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黄鳝雌激素受体α基因的克隆、抗体制备及初步分析被引量：2: 2014年; 对雌激素受体α基因的氨基酸序列进行抗原性分析,筛选合适的基因片段进行克隆,经RT-PCR扩增得到大小为945bp的片段,经测序鉴定后,将该片段定向亚克隆于pMAL-c2x表达载体中,转化至TB1感受态细胞中进行诱导表达。经1mmol/L IPTG诱导4h观察到有新的重组蛋白获得了表达,采用SDS-PAGE和Western blot试验进行检测,结果表明表达的重组蛋白的分子质量约为78.1ku,表达产物占菌体总蛋白的42.3%,且具有免疫学活性。进一步纯化和蛋白酶切后,得到单一的雌激素受体α蛋白。以该蛋白免疫小鼠制备抗体,在免疫第7周时达到最大滴度1.158±0.232。将制备的多克隆抗体进行黄鳝性腺免疫组化分析,结果表明其能特异性地与卵巢中的激素受体α反应,在细胞膜上形成褐色沉淀。; 丁炜东曹丽萍曹哲明邴旭文陈克春胡晋鸣; 关键词：黄鳝雌激素受体抗血清免疫组化分析

黄鳝Dmrt3基因在性腺中的甲基化差异被引量：3: 2014年; 黄鳝具有性逆转的特点,为了找到与黄鳝性别调控直接相关的序列位点,分析黄鳝性别相关基因在雌雄中的序列差异,本实验选择了性别相关基因Dmrt3作为研究对象,通过比较该基因在雌雄性腺中的甲基化状态就可以分析出参与性别控制的具体位点。实验通过甲基化敏感的限制性内切酶Hpa II酶切黄鳝的雌雄性腺,根据已知的m RNA序列设计相关引物扩增酶切产物,同时与未酶切的对照组进行比较,分析差异条带并对实验结果进行验证。研究结果发现,Dmrt3-FR2扩增序列中,精巢是去甲基化状态,而卵巢是甲基化状态,可以推测该位点很可能与性别调控相关。本实验补充了从分子学角度研究黄鳝性别调控的不足,同时也验证了用甲基化手段研究黄鳝性别调控的可行性,为其他研究提供了理论依据。; 宋颖邴旭文曹哲明丁炜东; 关键词：DNA 甲基化黄鳝性别控制

不同规格黄鳝消化酶活性的比较被引量：3: 2012年; 以相同环境条件下饲养2个月的黄鳝(Monopterus albus)为试验对象,以酶学方法研究3种规格[(143.81±36.27)g、(76.63±14.43)g、(31.35±5.82)g]黄鳝的肝脏、前肠、后肠蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性以及消化酶(蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶)在肝脏、前肠、后肠中的活性分布。结果表明,黄鳝蛋白酶活性从高到低依次为前肠>后肠>肝脏;淀粉酶活性从高到低依次为后肠>前肠>肝脏;脂肪酶活性从高到低依次为后肠>前肠>肝脏;随着黄鳝体重的增加,肠道蛋白酶活性逐渐升高,而肝脏蛋白酶活性变化不明显;后肠、肝脏淀粉酶活性随着黄鳝体重的增加而升高,而前肠淀粉酶活性降低;黄鳝脂肪酶活性有随着规格变大先升高、后降低的趋势,以中规格黄鳝消化组织的脂肪酶活性最高。; 郇志利何蓝波胡毅戴振炎王晓清肖调义夏敏唐华钟; 关键词：黄鳝淀粉酶蛋白酶脂肪酶

黄鳝AQP1 cDNA的克隆与表达分析被引量：4: 2012年; 采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出黄鳝水通道蛋白(Aquaporin 1,AQP1)基因全长cDNA序列,共1 134 bp,包括163 bp 5'非翻译区、789 bp阅读框以及182 bp 3'非翻译区,阅读框共编码263个氨基酸,分子量计算值为27.8 kDa,理论等电点为7.945。氨基酸组成中,正电荷残基(K,R)总数21个,负电荷残基(E,D)总数19个,极性氨基酸为115个,疏水性氨基酸60个。同源性分析表明,黄鳝与欧洲鳗的相似性高达87%,其次与底(鱼将)、鲷、犬、克氏鲤、猪、珍珠鸟、斑马鱼、半滑舌鳎、非洲肺鱼、蟾蜍、非洲瓜蟾的相似性分别为42.9%,61.2%,46.1%,42.9%,53.9%,47.9%,41.5%,40.1%,33.2%,30.8%,33.2%。生物信息学分析显示,黄鳝AQP1基因所编码的蛋白质以亲水性区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点。定量分析结果表明,AQP1 mRNA主要在卵巢中高表达,其他组织中表达量较少。; 丁炜东曹丽萍曹哲明邴旭文; 关键词：黄鳝卵巢水通道蛋白

黄鳝SOD,AKP,补体C3、C4组织分布研究被引量：3: 2012年; 以在水温28±3℃下饲养的黄鳝(Monopterus ablus)(37.35±0.89 g)为研究对象,以酶学方法研究黄鳝不同免疫组织(血液、体表粘液、肝脏、肠道、肾脏、脾脏)中非特异性免疫相关酶(超氧化物歧化酶(SOD)、酸性和碱性磷酸酶(ACP、AKP)、补体C3、C4)的分布情况。研究结果显示,组织中SOD活性依次为;肝脏>肾脏、脾脏>粘液>肠道>血液(P<0.05);ACP活性依次为:脾脏>肾脏>肝脏>肠道>血液、粘液;AKP活性依次为:肾脏>肝脏>脾脏>肠道>粘液>血液;补体C3的含量依次为:肝脏>肾脏>脾脏>肠道>血液、粘液;补体C4的含量依次为:肝脏>脾脏>肾脏>肠道>血液、粘液。由此可见,超氧化物歧化酶和补体C3、C4主要分布于肝脏中,碱性磷酸酶主要分布于肾脏中,酸性磷酸酶主要分布于脾脏中;而各种非特异性酶和物质在肠道、血液和粘液中也均有少量分布。; 郇志利毛盼何蓝波胡毅黄云戴振炎; 关键词：黄鳝

中草药饲料添加剂对黄鳝性激素含量的影响被引量：1: 2014年; 试验以初始平均体重为(41.2±2.3)g的雌黄鳝和初始体重为(113.5±5.6)g雄黄鳝为研究对象,分别配置含中草药质量浓度为3%、4%、5%的鱼糜饲料,每组设置3个重复,连续投喂31 d(其中前10 d为无中草药的训食阶段,后21 d为添加中草药试验阶段)并进行抽血采样,测定其血清内雌二醇与睾酮的含量,来评价饲料中的中草药浓度对黄鳝性激素含量的影响,实验结果表明:(1)与对照组相比,摄食不含中草药饲料的亲鱼血液中雌二醇与睾酮的含量显著高于含中草药饲料的亲鱼(P<0.05),并且亲鱼血清内雌二醇与睾酮的含量随着中草药浓度的增加而降低(P<0.05);(2)从时间的角度分析得出的结论是,雌鱼血清内的雌二醇含量与雄鱼血清内的睾酮含量,在各个试验组中,都随着时间的积累而呈现降低的趋势(P<0.05)。; 赵庆凯丁炜东邴旭文王建新; 关键词：中草药黄鳝雌二醇睾酮

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公益性行业科研专项(201003076)