天津市自然科学基金(09JCZDJC17300)
- 作品数：8 被引量：7H指数：1
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- 相关机构：中国医学科学院中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- HAPO蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定
- 2009年
- 目的:为了得到可溶性表达的人促血液血管细胞生成素(HAPO)蛋白,构建含HAPO基因片段的pET22b(+)表达载体,获得纯化的HAPO蛋白并检测其生物学活性。方法:利用RT-PCR技术从人胎肝中获得HAPO cDNA片段,并克隆至表达载体pET22b(+)中,利用基因工程菌BL21(DE3)进行表达,产物利用Ni2+-螯合亲和层析及SP Sepharose FF柱层析分离纯化。采用黏附实验检测HAPO对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)黏附性的影响。结果:从人胎肝中克隆出长为897 bp HAPO目的片段,成功构建重组质粒pET22b(+)-HA-PO,其表达的融合蛋白以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的10%,经分离纯化融合蛋白的纯度可达80%。活性测定结果表明HAPO以剂量依赖性方式增加HUVEC的总黏附性。结论:可溶性表达了HAPO蛋白,并用体外实验证实HAPO对造血干/祖细胞归巢有一定促进作用。
- 李彬王晓静刘拥军韩忠朝庞天翔
- 关键词：可溶性表达分离纯化人脐静脉内皮细胞
- DNA损伤时钠氢交换蛋白1在K562和HL-60细胞中的表达和对细胞凋亡的影响
- 2011年
- 本研究主要探讨在依托泊苷引起的DNA损伤下,BCR-ABL阳性细胞系K562中钠氢交换蛋白-1(NHE1)的表达变化情况,并初步探讨其在何种水平被调控。采用实时定量PCR技术检测NHE1在mRNA水平的表达;Western blot检测依托泊苷对细胞NHE1在蛋白水平的影响;流式细胞术测定细胞凋亡情况;构建NHE1启动子区荧光素酶报告载体,并测定不同依托泊苷浓度作用下的荧光素酶活性。结果表明:DNA损伤引起HL-60细胞NHE1在mRNA和蛋白水平升高(p<0.05),在K562细胞中未发现明显变化(p>0.05);依托泊苷对HL-60细胞有明显的促凋亡作用,阻止细胞内pH值的升高可以降低依托泊苷的促凋亡作用,依托泊苷对K562细胞凋亡率无明显影响;K562细胞在DNA损伤时,NHE1启动子区构建的荧光素酶表达载体活性升高。结论:依托泊苷造成的DNA损伤,促进HL-60细胞凋亡,并且依赖pHi的改变;在K562细胞中NHE1表达没有改变,但其转录活性升高。
- 李华文王立洪王建常国强金薇娜蔺亚妮高伟王若君马丽庞天翔
- 关键词：NHE1DNA损伤K562HL-60细胞凋亡
- CIAPIN1基因在白血病患者骨髓单个核细胞中表达的研究被引量：2
- 2011年
- 本研究旨在检测CIAPIN1基因在白血病患者中的表达,探讨其在白血病中的作用。收集112例初治白血病患者的新鲜骨髓,用TRIzoL一步法提取细胞总RNA、合成cDNA、以β-actin为内参,应用实时定量PCR方法检测CIAPIN1mRNA的表达;实验中选择10例正常人的骨髓作为对照。结果表明:骨髓单个核细胞(MNC)中CIAPIN1mRNA在急性髓系白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)和慢性髓系白血病(CML)患者中的表达均高于正常人(p<0.05);在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的表达与正常人相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论 :CIAPIN1基因在初治白血病患者MNC中表达升高,其表达上调在白血病的发病中可能有一定的作用。
- 李彬李庆华蔺亚妮金薇娜庞天翔
- 关键词：白血病基因表达实时定量PCR
- 同源重组细胞基因敲除与siRNA基因沉默的效果比较被引量：1
- 2010年
- 本研究比较细胞系同源重组基因敲除(gene knockout)与siRNA基因沉默(gene silence)二种技术方法用于研究蛋白功能方面的效果差异。对鸡B淋巴细胞瘤来源的DT40细胞系,应用基因打靶技术分离出Sam68基因缺失的细胞株,并且利用稳定表达siRNA的质粒pSilencer-Sam68得到Sam68基因沉默的细胞株。与野生型细胞株相比,对这些细胞株进行Sam68的功能解析。结果表明:Sam68基因缺失细胞表现出明显的生长速度迟缓,通过细胞周期检测揭示这些细胞生长速度延迟是由于细胞周期中的G2/M期延长;但在Sam68基因沉默细胞中却没有看到这些变化。结论:针对活细胞中的蛋白功能研究,应用细胞系基因敲除技术比siRNA基因沉默技术能够得到更加清晰的实验结果。
- 李庆华金薇娜张华梅茹永新庞天翔
- 关键词：基因敲除基因沉默
- Cariporide对宫颈癌HeLa细胞体外转移及MT1-MMP表达的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:通过体外实验研究钠氢交换蛋白1(NHE1)特异性抑制剂Cariporide对人宫颈癌HeLa细胞体外转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用Cariporide处理HeLa细胞,采用细胞-基质粘附实验、细胞划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测Cariporide对HeLa细胞的粘附、迁移和侵袭能力的影响:Real-time RT-PCR、Western blot法分别检测Cariporide对HeLa细胞膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)mRNA及蛋白表达的影响结果:细胞-基质粘附实验结果显示,与对照组相比,Cariporide处理过的HeLa细胞体外粘附率降低25%,差异具有统计学意义(P<0.05);细胞划痕实验和Transwell侵袭实验结果显示,Cariporide处理后,HeLa细胞损伤愈合的速度和穿过滤膜的细胞数量均明显少于对照组;Real-time RT-PCR及Western blot结果表明Cariporide可显著降低MT1-MMPmRNA和蛋白水平的表达量(P均<0.05)。结论:Catiporide可有效抑制人宫颈癌HeLa细胞的体外转移能力,其作用机制可能与降低MT1-MMP的表达有关。
- 蔺亚妮王建常国强金薇娜王立洪李华文李庆华庞天翔
- 关键词：膜型基质金属蛋白酶1迁移
- CD44单克隆抗体A3D8通过抑制ERK1/2上调Bim诱导HL-60细胞早期凋亡被引量：1
- 2011年
- CD44单克隆抗体A3D8可抑制急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞的增殖抑制,并诱导其早期凋亡。本研究探讨在此过程中ERK以及BCL-2家族成员的作用机制,为治疗白血病提供新方法和新的药物靶点。用MTT法检测A3D8对HL-60细胞的增殖抑制效应,用流式细胞术检测A3D8对HL-60细胞线粒体膜电位的变化,用实时定量PCR技术检测BIMmRNA表达的变化;用Western blot检测A3D8处理后磷酸化ERK-1/2的表达变化。结果表明:A3D8能显著抑制HL-60细胞的增殖,抑制效率呈现剂量和时间的量效关系,并可进一步诱导HL-60细胞的早期凋亡,而BCL-2家族成员Bim的表达水平也随时间和浓度的变化而改变,磷酸化ERK-1/2的表达水平明显降低。结论 :CD44单克隆抗体A3D8可通过降低磷酸化ERK-1/2的表达来调节Bim,从而诱导HL-60细胞的增殖抑制和早期凋亡。
- 常国强王建高伟王若君王立洪金薇娜蔺亚妮李华文庞天翔
- 关键词：HL-60细胞P-ERKBIM
- 抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化被引量：1
- 2011年
- 本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用。利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,pHi),瑞氏染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR检测基因表达,Western blot技术检测MAPK磷酸化水平的改变。结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)的mRNA水平上调;特异性NHE1抑制剂Cariporide预处理能够促进低氧诱导的K562细胞分化,Cariporide处理后K562细胞的P38和ERK5蛋白激酶磷酸化水平显著增强。结论 :低氧及低氧模拟物能够诱导K562细胞系分化,抑制NHE1活性协同促进低氧诱导的K562细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK蛋白激酶磷酸化水平促进分化。
- 金薇娜王建常国强蔺亚妮王立洪李华文高伟李庆华庞天翔
- 关键词：K562细胞
- 细胞内酸化逆转HL-60、MSC和脐血CD34＋细胞耐药的研究被引量：1
- 2011年
- 本研究主要探讨细胞酸化对罗丹明123(rhodamine Rh123)在不表达或低表达MDR1且分化程度较低的细胞中累积的影响,为抗白血病细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)寻找胞内酸化逆转的新方法。采用实时定量PCR技术检测MDR1基因在mRNA水平的表达;利用高钾缓冲液对细胞进行酸化,应用激光共聚焦显微镜测定HL-60、MSC及CD34+脐血细胞pHi值;采用MTT法观察细胞酸化对细胞活力的影响;应用流式细胞术检测细胞酸化对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞内Rh123累积的影响。结果表明:细胞酸化3小时对HL-60、MSC及脐血CD34+细胞的活力无明显影响,细胞酸化能明显改变细胞对Rh123的累积;此外,细胞分化程度越低,其细胞内Rh123的累积越少。结论 :细胞酸化能逆转HL-60、MSC和脐血CD34+细胞的耐药。
- 王若君常国强李庆华王立洪金薇娜蔺亚妮李华文庞天翔
- 关键词：多药耐药HL-60细胞CD34+
