国家自然科学基金(30270292)
- 作品数：4 被引量：12H指数：2
- 相关作者：袁静明蘧艳峰郭晨云郝志波郭素堂更多>>
- 相关机构：山西大学山西省肿瘤研究所中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因疫苗pcDNA-AChR_(α211)免疫小鼠建立重症肌无力动物模型被引量：8
- 2006年
- 目的:用基因疫苗pcDNA-AChR_(α211)免疫C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力模型(EAMG)。方法:将人乙酰胆碱受体α亚基N端的主要免疫区(AChR_(α211))的基因片段插入到穿梭载体pcDNA3.0中,构建基因疫苗pcDNA-AChR_(α211)。大量提纯质粒pcDNA-AChR_(α211)后肌肉注射C57BL/6小鼠。用ELISA法检测小鼠血清中抗AChR_(α211)的IgG(ACh-RAb),并用PCR方法检测外源基因在小鼠各组织器官中的分布情况。结果:双酶切鉴定和序列测定表明构建了含正确目的基因阅读框的重组质粒pcDNA-AChR_(α211),ELISA分析表明该基因疫苗免疫的C57BL/6小鼠血清中含有AChRAb,且免疫三个月后在小鼠的肌肉、肝、脾、肾中仍可检测到目的基因AChR_(α211)的存在。结论:重组质粒pcDNA-AChR_(α211)作为基因疫苗能够诱导实验性自身免疫性重症肌无力。
- 郝志波郭晨云蘧艳峰袁静明
- 关键词：基因疫苗PCDNA3.0体液免疫应答
- AChR_(α211)的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用被引量：2
- 2005年
- 目的 在毕赤酵母(P .pastoris)中分泌表达AChRα2 1 1 ,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。方法 以质粒pUC AChRα2 1 1 为模板,PCR扩增人AChRα2 1 1 DNA片段,插入真核表达载体pPIC9K中。重组质粒转入P .pastorisGS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα2 1 1 ,用SepharoseQ离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化。Westernblot和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。结果 双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα2 1 1 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中。重组菌P .pastorisGS115 pPIC9K AChRα2 1 1 经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα2 1 1 ,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95 %纯AChRα2 1 1 ,并制备成免疫吸附剂。Westernblot和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性。免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb。结论 在P .pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα2 1 1 ,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα2 1 1 Sepharose ,可清除肌无力患者血清中的AChRAb。
- 郭晨云郝志波李卓玉袁静明
- 关键词：分泌表达ACHRAB重症肌无力免疫吸附剂
- 截短型细胞毒素Gelonin的分子构象和生物活性
- 2006年
- 为了探索免疫络合物中具杀伤靶细胞的毒素,gelonin的结构与功能的关系,根据化学合成的gelonin基因序列和3维分子构象设计了N端区Gly,Leu,Asp和或C端区Asp,Lys,Asp,Pro,Lys缺失的gelonin.以重组质粒pEgel为模板,在相应引物存在下,用PCR法获得5′端区和或3′端区碱基序列缺失的gelonin基因片段.经克隆、表达和纯化得到3种截短型gelonin(GN3、GC5、GN3C5).CD谱和荧光谱表明,完整型gelonin(GO)与截短型gelonin的分子构象有明显的差异.它们的构象变化与类DNase活性和抑制肿瘤细胞生长的能力均为GO≥GN3>GC5>GN3C5.结果再一次证明了具有α+β型结构蛋白,gelonin的构象与生物活性的一致性.
- 蘧艳峰李卓玉郭晨云郭素堂史天良袁静明
- 关键词：纯化构象肿瘤细胞抑制
- 细胞毒素Gelonin的结构功能及其在抗癌治疗中的应用前景被引量：2
- 2006年
- 核糖体失活蛋白(RIPs)是一类存在于某些高等植物体内的天然抗癌活性成分,分为Ⅰ型即单链RIPs和Ⅱ型即双链RIPs。细胞毒素Gelonin属于单链RIPs,相对分子质量约为30×103,具有Ⅰ型RIPs的生物学活性。综述了细胞毒素Gelonin的结构、生物学活性以及在抗癌治疗中的应用前景。
- 蘧艳峰郭素堂袁静明
