四川省教育厅自然科学科研项目(2004A071)
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
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- 相关机构：川北医学院重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析被引量：1
- 2006年
- 目的了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测,酶提取物三维实验检测AmpC酶,双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),等电聚焦(IEF)电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增,将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达,并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药,表型检测AmpC酶为阴性,ESBLs阳性,IEF显示该菌产两种pI分别为8.7及5.4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因,产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药,产CTX-M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药,对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX-M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶,可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。
- 刘刚凌保东谢勇恩周岐新雷军赵廷坤
- 关键词：阴沟肠杆菌超广谱Β-内酰胺酶表型
- 铜绿假单胞菌产β-内酰胺酶研究进展被引量：11
- 2006年
- 铜绿假单胞菌产β_内酰胺酶是其对β_内酰胺类抗生素耐药的主要机制,所产β_内酰胺酶种类繁多、特性各异,并在β_内酰胺类抗生素广泛应用的选择压力下,不断有新的β_内酰胺酶产生。文中对铜绿假单胞菌产β_内酰胺酶(ESBL、AmpC、金属酶)耐药机制的研究进展作了简要综述。
- 赵廷坤周岐新凌保东
- 关键词：Β-内酰胺酶铜绿假单胞菌耐药性
- 硫酸铵反抽提法在纯化β内酰胺酶中的应用
- 2006年
- 硫酸铵价廉，不易导致蛋白质变性，常用于蛋白的分离和纯化。但硫酸铵抽提的分离纯化作用较弱，主要用于蛋白的浓缩。硫酸铵反抽提是根据在硫酸铵溶液中析出的蛋白质再次溶解有较高的选择性原理而建立的纯化方法。本研究采用配对设计对硫酸铵反抽提和抽提两法在纯化超广谱β内酰胺酶（ESBL）中的作用进行了比较，旨在为临床检验科室纯化ESBL提供简便易行的方法。
- 凌保东李苌清谢勇恩雷军余娴
- 关键词：超广谱Β内酰胺酶硫酸铵蛋白质变性纯化方法ESBL
- 铜绿假单胞菌产TEM-29型ESBL基因的克隆及原核表达被引量：2
- 2006年
- 目的研究临床分离铜绿假单胞菌Pa3-104产生的超广谱β-内酰胺酶的基因型,并对其进行原核表达,了解它的相关特性。方法对该临床菌株进行接合试验;采用PCR扩增TEM型β-内酰胺酶编码基因的片段,克隆入pUCm-T载体,在E.coliJM109中表达,双脱氧链终止法测定核苷酸序列,确定基因型;并将TEM型β-内酰胺酶全编码基因克隆入原核表达载体pBK-CMV中进行原核表达;用三维试验检测重组菌产β-内酰胺酶的表型,等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等电点(pI)。结果该临床菌株质粒接合试验为阳性;PCR扩增测序结果显示为TEM型,其基因片段含861个核苷酸,该TEM型β-内酰胺酶的编码基因与GenBank中大肠埃希菌产生的TEM-29的编码基因(Y17584)一致,等电聚焦电泳结果显示该酶的pI为5.4,三维试验证实为ESBL。结论在国内首次从临床分离铜绿假单胞菌中发现TEM-29型ESBL。
- 赵廷坤凌保东周岐新刘刚雷军
- 关键词：铜绿假单胞菌ESBL原核表达
- 铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药关系研究
- 2006年
- 目的:研究铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药关系,并对聚合酶联反应(PCR)-限制性片段长度多态性(RFLP)-DNA单链构象多态性(SSCP)分析铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变的可行性进行评估。方法:以铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因序列为靶序列,用PCR、PCR-RFLP、PCR-SSCP、DNA测序等方法对铜绿假单胞菌ATCC27853及16株临床分离株gyrA基因突变进行对比研究。结果:在8株耐环丙沙星铜绿假单胞菌中,有6株gyrA基因的83位表现出单点突变,其突变方式全为ACC→ATC,导致氨基酸苏氨酸→异亮氨酸的改变;gyrA基因的PCR扩增产物SacⅡ酶切片段与测序结果一致;SSCP分析结果显示,16株细菌中仅2株gyrA带型与ATCC27853相同,其它菌株gyrA带型与ATCC27853均不同。结论:临床分离的铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制主要表现为gyrA基因83位氨基酸密码子突变,应用PCR-RFLP-SSCP系统可快速、准确地检测耐喹诺酮类药物的铜绿假单胞菌gyrA中碱基的变异。
- 赵廷坤凌保东周岐新刘刚雷军
- 关键词：铜绿假单胞菌GYRA基因
- 脱氧核酶抑制细菌TEM-1 β-内酰胺酶基因表达的实验研究被引量：2
- 2007年
- 目的观察10-23脱氧核酶对细菌TEM-1酶基因表达的抑制作用。方法PCR扩增TEM-1酶全编码基因,将其连接入pBK-CMV载体中,并在大肠埃希菌JM109中表达。设计并合成针对blaTEM-1的10-23脱氧核酶、反义寡核苷酸,采用氯化钙法将其分别导入表达blaTEM-1的大肠埃希菌中,观察细菌导入脱氧核酶后,在含氨苄西林(100μg/ml)培养基中的生长活力及β-内酰胺酶活性的变化。结果10-23脱氧核酶导入表达blaTEM-1的大肠埃希菌后,在含氨苄西林(100μg/ml)的培养基中大肠埃希菌的生长活力明显低于反义寡核苷酸和空白对照组,导入脱氧核酶的大肠埃希菌β-内酰胺酶活性也明显低于反义寡核苷酸和空白对照组。结论10-23脱氧核酶能特异性地抑制细菌blaTEM-1酶基因表达。
- 刘刚凌保东谢勇恩林丽赵廷坤雷军
- 关键词：Β-内酰胺酶脱氧核酶基因表达
