培养48h后提取细胞RNA,RT-PCR分析成骨细胞骨保护素(OPG)mRNA表达,Elisa检测细胞培养上清中骨保护素表达水平。MTT法测定成骨细胞增殖率。结果 A组、B组、C组与D组细胞骨保护素基因表达比值分别为0.461±0.051、1.068±0.123、0.244±0.044、0.548±0.089,A组与D组差异不明显,B组高于D组(P<0.01),C组低于D组(P<0.01)。Elisa结果与RT-PCR相同。细胞增殖率之间差异有显著性意义,B组高于D组(P<0.01),C组低于D组(P<0.01)。结论 50μmol/L的锌促进成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖,200μmol/L的锌则抑制成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖。而10μmol/L的锌对成骨细胞骨保护素基因表达和细胞增殖的影响不大。
- 杨茂伟梁单郭宝磊曹军军杨蕾郭晓东高志达
- 关键词：成骨细胞锌骨保护素细胞增殖
- 氟通过胞外信号调控激酶通路对成骨细胞增殖作用的影响被引量：7
- 2012年
- 目的观察氟通过胞外信号调控激酶（ERK）通路对成骨细胞（MC3T3-E1）增殖作用的影响。方法取小鼠成骨细胞（MC3T3-E1）进行体外培养，加入不同浓度的氟（F-，0、200、400、600、1000、2000、4000、8000、10000μmol／L）培养24、48h，甲基噻唑蓝（MTr）法筛选出促进细胞增殖的最适浓度。根据最适浓度，将成骨细胞单纯随机分为3组：对照组（F-，0μmol／L）、染氟组（F-，400／μmol／L）、染氟抑制组（F-，400μmol／L＋PD91805，10μmmol／L）。培养48h后应用流式细胞术检测各组细胞周期；Westernbolt法和免疫荧光法检测各组磷酸化ERK（P-ERK）蛋白表达。结果400Ixmol／L的氟是促进成骨细胞增殖的最适合浓度。与对照组比较[（76．12±10．08）％、（2．064-0．31）％]，染氟组G0／G1期细胞数[（63．044-8．12）％]明显减少，S期细胞数[（9．13±2．08）％]明显增多（P均〈0．05）；而染氟抑制组G0／G1期细胞数[（92．11±9．01）％]明显增多（P〈0．05）。Westernblot结果表明，与对照组[（100．00±0．00）％]比较，染氟组成骨细胞P-ERK蛋白表达水平[（131．244-13．88）％]明显增高（P〈0．05），染氟抑制组P-ERK蛋白表达[（91．33±9．68）％]未见明显改变（P〉0．05）；免疫荧光法检测结果与Westernblot法相似。结论400txmol／L氟可以促进成骨细胞增殖，ERK通路在氟促进成骨细胞的增殖作用中起到了关键的作用。
- 郭晓东杨茂伟梁单郭宝磊曹军军杨蕾
- 关键词：成骨细胞氟细胞增殖细胞外信号调节MAP激酶类
- 高糖通过线粒体途径诱导成骨细胞凋亡被引量：7
- 2012年
- 线粒体途径是细胞凋亡的重要途径之一.在特定的刺激下,例如高糖条件,可以通过caspase依赖性和非依赖性两种途径诱导多种细胞凋亡.但线粒体凋亡途径在高糖引起成骨细胞凋亡中所起的作用,目前尚不清楚.本研究证明,高糖可以通过线粒体凋亡途径诱导成骨细胞凋亡.AnnexinV-FITC/PI流式细胞学检测显示,高糖可诱导MC3T3-E1细胞凋亡.Western印迹检测发现,不同浓度D-葡萄糖(11,22,33 mmol/L)可以引起线粒体中Bax蛋白表达的增加,使Bax蛋白由细胞质中易位到线粒体,激活了线粒体凋亡途径.JC-1荧光探针检测证实,高糖处理成骨细胞后,线粒体膜电位明显降低,表明线粒体途径被激活.而细胞质中的细胞色素c、凋亡诱导因子(AIF)表达增加,细胞色素c和AIF从线粒体中释放到细胞质中,释放到细胞质中的细胞色素c使caspase-3、caspase-9剪切活化,从而激活了caspase依赖性凋亡途径.因此,线粒体凋亡途径可能是高糖诱导成骨细胞凋亡过程中一个重要的途径.
- 曹军军杨茂伟郭宝磊梁单
- 关键词：高糖线粒体途径成骨细胞凋亡
- 褪黑素在2型糖尿病骨质疏松大鼠骨组织的药物存留及对骨微结构改善的作用被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨不同浓度褪黑素在2型糖尿病骨质疏松(type 2 diabetic osteoporosis,T2DOP)大鼠骨组织中的药物存留情况及对T2DOP大鼠骨微结构的改善作用。方法:选取SD大鼠95只,其中60只采用高糖高脂饲料结合小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法建立T2DOP大鼠模型,2个月后通过检测大鼠血糖及胰岛素敏感指数,确定造模成功45只。随机选取30只造模成功和30只正常SD大鼠行褪黑素分布实验,分别将两组大鼠再根据注射褪黑素的浓度分成造模高浓度(50 mg/kg)组、造模低浓度(10 mg/kg)组、正常高浓度(50 mg/kg)组和正常低浓度(10 mg/kg)组,每组15只;按取材的时间点(5、15、30、60、120 min)再分成5组,每组3只。对每组大鼠骨组织进行预处理,而后采用高效液相色谱法检测骨组织中褪黑素的药物浓度。另取15只造模成功大鼠,根据是否注射褪黑素及其浓度分为单纯造模组、高浓度(50 mg/kg)褪黑素组和低浓度(10 mg/kg)褪黑素组,每组5只,再取5只正常大鼠作为对照(正常大鼠组),处理8周后运用Micro-CT检测骨微结构的改变。结果:药物分布实验结果显示,在腹腔注射褪黑素后各组大鼠骨组织中均有药物存留,均在给药30 min后药物浓度达到最高,120 min后显著降低。其中正常高浓度组与正常低浓度组相比,在5个时间点两组药物浓度无明显差异;造模高浓度组与造模低浓度组相比,在5个时间点两组药物浓度亦无统计学差异。而造模高浓度组在5、15、30、60、120 min 5个时间点的药物浓度分别为(7.613±2.568)ng/ml、(13.983±2.262)ng/ml、(18.816±1.291)ng/ml、(6.172±1.962)ng/ml、(1.112±0.566)ng/ml,均高于正常高浓度组各时间点的药物浓度。Micro-CT结果显示褪黑素治疗8周后,高浓度组的骨密度[(205.72±28.41)g/cm 3]明显低于低浓度组[(223.63±35.41)g/cm 3],但两组均显著高于正常大鼠组[(158.31±31.86)g/cm 3],各组相比差异有统计学意义。结论:外源性褪
- 张磊马洪冬王新栋李海天孙骏杨茂伟
- 关键词：糖尿病骨质疏松
- 枸橼酸铁铵通过提高ROS水平激活MAPK通路并诱导成骨细胞凋亡被引量：12
- 2013年
- 目的:探讨铁超载提高人成骨细胞(hFOB1.19)活性氧(ROS)水平在激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路和诱导细胞凋亡中的作用。方法:采用细胞贴壁法培养成骨细胞hFOB1.19,将不同浓度枸橼酸铁铵(100、300、500μmol/L)加入细胞培养基,用MTT法检测成骨细胞增殖活性;DCFH-DA荧光探针检测成骨细胞ROS水平;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Western blotting检测MAPK通路相关蛋白。结果:枸橼酸铁铵处理成骨细胞后,细胞增殖活性明显降低,早期凋亡和总死亡率显著增加;不同浓度的枸橼酸铁铵处理成骨细胞后,其ROS水平分别增高至(35.73±2.52)%、(62.89±4.24)%和(76.06±3.55)%,MAPK通路相关蛋白的表达也明显增加并呈剂量效应关系,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以在降低ROS水平及MAPK通路相关蛋白表达的同时抑制枸橼酸铁铵所致的细胞凋亡。结论:枸橼酸铁铵能使成骨细胞增殖受到抑制,并且通过增加细胞内ROS水平,激活MAPK通路,诱导成骨细胞凋亡。
- 曹军军杨茂伟郭宝磊梁单
- 关键词：细胞凋亡MAPK信号通路
