国家教育部博士点基金(20050564001)
- 作品数：6 被引量：55H指数：4
- 相关作者：施振旦刘颖黄运茂李孝伟刘志更多>>
- 相关机构：华南农业大学仲恺农业技术学院仲恺农业工程学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 免疫血管活性肠肽调节鸡产蛋和就巢的机理研究被引量：4
- 2011年
- 旨在研究免疫血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)和抑制催乳素(Prolactin,PRL)分泌对鸡产蛋和就巢的影响机制。试验1:对18周龄未开产的泰和鸡,分别在试验d1、d28、d56和d84免疫含VIP羧基端15肽片段的VIP-BSA偶联蛋白,观察对产蛋和就巢的影响。试验2:利用刚开产的23周龄粤黄鸡,在试验d1、d23、d48、d73、d98免疫VIP串联四聚体重组蛋白,观察对产蛋和就巢的影响,并在第98天检测卵泡发育和下丘脑、垂体、F1～F3级LYF颗粒层和膜层相关基因的表达。试验1中免疫VIP组在开产后高峰期(d55～d61)的产蛋率显著低于对照组,但高峰后的(d89～d103)产蛋率显著高于对照组,同时免疫VIP组的就巢发生也要迟于对照组。试验2中,VIP免疫组的产蛋率在试验初高于对照组;在d33将光照从12h延长至16h后,2组的产蛋率均快速上升;产蛋高峰后,免疫组产蛋率快速下降并在d80～d105显著低于对照组。免疫VIP重组蛋白也降低了就巢的发生。2组鸡在d98的大黄卵泡、小黄卵泡和大白卵泡的数量无显著差异。免疫VIP重组蛋白并不影响下丘脑Gn-RH-Ⅰ和VIP、垂体LHβ和FSHβ的mRNA水平,但显著降低了垂体PRL的表达,也显著降低了垂体和下丘脑PRLR的表达。在检测的F1～F3卵泡组织中,免疫VIP重组蛋白也显著降低了F1和F3颗粒层的PRLRmRNA水平,降低了F1～F3颗粒层和膜层的LHR表达量,但对P450scc和StAR的表达量没有影响。两试验结果表明,免疫VIP能够降低PRL的表达和分泌,从而抑制产蛋引发的就巢发生,但是免疫VIP在抑制PRL表达分泌后也会抑制卵泡发育和产蛋,这一机制可能是通过影响卵泡组织LHR的表达而实现的。
- 刘颖陈峰黄运茂梁少东施振旦
- 关键词：血管活性肠肽催乳素产蛋就巢
- 光周期对马岗鹅产蛋、PRL和LH分泌季节性变化的影响被引量：20
- 2007年
- 通过人工控制光照研究了光周期对马岗鹅产蛋、PRL和LH分泌季节性变化的影响.整个试验期间对照组接受自然光照，处理组先后接受2次人工控制长短光照处理.研究结果表明，在非繁殖季节（4-7月），对照组的血浆PRL质量浓度升高（20～30 ng/mL），LH质量浓度下降（〈1 ng/mL），鹅完成换羽；在繁殖季节（8-翌年3月），血浆PRL质量浓度处在低水平（10 ng/mL），LH质量浓度则上升（1～2 ng/mL）；在处理组，2次的延长光照均使PRL质量浓度上升（20～30 ng/mL），LH下降（〈1 ng/mL），母鹅进入休产期并完成换羽；缩短光照则降低PRL质量浓度（10 ng/mL），促使LH分泌（2～3 ng/mL），使母鹅进入产蛋期.试验结果证明，光周期主要是通过影响PRL和LH的分泌来调控马岗鹅季节性繁殖活动.
- 黄运茂施振旦李孝伟刘志刘颖
- 关键词：马岗鹅季节性繁殖光周期
- 具生物活性的重组鸡催乳素的制备被引量：2
- 2009年
- 将鸡催乳素(PRL)成熟肽cDNA片段插入原核表达载体pRSETA的NheI和Hind III位点之间,构建重组表达质粒pPRL-SCAU.将此质粒转化大肠杆菌Escherichia coli菌株BL21(DE3),将重组菌在含氨苄青霉素的LB培养基中培养,再经IPTG诱导,可以诱导表达相对分子质量约为24 500的重组鸡PRL.经0.1 mmol/L IPTG诱导4 h后,表达量达到最高,占总菌体蛋白的30%左右.表达的重组鸡PRL含组氨酸标记,以包涵体形式存在,可经50%Ni-NTA树脂分离纯化,然后在透析复性后分离出可溶性部分.将此可溶性重组鸡PRL对3月龄的鸽子在左侧嗉囊处相同位置隔24 h2次皮内注射,能够显著促进嗉囊上皮的增生.与天然鸡催乳素的增生效果相比,所表达的重组鸡PRL的生物学活性为天然催乳素的17%至25%.
- 岳光芳陈益填刘颖李万利施振旦
- 关键词：复性生物活性
- 鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达被引量：2
- 2006年
- 根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列（GenBank号：D13154）设计并合成1对覆盖编码区58～1249位核苷酸的引物，以家鸡垂体总RNA为模板，经反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法获得了特异性片断，将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌Ecoli DH5α永久保存．通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段，该片段经酶切后克隆到表达载体pRSETA的EcoRⅠ和HindⅢ两酶切位点之间，构建重组质粒pR-PRLR．该质粒在转化感受态细菌E．coli B121（DF．3）后，在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53640左右的重组融合蛋白，表达量在0．1mmol／L IPTG诱导5h时达到最高，约占总菌体蛋白的17．6％左右．表达产物可经体积分数为50％的Ni-NTA凝胶纯化，说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列．
- 刘颖黎敏义刘志李孝伟施振旦
- 关键词：克隆纯化
- 光照对马岗鹅季节性繁殖活动和内分泌的调控被引量：22
- 2008年
- 研究了光照对马岗鹅季节性繁殖活动和内分泌的调控。在整个试验期(2004.01.13-12.18)对照组接受自然光照,处理组接受人工控制的长短光照处理。在非繁殖期(4-7月份),对照组公母鹅血浆PRL浓度升高,LH浓度和公鹅睾酮水平降低,鹅换羽;在繁殖期(8-3月份),公母鹅血浆PRL水平下降,LH浓度和公鹅睾酮水平则上升。在处理组,延长光照均使公母鹅PRL浓度升高,LH浓度和公鹅睾酮水平降低,鹅群进入休产期并换羽;缩短光照则降低PRL水平,促进LH分泌和公鹅睾酮水平上升,鹅群进入繁殖期。整个试验阶段,两组中公鹅甲状腺素T3水平均无明显季节性变化,处理组和对照组母鹅平均产蛋48.8和26.3枚,前者比后者高85.6%。试验结果表明,长光照抑制,短光照促进马岗鹅繁殖活动,光照通过调节PRL和LH的分泌调控马岗鹅繁殖活动的季节性变化。
- 黄运茂施振旦李孝伟刘志刘颖
- 关键词：马岗鹅季节性繁殖光照
- 马岗鹅产蛋-就巢周期内卵泡发育的内分泌调控被引量：11
- 2009年
- 旨在探讨马岗鹅产蛋-就巢周期内卵泡发育的内分泌调控机制。试验1:观察了马岗鹅产蛋-就巢周期内PRL、LH、P4和INB水平的变化和就巢期(第1天)、就巢终止期(第10天)、开产期(第25天)、产蛋高峰期(第40天)、停产期(第55天)和就巢期(第70天)卵泡的发育。试验2:在对马岗鹅终止就巢时(第1天)主动免疫重组鸡PRL蛋白(1 mg.只-1),并在开产前(第23天)和产蛋高峰期(第45天)加强免疫(0.8和0.5 mg.只-1),同时从第33天将每天光照由11 h增至16 h,观察对马岗鹅产蛋和就巢的影响。试验1结果表明,随着就巢的终止,PRL水平下降,LH、P4和INB水平上升。PRL在开产前降至最低,开产后又逐渐上升,就巢期达最高;LH则在开产前和产蛋期呈现两波分泌峰;P4和INB与PRL呈相反变化,在产蛋高峰期最高,就巢期最低。鹅群在第24天恢复产蛋,开产前有约10枚大白卵泡(LWF)发育为小黄卵泡(SYF)和大黄卵泡(LYF);在约30 d的产蛋期内,平均每只产蛋约8枚,产蛋结束后90%的鹅发生就巢。试验2结果表明,对马岗鹅主动免疫PRL蛋白一定程度推迟(P<0.05)了开产后产蛋率的上升,并一定程度抑制就巢的发生;而在延长光照15 d后,免疫组的产蛋和就巢则快速升至与对照组相当水平。整个试验期,2组累计就巢均达到100%,但免疫组比对照组多产蛋1枚(8.0 vs 7.0)。结果提示,PRL和LH的交替分泌调控马岗鹅的产蛋就巢周期;卵泡发育时分泌的INB,以及由P4促进分泌的PRL,调节周期中卵泡发育和产蛋的数量。PRL不仅促进就巢发生并导致周期内较低等级卵泡的闭锁,可能还在开产前后具有促进卵泡发育和产蛋的作用。
- 刘容珍黄运茂李万利田允波施振旦
- 关键词：马岗鹅卵泡发育
