国家自然科学基金(31271051)
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- 神经干细胞与RPE细胞的线粒体交换及其对RPE细胞增生和能量代谢的影响
- 2015年
- 背景 研究表明,干细胞可通过与损害靶细胞进行线粒体交换的方式修复受损细胞.视网膜色素变性疾病是以视网膜色素上皮（RPE）细胞凋亡为病理基础的眼病,干细胞是否能够通过上述机制进行治疗尚不清楚. 目的 研究神经干细胞（NSCs）能否通过线粒体交换机制改善RPE细胞的增生和能量代谢功能.方法 分离Long-Evans大鼠的视网膜进行RPE细胞的培养和传代,取第3代细胞用于实验,采用荧光显微镜检测RPE细胞中RPE65和Bestrophin蛋白的表达.小鼠NSCs C17.2细胞系和带绿色荧光蛋白（GFP）的C17.2细胞（GFP-C17.2细胞）进行培养和传代.分别采用线粒体特异性染色剂Mitotracker-green和Mitotracker-red标记RPE细胞和NSCs线粒体.将RPE细胞与小鼠NSCs进行共培养,用麦胚凝集素（WGA）标记隧道纳米管（TNT）,于激光扫描共焦显微镜下观察共培养的RPE细胞与小鼠NSCs间TNT中线粒体交换方式;采用流式细胞术检测RPE细胞与NSCs共培养前后的细胞周期改变;采用高效液相色谱（HPLC）技术检测共培养前后RPE细胞中ATP、ADP和AMP的质量分数. 结果 培养的第3代RPE细胞生长良好,RPE65和Bestrophin表达阳性细胞均＞85％.NSCs和RPE细胞中线粒体对Mitotracker-red标记的阳性率均＞95％.2种细胞共培养后24 h可见RPE细胞与NSCs间形成的膜性TNT结构,WGA染色呈蓝色荧光.随着时间的推移,NSCs中呈红色荧光的线粒体通过TNT进入呈绿色荧光的RPE细胞中.接受TNT线粒体后,处于G1期的RPE细胞比例较未进行线粒体交换的RPE细胞明显下降,差异有统计学意义（P=0.016）,S期细胞和G2/M期细胞比例分别增加了5％和2％,差异均无统计学意义（P=0.114、0.189）.HPLC检测结果显示,与NSCs共培养后,RPE细胞中ATP、ADP和AMP质量分数分别为（8.77 ±3.68）、（2.76±0.92）和（1.07±0.65） μg/mg,较共培养前的（11.29±2.29）、（3.12±0.95）和（1.59±1.22） μg/mg均有所下降,但�
- 孙荣莎徐海伟阴正勤
- 胚胎干细胞器官克隆进展
- 2013年
- 胚胎干细胞作为多能干细胞在组织再生和功能重建中发挥重要作用。利用胚胎干细胞诱导分化为特定的治疗细胞后进行细胞替代治疗,已在包括神经、心血管和内分泌等多个系统中取得了确切的效果。但同时,胚胎干细胞来源的细胞和组织移植宿主体内存在安全性问题,包括成瘤性、细胞异常分布以及免疫排斥性等。基于胚胎干细胞的器官克隆技术虽然较单纯细胞诱导复杂和困难,但是体外三维培养诱导得到的胚胎干细胞来源器官,如视杯、甲状腺、垂体和小肠等器官与体内发育来源的器官在形态及功能上具有很大的相似性,可能是未来再生医学中器官移植的重要发展方向。
- 陈曦徐海伟阴正勤
- 关键词：胚胎干细胞细胞替代治疗
- 玻璃体腔注射二甲双胍对rd1小鼠视网膜变性的延缓作用及机制研究
- 背景和目的： 视网膜变性（retinal degeneration, RD），包括视网膜色素变性（retinitis pigmentosa, RP）和年龄相关性黄斑变性（age related macular dege...
- 阿洛丹
- 关键词：二甲双胍视网膜色素变性晶体蛋白神经保护
